ENSAYO DE PCR MÚLTIPLE BASADO EN EL CIGR

GEN PARA LA DETECCIÓN DE SALMONELA SPP.

Y SALMONELA IDENTIFICACIÓN DE
PULLORUM/GALLINARUM
Introducción

Salmonella
La salmonela es un importante patógeno zoonótico spp.
causante de enfermedades graves y grandes perdidas
económicas en la industria del pollo.

Se desarrollo un método de PCR múltiple para la

detección simultanea de la Salmonella spp. Salmonella
Gallinarum
Gen de Interes
El método de PCR empleado se basa
en el gen cigR para la detección de las
41 tipos de cepas de salmonella
Se hizo uso de muestras
procesadas de pollo y de
huevos.
Se utilizo dos pares de cebadores para
la detección de la bacteria.
Extracción de ADN Genómico

Tras el cultivo de las cepas en agar nutritivo Luria-Bertani en

un periodo de 18h a 37°C se procedió a la extracción de ADN

Se midió la pureza del ADN genómico

Para la extracción se hizo uso del kit de aislado a través del uso de un
extracción de ADN bacteriano TAANamp espectrofotómetro,
Protocolo PCR
Las amplificaciones del PCR comenzaron con un paso
de desnaturalización inicial a 95°C durante 3 minutos.

Seguido a esto se dio 30 ciclos a 95°C

durante 15s, a 50 °C durante 15s y 72°C
durante 30s.

La extensión final se dio a 72°C durante 10 minutos. Y el

producto de la PCR obtenido se analizo mediante
electroforesis en un 1% agarosa.
 Cebadores
Los cebadores utilizados en este estudio se diseñaron en base a la
secuencia de nucleótidos de la cigR gen en S. Typhimurium (Acesión no. NC-
003197.2 región 3960760-3961239). Las secuencias de los cebadores
fueron cigR- F, 5′-ATGAATAATCGTCGTGGTTT-3′, cigR- R1, 5′-
TAATAATCGCCGTGACCACC-3′, y cigRR2, 5′-GTAGCGCTCAGGGAAAAACG-3′.
¡Gracias por vuestra
participación!