AMPEL DE VENEZUELA, C.

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Sistema de Gestión de la Calidad

Edición: 01 Manual de Requisitos Técnicos Revisión: 00

Fecha: 02-06-2020 Determinación De Nitrógeno Total
(Alimentos)

1.- MÉTODO:
Este método se basa en la descomposición de los compuestos de nitrógeno orgánico
por ebullición con ácido sulfúrico. El hidrógeno y el carbón de la materia orgánica se
oxidan para formar agua y bióxido de carbono. El ácido sulfúrico se transforma en SO 2,
el cual reduce el material nitrogenado a sulfato de amonio.
El amoniaco se libera después de la adición de hidróxido de sodio y se destila
recibiéndose en una disolución al 2% de ácido bórico. Se titula el nitrógeno amoniacal
con una disolución valorada de ácido, cuya normalidad depende de la cantidad de
nitrógeno que contenga la muestra.

De la determinación cuantitativa se calculan el nitrógeno total y la proteína cruda

contenidas en el material bajo ensayo, expresada esta como un porcentaje de la
muestra original.

2.- ALCANCE.
Este método contempla la determinación del nitrógeno en productos alimenticios; no es
aplicable para determinar proteínas en productos que contienen cantidades apreciables
de sustancias no proteicas como urea, nitritos o nitratos.

3.- INTERFERENCIAS.
No Aplica.

4- DEFINICIONES:
No Aplica
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5.- EQUIPOS E IMPLEMENTOS DE LABORATORIO.

 Balanza analítica con precisión de 0,0001 g.
 Molinillo, para procesar muestras de material hasta lograr que el 100% de
mismo atraviese el cedazo nº 18 (1 mm).
 Matraces de Kjendahl, de capacidad de 500 a 800 ml.
 Aparato de digestión, o plancha de calentamiento de control de temperatura
regulable.
 Aparato de destilación de amoniaco, equipo dotado de su manta de control de
temperatura que permita destilarse la totalidad del amoniaco y que no pase al
recipiente de recolección del mismo ninguna porción alcalinizada contenida en el
matraz de destilación.
 Frasco de boca ancha, para contener muestras.
 Matraces Erlenmeyer, de capacidad de 100, 250 y 400 ml de capacidad.
 Pipetas volumétricas de 25 y 50 ml.
 Bureta de 50 ml, graduada en decima de mililitros.

6.- REACTIVOS
Los reactivos que a continuación se mencionan deben ser grado analítico, cuando se
indique agua, se debe entender agua destilada libre de CO 2.
 Ácido sulfúrico (H2SO4) de 93 a 98 % de pureza.
Catalizador:
 Oxido de Cobre (CuO) o Sulfato Cúprico Pentahidratado (CuO.5H2O)
 Oxido de Mercurio (HgO o Hg)
 Sulfato de potasio o sulfato sódico (K2SO4 o Na2SO4) para elevar el punto de
ebullición durante la digestión acida.
 Tiosulfato de sodio al 50%
 Hidróxido de Sodio al 40%.
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 Solución de Ácido Sulfúrico al 0.1 N.

Método 1 de titulación:
 Solución de hidróxido de sodio 0.1 N
 Indicador de Titulación; solución con cambio de coloración alrededor de pH 5.5.
puede usarse cualquier indicador colorimétrico de grado analítico, tales como
mezcla de rojo metilo y azul de metileno (2:1), mezcla de rojo de metilo verde de
bromocresol (2:1).

Método 2 de titulación:
 Solución saturada de ácido bórico (H3BO3)
 Indicador de titulación de rojo metilo verde de bromocresol (1:5), ambos en
solución al 0.2 % de etanol.
 Agua destilada.
 Parafina solida o grafito.
 Perlas de vidrio.

7.-DESCRIPCIÓN DEL METODO:

7.1 Preparación de la muestra:
 La muestra a ensayar consiste en 100 g representativo del material original,
mantenido en un frasco herméticamente cerrado desde el momento de la toma
del lote o envase original. Las determinaciones deben realizarse por duplicado.
 La muestra de material a ensayar que contenga partículas gruesas se muelen en
un molinillo previamente limpio. Se recoge el material molido y se procede a los
ensayos.
 La muestra que viene ya molida fina se pasa por el cedazo y si no tiene más del
10 % de partículas mayores de 1 mm no debe molerse.
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 La cantidad de material a ensayar se determina conforme al contenido estimado

de proteína cruda. Ejemplo 0.7 g a 1.5 de materiales de alto contenido proteico
tales como harinas de origen animal y de oleaginosas, b) 1.5 g de materiales de
bajo contenido proteico, como cereales.
 Se pesa la cantidad necesaria del material preparado con una precisión de
0.0001 g. si el material es viscoso o pastosos se envuelve en papel, plástico o
aluminio, reduciendo el peso del envoltorio.
 Paralelamente debe realizarse un ensayo del blanco, para los reactivos. El
nitrógeno obtenido se deduce del valor obtenido en la muestra.
7.2 Digestión y destilación de la muestra:
 Se añaden al matraz inmediatamente:
 Aproximadamente 0.9 a 1.2 g de sulfato cúprico, ó 0.3 g de Oxido de
cobre o 0.5 a 1.0 g de Oxido de mercurio o bien 0.65 g de mercurio
metálico (una gota).
 Aproximadamente 15 g de sulfato de potásico o sulfato sódico.
 Un pedacito de parafina o grafito, aproximadamente 0.5 a 1.0 g y/o tres o
cuatro perlas de vidrio.
 Método 2, aproximadamente 15 g de sulfato potásico o sodio anhidrico y
300 mg de sulfato cúprico pentahidratado
.
 Se vierten en el matraz 25 ml de Ácido Sulfúrico, si la muestra es mayor a 2,2 g
se aumenta la cantidad de ácido a razón de 10 ml por cada gramo adicional.
 Se coloca el matraz en el aparato de digestión o plancha de calentamiento,
calentando gradualmente para evitar ebullición violenta de la muestra. Se
considera que la digestión ha terminado cuando la solución acida se haya vuelto
transparente o de color azul verdoso claro.
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 Se deja enfriar el matraz bajo la campana de extracción hasta temperatura

ambiente.
 En un vaso precipitado de 400 ml o matraz Erlenmeyer de igual capacidad
destinado a recoger el amoniaco se vierten:
 Método 1: 25 a 50 ml de solución de ácido sulfúrico 0.1 N medido en pipeta
volumétrica, se diluyen con 50 ml de agua destilada y se añaden de 4 a 5 gotas
de indicador de titulación.

 Método 2: aproximadamente 50 ml de solución saturada de ácido bórico y se

agregan de 4 a 6 gotas del indicador de titulación.

 En ambos casos deberás tener cuidado con el extremo del condensador del
destilador quede sumergido en el líquido.

 En ambos caso se diluye el contenido del matraz de digestión, añadiendo

cuidadosamente 200 ml de agua destilada, agitando luego para disolver
cualquier residuo sólido que puede haber quedado. Se deja reposar la solución
hasta alcanzar temperatura ambiente.

 Solo para el método 1: se agrega al matraz aproximadamente 1 g de

Hipofosfito de Potasio o Sodio o 25 ml de solución de tiosulfato de sodio al 50%,
si el catalizador usado es a base de mercurio y se agita suavemente el matraz
para precipitar el mercurio en la solución acida.
 en ambos métodos: se añade 100 ml de NaOH al 40%, teniendo cuidado si se
ha utilizado más 25 ml de ácido sulfúrico para la digestión, se añade una
cantidad proporcionalmente mayor de la solución de NaOH.
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 De inmediato se conecta el matraz Kjendahl al aparato de destilación y se da

comienzo a la destilación, encendiendo la manta de calentamiento.

 Cuando hayan destilado aproximadamente 150 ml al matraz de Erlenmeyer que

contiene el ácido sulfúrico diluido (Método 1) o la solución de ácido bórico
(Método 2), se retira el matraz teniendo cuidado de que el extremo del
condensador quede fuera del líquido. Se paga la manta de calentamiento y se
lava el extremo del condensador procurando que el agua escurra dentro del
matraz.

7.3 Titulación
Método 1: se titula el amoniaco presente en el destilado utilizando solución de NaOH
0.1 N.

Método 2: se titula el borato de amonio formado durante la destilación, utilizando la

solución de ácido sulfúrico 0.1 N.

Si se requiere determinar el porcentaje de nitrógeno total en la muestra de ensayo

sobre la base de materia seca, se efectúa previo o simultáneamente con otras
muestras la determinación por duplicado de su contenido de humedad.
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8.-CÁLCULOS Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS

8.1 CÁLCULO DEL CONTENIDO DE NITRÓGENO TOTAL SOBRE LA BASE DE
MATERIA HUMEDA:
Se toma el FC del resultado del Blanco. El contenido se calculara separadamente
según las siguientes formulas:
METODO 1:

% NT= ( (V1 X N1) - (V2 X N2) ) X 1,4

M
DONDE:
V1= Volumen De La Solución De Ácido Sulfúrico 0.1 N (ml)
N1=normalidad de la solución de H2SO4 0.1 N.
V2= Volumen corregido de la Solución de NaOH 0.1 N (ml)
N2= Normalidad de la Solución de NaOH 0.1 N.
1.4 = Factor de para el peso atómico del nitrógeno
M= Peso de la muestra ensayada.

METODO 2:

% NT= V X N X 0.014 X 100

M
DONDE:
V= Volumen De La Solución De Ácido Sulfúrico 0.1 N (ml)
N=normalidad de la solución de H2SO4 0.1 N.
M= Peso de la muestra ensayada.
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El resultado del ensayo será promedio de las dos determinaciones. Se expresara en

porcentaje final hasta la segunda cifra decimal.

8.2 CALCULO DEL CONTENIDO DE PROTEÍNAS:

Para presentar resultados en términos de proteína cruda, se multiplica los porcentajes

de NT calculados por el factor convencional genérico indicados en las tablas según el
caso correspondientes.(VER TABLAS ANEXAS)

9.0 BIBLIOGRAFÍA

Association of official Analytical Chemists. AOAC. Official Methods of Analysis, 14 th

Edition 1984.

Norma Venezolana Covenin 1195:80.Determinacion de Nitrógeno Total (Metodo

Kjeldahl) Alimentos.
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10 ANEXOS
10.1 Tabla de conversión NITROGENO-PROTEINA.
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Continuación…………