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TEMA 13-Biología molecular

Biotecnología y bioinformática (Universitat de València)

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TEMA 13: Propiedades generales de la replicación

1. Algunos conceptos sobre replicación

Consiste en la duplicación del material genético de un organismo

Por replicón se entiende la unidad de DNA en la que ocurre un acto individual de replicación

Replisoma hace referencia a la maquinaria proteica implicada en un proceso de replicación

Presenta una baja tasa de error (aproximadamente un nucleótido cada 107 en E. coli), gracias a
la actividad exonucleasa 3’-5’ de la mayoría de las polimerasas. Además, en la célula existen
mecanismos adicionales de reparación.

Ha de ser un proceso preciso, rápido y correlacionado en el tiempo con el ciclo celular

Es un proceso semiconservativo. Cada una de las dos cadenas sirve de molde para la síntesis de
una cadena complementaria, de manera que en cada molécula de DNA hija hay una cadena vieja
y una cadena nueva.

Hubo una serie de experimentos llevados a cabo por Messelson y Stahl en 1958 que lo
demostraron. Escherichia coli: métodos isotópicos y de centrifugación en gradiente de densidad.
Excepciones: virus de una sola cadena de DNA o de RNA.

2. Inicio de la replicación
• Se inicia en secuencias específicas denominadas orígenes. Es un punto en el que
siempre empieza la replicación para ambas cadenas.
• En virus y bacterias sólo hay un origen
• En eucariotas hay uno aproximadamente cada 20 kpb
• Casos particulares: DNA mitocondrial, plásmido ColE1 de bacterias y algunos genomas
de fagos pequeños. Utilizan distintos sitios para copiar cada cadena.

Cairns, 1963. Demostración del origen de replicación. Estudios con E. coli en los que marcó
radiactivamente el DNA con timidina tritiada. Tenía un DNA replicándose, añadía timidina

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TEMA 13: Propiedades generales de la replicación

tritiada y extraía fragmentos a diferentes tiempos. Esto lo extendía sobre un porta y colocaba
una emulsión que quedaba impregnada con las partículas radiactivas que emitía la muestra.

Desde los orígenes la replicación avanza de forma secuencial

Demostración: Sueoka y Yoshikawa, 1963. Bacillus subtilis. Estudios genéticos de

complementación de mutaciones.

Esta bacteria tiene la capacidad de esporular, proceso que está regulado por el uso de factores
sigma alternativos. Cuando se induce la esporulación lo primero que hace la célula es duplicar
el material genético.

Si volvemos a unas condiciones que favorecen el crecimiento vegetativo, las células empiezan a
crecer y copiar el DNA en ese momento desde 0 y lo harán a la vez → cultivo sincronizado

Otra característica de Bacillus subtilis es que puede transformarse con DNA exógeno y cambiar
de genotipo.

La cepa salvaje es la que estaba en forma

de cultivo sincronizado

Cuantas más copias haya de un

gen, más bacterias transformantes
de la cepa serán capaces de crecer
en medio mínimo.

A: gen ade

B: gen met

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TEMA 13: Propiedades generales de la replicación

3. Avance de la replicación
Desde los orígenes la replicación avanza mediante estructuras en forma de horquilla.

La forma típica de las horquillas recuerda a la letra griega teta. Pero puede haber formas
alternativas.

El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayoría de los casos

Masters y Broda, 1971

o La replicación unidireccional se da en fagos de DNA de una sola

cadena y en el DNA mitocondrial.
o Análisis genético, migración electroforética y medida de
distancias desde el ojo hasta los extremos de un DNA lineal (o
convertido previamente en lineal)

En una replicación unidireccional solo hay una horquilla y en una

replicación bidireccional hay dos horquillas.

Estos marcaron el DNA en replicación con timidina tritiada de distintos

tipos, marcando más fuerte o más débil. Primero introdujeron el isótopo
con mayor actividad, por lo que la señal en el origen de replicación es más
fuerte. Luego añadieron la de menor actividad, por lo que a medida que avanza la replicación la
señal es más débil. Si el proceso es unidireccional solo se verá la señal débil a un lado del punto
de inicio, pero si es bidireccional se verá a ambos lados del origen de replicación.

Es un proceso catalizado por enzimas

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TEMA 13: Propiedades generales de la replicación

✓ Kornberg, 1956
✓ DNA-polimerasas DNA-dependientes (o RNA-polimerasas RNA-dependientes)
✓ Participación de enzimas auxiliares.

Las polimerasas alargan las cadenas en dirección 5’-3’

Es mayoritariamente semidiscontinua

Relativamente continua para la cadena conductora y discontinua para la otra, la retrasada

Existen mecanismos para iniciar una cadena de DNA

Las DNA-polimerasas no pueden iniciar cadenas sin disponer de un extremo 3’-OH

El mecanismo más común para iniciar una cadena es utilizar un cebador de RNA

La terminación puede darse en un punto fijo

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