UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

Facultad: Medicina Humana

Curso: Bioquímica (prácticas)

Profesor: Javier Calderón Gómez

INFORME DE PRÁCTICA N° 5

Título: DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO Y ESPECTROFOTOMETRÍA

Integrantes:

Manuel Zevallos Vernaza

Luis Miguel Patrocinio

Omar Gonzales

Horario de práctica:

Día: Sábado

Hora: 12:00pm- 2:00pm

Fecha de entrega del informe: 03/10/2015

Lima-Perú
 SUMARIO

1. OBSERVACIONES

2. RESULTADOS

3. CONCLUSIONES

4. COMENTARIOS O CRITICAS

5. ANEXO
OBSERVACIONES
Se trabajó en 3 tubos de ensayo una blanco (B), una estándar (ST) y una muestra
problema (MP). Para que este trabajo tenga los resultados esperados es necesario
cumplir con estas medidas principales:

 Que la persona que de la muestra este en ayunos.

 Que no haya ingerido alcohol en 48 horas
 Que no haya ingerido medicamentos por 72 horas

Para que los resultados no sean alterados todos los tubos de ensayo deben ser
correctamente enjuagar con agua destilada y secados con papel TISSUE ya que esta no
desprende partículas de papel y, la cara de las celdas que contienen un triángulo no
debe ser tocado con la mano ni por otra superficie ya que esta podría dejar muestras
de grasa en ella y por lo tanto alteraría la longitud de onda (dispersión de luz).

La concentración de ácido úrico es directamente proporcional a la absorbancia, es

decir, una mayor absorbancia equivale a una mayor concentración de ácido úrico.

Para determinar el nivel de glucosa en la sangre utilizamos 3 sistemas diferentes, en

los cuales observamos:

 Toda reacción enzimática da un color, esto se debe a que la muestra retiene

luz mediante la absorbancia (cantidad de luz captada).
 La muestra estándar tenía 10 mg/ dl de ácido úrico y mediante el
procedimiento se obtiene quinonimina coloreada, dejando ver en el sistema un
color ROJO SALMON con una longitud de onda de 505 nm.
 El sistema BLANCO, con una absorbancia igual a 0.112, fue utilizada para
corregir las lecturas reales del espectrofotómetro.
 La muestra problema dio un color ROSA SALMON debido a la presencia de
quinonimina, que es producida por la PEROXIDASA, la cual cumple con la
siguiente formula:

ÁCIDO ÚRICO —Uricasa Alantoina+ H2O2

H2O2 + DCBS + 4-AP –Peroxidasa Quinonimina coloreada + H2O

NOTA:

DCBS = Ac. 3-5-dicloro-2-hidroxi-benceno-sulfónico

RESULTADOS

Bl ST MP
Suero -------- -------- 25uL

[ST. Ácido Úrico -------- 25 uL --------

10mg/dL]
Reactivo 1mL 1mL 1mL
Enzimático

Luego del baño maría por 5 minutos a 38°C observamos que el Blanco (Bl) permanece
del mismo color, pero en el estándar (ST) y la muestra problema (MP) se formó la
quinonimina coloreada (color= rojo grosella).
Luego hicimos la lectura en el espectrofotómetro a longitud de onda de 505nm y
obtuvimos los siguientes resultados:

Bl: 0,112

ST: 0,635

MP: 0,111

Se procede a hacer el cálculo de factor de calibración para determinar la concentración

de ácido úrico en este paciente y determinar si hay patologías asociadas con este ácido
úrico.

[Ácido Úrico]= 0,111 x [ST 10mg/dL] = 1.7mg/dL

0,635

El resultado obtenido nos indica que el paciente presenta una hipouricemia, por lo que
al parecer nos indica que tiene una patología asociada a este nivel bajo de ácido úrico,
entre las cuales están la enfermedad de Wilson, síndrome de Fanconi, hipouricemia
familiar, hiponatremia, diabetes, enfermedad de Hodgkin y deficiencia de xantina
oxidasa. Más adelante se detallará con más énfasis la enfermedad de Wilson así como
la enfermedad de Lesch-Nyhan.
CONCLUSIONES

 Los valores referenciales de ácido úrico en hombres oscilan entre 3,4 – 7,0
mg/dL y en mujeres 2,4 – 5,7 mg/dL. Valores por encima o por debajo de este
rango estarían indicando que hay desniveles de ácido úrico a lo que llamamos
Hiperuricemia e Hipouricemia.

 Para la cuantificación de ácido úrico se requiere de un patrón o estándar que

tiene que ser referencial para lo que estoy midiendo, pero la diferencia con
respecto a la muestra es que en el estándar si se sabe cuánto tiene de ácido
úrico este patrón (10mg/dL de ácido úrico).

 La quinonimina coloreada es directamente proporcional a la cantidad de ácido

úrico que hay en el medio, lo que significa que la quinonimina que forme la
muestra sea parecida a la del estándar. Si la quinonimina es más oscura
probablemente haya más concentración de ácido úrico, si la quinonimina es
más tenue probablemente haya menor concentración de ácido úrico.

 El espectrofotómetro lo tenemos que calibrar a una longitud de onda de

505nm y con esto vamos a poder cuantificar el ácido úrico en el laboratorio.

 El blanco (BL) sirve para corregir las verdaderas lecturas de las muestras que
hay en el medio.

 La micropipeta nos sirve para absorber y transferir pequeños volúmenes de

líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.

 Por ningún motivo se agarra con la mano ni la cara anterior ni la cara posterior
de la celda donde se encuentra el triángulo en alto relieve, ya que la luz que
emite la lámpara del equipo va directamente a la muestra que supuestamente
es coloreada, esa luz va ser retenida por la muestra y la cantidad de luz que
retenga la muestra la vamos a leer en el equipo bajo un dato llamado
absorbancia.

 A mayor concentración de ácido úrico mayor absorbancia y mayor presencia de

quinonimina coloreada; a menor concentración de ácido úrico, menor
absorbancia y menor presencia de quinonimina coloreada.
COMENTARIOS O CRÍTICAS

 La máquina de espectrofotometría (espectrofotómetro) necesita 30 minutos

para poder auto calibrarse y poder ser usada; por ello, sería ideal que la
maquina en mención sea encendida desde inicios del día y no apagarse hasta el
final del día.

 Los reactivos utilizados en la práctica deben siempre estar vigentes, ya que si

no se encuentran en buen estado el desarrollo de la práctica se verá afectado y
no se obtendrán los resultados esperados.

 Una crítica hacia la universidad seria que las celdas para el espectrofotómetro
son de plásticos, porque las celdas de este material son descartables (de un
solo uso); a pesar de ello encontramos este tipo de celdas que tuvimos que
usar para el desarrollo de la práctica, además que se encuentran en mal estado.

 Algo que el profesor nos recalcó para la realización de una buena práctica es
que las celdas deben estar completamente limpias y no se debe agarrar ni
marcar la celda por nada del mundo por la parte anterior y posterior del
triángulo de señalización de la celda, para que de esta manera no existan
interferentes con las ondas de luz.

 Es recomendable limpiar con papel tissue los tubos de ensayo luego de que se
hayan lavado ya que si lo limpiamos con papel convencional, estos pueden
desprender partículas que podrían provocar que haya mala lectura en el
espectrofotómetro.
ANEXO

1. Enfermedad de Wilson y la enfermedad de lesch-nyhan, asociada a

niveles de ácido úrico

SÍNDROME DE LESCH-NYHAN

Es una enfermedad hereditaria que se incluye dentro del grupo de los errores
congénitos del metabolismo. Es poco común, por lo que se considera una enfermedad
rara, se presenta un caso por cada 380.000 nacidos vivos. Los afectados tienen
ausencia de la hipoxantina-guanina-fosforibosil-transferasa, enzima muy importante
en el metabolismo de las purinas. []Las purinas y las pirimidinas son compuestos
nitrogenados que se combinan con la ribosa o la desoxirribosa para formar nucleótidos
que son las moléculas que forman el ADN.

Está originado por una alteración genética recesiva ligada al cromosoma X. La

mutación responsable normalmente es portada por la madre que la transmite a su
descendencia, aunque un tercio de los casos son mutaciones nuevas y por tanto no se
encuentran en el historial familiar. Casi todos los paciente son varones y los síntomas
aparecen desde el momento del nacimiento. La mayoría de los afectados presentan
retraso mental y problemas físicos a lo largo de su vida. Solo excepcionalmente el
síndrome afecta a mujeres.

Este síndrome se caracteriza por tres síntomas principales: disfunción neurológica,

trastornos cognitivos y de conducta y aumento o sobreproducción de ácido úrico. La
mayoría de los pacientes son varones y pueden presentar además de los síntomas
principales retraso en el crecimiento, pubertad retrasada, atrófica testicular y anemia
megaloblástica. También presentan retraso en el desarrollo psicomotor conjunto a
movimientos extraños y sinuosos con aumento de los reflejos tendinosos profundos.
Un característica llamativa del síndrome es el comportamiento autodestructivo,
consistente en el mordido compulsivo de las yemas de los dedos y los labios, cuya
causa es desconocida, similar a las compulsiones del trastorno obsesivo-compulsivo.[]

Las mujeres portadoras no presentan la enfermedad, pero pueden transmitir el gen

anómalo a sus descendientes y tienen riesgo aumentado de padecer gota por excesiva
producción de ácido úrico.
Sobre producción de ácido úrico

Uno de los primeros síntomas de la enfermedad es la presencia de cristales de ácido

úrico de color naranja en el pañal del niño afectado. La sobreproducción de esta
sustancia conduce, eventualmente, a la formación de cristales o cálculos de ácido úrico
en riñones, uréteres, o vejiga. Estos cristales se depositan en las articulaciones, y con el
tiempo provocan una forma de artritis similar a la gota, con inflamación y dolor.

ENFERMEDAD DE WILSON

Es un trastorno hereditario poco frecuente que hace que el organismo no pueda

deshacerse del cobre adicional. El cuerpo necesita un poco de cobre para mantenerse
sano pero tener demasiado puede ser tóxico.

Normalmente, el hígado libera el cobre que no necesita en la bilis, un líquido digestivo.

En personas con la enfermedad de Wilson, el cobre es liberado directamente en el
torrente sanguíneo. Esto puede dañar el cerebro, los riñones y los ojos.

La enfermedad está presente al nacer pero los síntomas comienzan entre los 5 y 35
años de edad. El trastorno empieza afectando al hígado, el sistema nervioso central o
ambos al mismo tiempo. El síntoma más característico es la presencia de un anillo
color marrón alrededor de la córnea del ojo. Se puede diagnosticar la condición con un
análisis físico y exámenes de laboratorio.

El tratamiento consiste en medicamentos que eliminan el cobre adicional del cuerpo.

Las personas que sufren de esta enfermedad deberán tomar medicamentos y seguir
una dieta baja en cobre de por vida. Las comidas con altos niveles de cobre que se
deben evitar son moluscos e hígado. Al comienzo del tratamiento, también se deben
evitar el chocolate, los hongos y las nueces o frutas secas.

Con una detección temprana y un tratamiento adecuado, las personas con

enfermedad de Wilson pueden gozar de buena salud.