Clase 1

Fundamentos de neurofarmacología

Regulación de la barrera hemato-encefalica en el tratamiento de enfermedades del SNC

- Rutas de acceso de fármacos al SNC

- El endotelio vascular cerebral como sustrato de fármacos
- Regulación de la permeabilidad endotelial vascular para la liberación de fármacos al
SNC

Buscar un articulo donde se utilice un fármaco y se observe su biodisponibilidad cerebral, o en

SNC o retina (que chequen biodisponibilidad pues)

Buscar otro articulo que mencione un mecanismo para facilitar el acceso a través del SNC.

La piamadre actúa como una barrera (selectivamente permeable). En el plexo coroideo y la

aracnoides hay barrera epitelial tambien. Si se administran drogas en LCR, no es garantía de
que estas drogas lleguen al parenquima cerebral. Muchas regulan su permeabilidad en los
vasos fenestrados del plexo coroideo.

- La barrera hematoencefalica esta en las celulas endoteliales de vasos que irrigan al

cerebro.
o Unidad neurovascular: asociacion directa de neuronas, glia y pericitos con
endotelio vascular. Estas celulas secretan sustancias que regulan la
permeabilidad.

- En 1885 los experimentos de Paul Erlich con el colorante mostraban la

impermeabilidad de cerebro y medula. En 1913 Edwin Ellen Goldman mostro lo
inverso, inyectando en cerebro no se teñia la periferia.
- Reese y kanovsky en 1967observaron diferencias entre las celulas endoteliales de
higado y cerebro. Se dieron cuenta de las uniones estrechas formaban una barrera de
protección especial.

Caracteristicas particulares del EMC (endotelio microvascular cerebral):

- Expresan proteínas de la unión estrecha

- Poseen alta resistencia (resistencia electrica transendotelial), (alrededor de 1900
Ohms x cmˆ2
- Presentan baja endocitosis de fase fluida
 - Tienen una gran cantidad de mitocondrias
- No presentan fenestraciones (espacios entre celulas endoteliales)
- Poseen una lamina basal simple
o Los pericitos son una union fisica, que promuebe la impermeabilidad pero
ademas secretan sustancias para mantener la integridad de la barrera.

Rutas de transporte a tarvés de la BHE

- Via acuosa paracelular (sustancias menores a 500 Daltons)

- Via transcelular lipofilica: sustancias limitadas
- Transporte proteico: algunas sustancias tienen tarnsportadores especificos expresados
en el lumen, para luego ser liberados al parenquima
- Bombas de eflujo: bombas que protejen ante el paso de moleculas, sacan lo que no
deba andar por ahí): por que son citotoxicas
o Puromicina en cultivo endotelial no hace nada por que las bombas de eflujo
protejen esta sustancia
- Transitosis mediada por receptor: Se internalizan despues al entrar al receptor y
señalizan en las celulas, pero ademas podrían liberarse del otro lado
- Transitosis adsortiva: como la albumina o proteínas plasmaticas. Es el metodo clasico
de permeabilidad de las celulas endoteliales. El azul de Evans por ejemplo se acopla a
la albumina, si hay transitosis alta como en enfermedades, la albumina permeabilizaria
junto con el colorante. Pero si la permeabilidad es baja, como en un endotelio
saludable no habra permeabilidad.
- Transitosis mediada por celulas: Algunas celulas como monocitos o liposomas
atarviesan de forma transcelular.

Hay muchas enfermedades que se asocian a la disrupcion de la barrera hematoencefalica.

Estructura de las uniones estrechas:

- En plexos coroideos y las meninges la barrera es epitelial, tienen morfologia columnar;

hay uniones estrechas unicamente localizadas en cara basolateral en la ergion mas
apical, solo un sitio de contacto entre las celulas. Tras la criofractura, aparecen fibras
que representan estas celulas y se ven como collares de perlas. Estos sitios
 electrodensos entre celulas epiteliales. En inmunofluorescencia se ven como
hexagonos.
- Las celulas endoteliales por microscopia tiene muchos puntos de contacto, un
conjunto electrodenso de expresion de proteínas de la union estrecha Aquí las
criofracturas ademas de los collares tienen ademas multiples moleculsa de union
estercha. Las celulas endoteliales son aplanadas. En inmunoflorescencia, las moleculas
de la union estrecha se ven muchisimo mas expresadas y con una forma mas aleatoria.

La polarizacion es muy diferente, y por tanto la permeabilidad de estas barreras es muy

distinta.

Función de la unión estrecha:

- Compuerta: impide paso de moleculas por union entre celula y célula

o La union estrecha impide que las molecuals pasen por la ruta paracelular. Si
la UE esta desensamblada, pasa por compuerta.
- Cerca: Va a impedir el paso a nivel apical o basolateral: Icam o JAM.
o Se refiere a las proteinas que estan en la membrana de la celula endotelial.
CAMs, JAMs y cadherinas se mueven a otro lado.

La mayor parte de las clatrinas son vesiculas que se reciclan, y las claudinas las que se van a
lisosoma.

Composición molecular de la UE

- Claudina regulan paso de iones por via paracelular gracias a las cargas que posee
o Claudina 5 es la principal
- Ocludina. se observo formando contactos en las uniones estrechas. No tiene carga,
pero no se conoce bien su funcion mas que aumentar el contacto de una célula y otra.
Disminuye su permeabilidad al estar en contacto con los bordes, pero además se
asocia a proliferaci+on y regulacion de otros procesos celulares aparte de
permeabilida.
- Proteinas de plataforma: se unen a las proteinas anteriores y ademas se unen a
filamentos de actina (ZO1, ZO2 y ZO3)
 o El citoesqueleto de actina da morfología, estructura y polarización. Si se rompe
este citoesqueleto, se modifican las proteínas plataforma y por tanto cambia la
integridad de la BHE.
o Hay todo un grupo de proteínas que interactuan con ZO para su funcion, en
distintos complejos membranales.

Proteinas de la union adherente

- E-cadherina o caderina epitelial, en caso de endotelio es la Ve cadherina, que se

conectan con cateninas y el citoesqueleto de actina. Todas las celulas tienen
cadherinas y proteinas de union.
- PECAM

Transmigracion a tarvés de la BHR: cascada de adhesion de leucocitos

Los mecanismos moleculares de lo transcelular o paracelular esta masomenos establecido.

Las células troncales podrían modificarse en laboratorio para que expresen proteínas que les
permitan asemejar el rodamiento de los leucocitos para el acceso a la BHE.

Son 23, se expresan de manera diferencial en los tejidos, y en la BHE y la retiniana la principal
es la claudina 5, aunque esta tambien se expresa en otros lados. En lo que respecta a la
barrera, es claudina 5 más la union neurovascular.

Las ZO estan en todos los tejidos.

Las claudiamns son tan similares que no se pueden distinguir a tarves de Western-Blot.

Interaccion de las claudinas entre la union estrecha

- Homotipica
- Heterotipica: claudinas de distintos tipos
o A su vez, pueden ser homodimeros o heterodimeros

La funcion de las claudinas no es redundante

Disrupcion de la BHE en patologias (Chen Y et al, Adv Drug deliv rev 2012)

- Esclerosis multiple, alzheimer, parkinson, enfermedades infeccionas, stroke

inflamatorio, tramua y dolor, tumores, isquemia y epilepsia.

Mucho PLVAP y poca claudina seria marcador de una barrera rota.

¿ensayos de permeabilidad en clinica?

Se habla del porcentaje de inulina como modelo para la medicion de la distribución en el SNC.
Donde mas se filtra es en plexo coroideo y en la pituitaria.

Permeabilidad de algunos compuestos a la BHE en relacion al coeficiente de reparto

octanol/agua

- Es uno de los parametros utilizados para saber la distribución de drogas al SNC.

- Representa la relacion entre la concentracion en la fase de n octanol y en la fase
acuosa en equilibrio. Es una medida de la hidrofobicidad o la afinidad lipidica de una
sustancia disuelta en agua.
 - Para maximizar el paso a traves de la BHR, se puede modificar la lipofilizidad,

Peptido señal: molecula que le informa a una sustancia que se va a expresar en la membrana.

- Entonces, por ejemplo, podrías agergarle a una sustancia muchos peptidos señal,
puedes modificar la estructura, aumentar la afinidad con mecanismos
transportadores, mejorar solubilidad lipidica, incrementar la estabilidad en plasma
para aumentar la vida media, mejorar o mantener la reactividad con mecanismos
transportadores de la BHE, incremntar la estabilidad extarcelular en el cerebro o
sistemas de retencion en el SNC.

Factores que facilitan el transporte a traves de la BHE

- Ciclodextrina
- Polexameros
- Peptidos que penetran el CNS
- Virus transportadores de peptidos
- HIV-1 clase-sepcific tat protin B
- Macrophage
- Cereport
- Fisicos
o Ultrasonidos
o Microondas
o Campos electromagneticos
En terapia genica, el control sera un virus que acarree una proteína que no tenga efecto. El
problema con el uso de virus como terapia genica es elsistema inmune.

Clase 2

FITC dectran para valorar la permeabiidad de la BHE. El dextarn es undetergente que solo
puede pasar si hay laxitud paracelular en las celulas endoteliales, entones es marcador para la
permeabilidad.

Clase 3

El epitelio difiere del endotelio por la polarización de las celulas. El epitelio esta sumamente
polarizado y es coumnar, mientras que el endotelio es plano.

3 barreras:

- Meninges
o En el espacio subaracnoideo hay vasos aracnoideos fenestrados
- Plexo codoideo
o Celulas epiteliales con vasos fenestrados
- BHE
o Vasos que irrigan la region interna del cerebro, son endotelio.
Liposomas: transitosis adsortiva

- Algunas vesiculas era transitosis por receptor mas trancitosis adsortiva.

- En sí, es relevante saber que puedes aprovechar mas de una ruta de tarnsporte para
maximizar la cantidad de farmaco que atarviese la BHE.

La transitosis mediada por celulas es diferente a la diapedesis, por lo que este tipo de
difusion de celulas puede ocurrir por ambos sitios.

Factores que se pueden modificar para mejorar biodisponibilidad

- Liposolubilidad y estabilidad plasmatica

- Vida media en plasma
 - Reactividad con mecanismos de transporte de la BHE
- Retencion de la actividad en SNC
- Estabilidad en el fluido extracelular cerebral
- Reduccion de la reactividad con los mecanismos de eflujo en la BHE

En la patología estas situaciones están comprometidas y depende del estadio de la

enfermedad.

Ejemplo de lo anterior en Alzheimer

Regulacion de los mecanismos de distupcion de la BHE

Modificaciones para hacer mas estables las vesículas: