Universidad de oriente

Nuceo bolívar

Escuela de ciencia de la salud “Dr. Francisco Battistini

Sistema de
complemento

Profesora : Bachilleres:

Alizar Abou Fakhr Juan Angel Rivas c.i:25003785

Ronald Lozada c.i:20126855

Vanessa Lima c.i: 25937292

Gleydis Reyes c.i: 22594653

Ciudad bolívar 25-10-2019

Pruebas para determinar las vías
Inmunodifusion radial

Fundamento: Esta técnica es de tipo inmunoprecipitación y consiste en hacer reaccionar un

antígeno con su anticuerpo correspondiente en un medio semisólido. Este medio puede ser de
gel de agar o agarosa, en placa de cristal o plástico, cuyo espesor sea uniforme y el anticuerpo
esté distribuido en él.

El resultado final será la formación de un anillo de precipitación. Estos geles suelen estar
coloreados para que la lectura se realice con mayor facilidad. En los geles se taladran unos
pocillos de dimensiones determinadas y dentro de ellos se dispensa la muestra donde
queremos cuantificar el antígeno.

Técnica
1. Extraer la placa del sobre y destapar durante cinco minutos para permitir la
evaporación de las gotas de condensación.
2. Aplicar 5 microlitros de los diferentes calibradores diluidos en los cuatro primeros
pocillos y los diferentes plasmas del paciente en los pocillos restantes.
3. Esperar 20 minutos con la placa ya cerrada antes de volcarla para su incubación.
4. Transcurridos los minutos volcar la placa y guardarla en el sobre.
5. Dejar a temperatura ambiente durante 24/72 horas.
6. Medir con la regla el diámetro de los halos, en milímetros.

Resultado e interpretación
En los pocillos 9-12 se dispensó el calibrador en distintas diluciones:

9 (1): 149 mg/dl

10 (1/2): 74.500 mg/dl

11 (1/4): 37.250 mg/dl

12 (1/8): 18.625 mg/dl

Con estos valores y un papel semilogarítmico se podría realizar una recta de calibración.
Haciendo uso de papel milimetrado saldría una curva de calibración. Extrapolando los valores
de medición (diámetro al cuadrado) en la recta (o en la curva) se obtendrían los valores de
concentración de las distintas muestras de los pocillos. No se pudo realizar la consecuente
recta de calibración debido a que los pocillos 11 y 12 no pudieron leerse. Los pocillos
destinados al calibrador se rellenaron con diferentes diluciones conocidas del mismo para
poder realizar la recta de calibración.

Nefelometría

Fundamennto: mide la disminución de la intensidad de la luz transmitida I a

180º debida a la difracción producida por los complejos inmunes formados. La
disminución de la intensidad de luz (aumento de Absorbancia) es proporcional
a la concentración de analito presente

Procedimiento: El nefelómetro es un instrumento utilizado para medir partículas

suspendidas en una muestra líquida o en un gas. De modo que una fotocelda
colocada en un ángulo de 90° con respecto a una fuente luminosa detecta la
radiación por las partículas presentes en la suspensión.

Asimismo, la luz reflejada por las partículas hacia la fotocelda depende de la

densidad de las partículas. El diagrama 1, presenta los componentes básicos que
conforman un nefelómetro:
Resultado

La concentración: cuanto mayor sea el número de partículas, mayor es la dispersión.

Tamaño de la partícula: factores como el pH, la velocidad y orden de la mezcla,

concentración de los reactivos, duración del estado de reposo y la fuerza iónica.

Longitud de onda: generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si están
coloreadas, se debe escoger una porción del espectro electromagnético en la que la
absorción del medio se reduzca al mínimo.

Turbimetria

FUNDAMENTO: LA TURBIDIMETRÍA PUEDE REALIZARSE EN

ESPECTROFOTÓMETROS DE VISIBLE O VIOLETA. CUANDO LA
CONCENTRACIÓN DE PARTÍCULAS EN SUSPENSIÓN SE MIDE POR
TURBIDIMETRÍA, LA SUSPENSIÓN SE PONE EN UNA CUBETA SIMILAR A
UN TUBO DE ENSAYO, QUE PERMITE REALIZAR LAS MEDIDAS DE LAS
ENERGÍA INCIDENTES Y TRANSMITIDAS. LA FUENTE DE RADIACIÓN
MÁS FRECUENTEMENTE USADAS ES LA LÁMPARA DE WOLFRAMIO,
PERO PUEDEN UTILIZARSE OTRAS FUENTES DE RADIACIÓN VISIBLE. SI
PONEMOS EN LA CUBETA SUSPENSIONES COLOREADAS SE DEBE
USAR UN FILTRO PARA EVITAR QUE INFLUYA SOBRE LOS RESULTADOS
DANDO VALORES EXCESIVAMENTE ALTOS. LOS TURBIDÍMETROS
PUEDEN INCORPORAR CUALQUIER DETECTOR QUE SEA SENSIBLE A
LA LONGITUD DE ONDA TRANSMITIDA

Procedimiento: consiste en hacer que la luz atraviese un filtro, mediante lo cual se

produce una radiación de la que se conoce su longitud de onda; después, esta
radiación atraviesa una cubeta en la que se encuentra una solución y es
recolectada por una celda de naturaleza fotoeléctrica. Así se obtiene una
cuantificación de la luz que se ha absorbido.

Elisa

Resultados: La interacción antígeno-anticuerpo en el laboratorio puede ser utilizada para

determinar si un paciente tiene una infección o una enfermedad autoinmune. Pero como
prueba diagnóstica, posee diversas limitaciones que conviene conocer:

 En primer lugar, un resultado positivo que confirma la presencia de anticuerpos no

significa necesariamente que el paciente esté enfermo. El cuerpo de una persona que
ha estado enferma y que ya se ha recuperado puede seguir produciendo anticuerpos.
Esto originaría un falso positivo.

 En segundo lugar, hay personas que producen una baja cantidad de anticuerpos, por
lo que estos pueden pasar desapercibidos y no ser medidos, dando lugar a un falso
negativo. Sería el caso, por ejemplo, de personas que padezcan una
inmunodeficiencia, o que se encuentren en el periodo ventana de la infección en el
momento de realizar la prueba, o que estén infectadas por una cepa extraña.
 En tercer lugar, pueden aparecer falsos negativos cuando se da inespecificidad entre
antígeno-anticuerpo.

Procedimiento:

Tapiado del pocillo con el ag o ac

Adicion de la muestra problema con la mezcla de ags o acs

Unión del ag o ac especifico del ag o ac tapizado en el pocillo

Lavado del pocillo para eliminar el exceso de ag o ac no unido

Adicion del ac secundario marcado con la enzima

Unión del ac secundario al ag o ac

Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzimas no unidas

Adicion del sustrato

Unión del sustrato a la enzimas

Coloración
Fundamento: El ELISA es una técnica que se basa en el uso de un
antígeno o un anticuerpo marcado con una enzima; al estar uno estos
componentes marcado y fijado a un soporte, se interrumpe la reacción
antígeno anticuerpo, posteriormente se le agrega un sustrato especifico
sobre la enzima que producirá un color determinado observable a simple
vista o cuantificable por un espectrofotómetro o analizar la reacción antígeno
anticuerpo

Ph50 Es un examen de sangre que mide la actividad de ciertas proteínas en la

porción líquida de la sangre.

El sistema del complemento es un grupo de casi 60 proteínas que se

encuentran en el plasma sanguíneo o en la superficie de algunas células. Las
proteínas trabajan con su sistema inmunológico y desempeñan un papel para
proteger al cuerpo de las infecciones y para eliminar las células muertas y los
materiales extraños. En raras ocasiones, las personas pueden heredar la
deficiencia de algunas proteínas del complemento. Estas personas son
propensas a ciertas infecciones o trastornos autoinmunes.

Hay nueve proteínas principales del complemento. Están etiquetados de C1 a

C9. Este artículo describe la prueba que mide la actividad total del
complemento.
Razones por las que se realiza el examen: La actividad total del complemento
(CH50, CH100) examina la actividad en general del sistema de complementos. En la
mayoría de los casos, primero se llevan a cabo otros exámenes que son más específicos
para la enfermedad de la que se sospecha. Los componentes del complemento que se
miden más a menudo son C3 y C4.
Un examen del complemento se puede utilizar para vigilar a las personas con un trastorno
autoinmunitario. También se usa para ver si el tratamiento para dicho trastorno está
funcionando. Por ejemplo, las personas con lupus eritematoso activo pueden tener niveles
de proteínas del complemento C3 y C4 por debajo de lo normal.
La actividad del complemento varía a lo largo del cuerpo. Por ejemplo, en personas
con artritis reumatoidea, la actividad del complemento en la sangre puede ser normal o
superior a lo normal, pero mucho más baja de lo normal en el líquido articular
Las personas con algunas infecciones bacterianas en la sangre y shock presentan a
menudo nivel de C3 muy bajo y componentes de lo que se conoce como la ruta alternativa.
Con frecuencia el C3 también está bajo en infecciones micóticas y en algunas infecciones
parasitarias como la malaria.

El Calibrador CH50 está diseñado para su uso conjunto con el Autokit CH50. El
ensayo se calibra con una curva que representa la absorbancia frente a la
concentración. Se compone de 5 viales de diferentes concentraciones para
reconstituir en agua destilada.

El Control CH50 se emplea como suero de control, ensayado en el laboratorio

clínico, para monitorizar la exactitud y precisión del ensayo de complemento
con el Autokit CH50. Contine viales para nivel alto y viales para nivel bajo.

Fundameto: la reacción se inicia con la interaccion antígeno (gloulos rojos de

carnero) con el anticuerpo (hemolisina) al agregar el suero del paciente cuyos
niveles de complemento se desean investigar, se inicia la activación de la
cascada proteínas desde c1-c9 con lo cual se obtiene la destrucción de los
globulos rojos. El grado de hemolisis se calcula mediante lectura
espectrofotometría. Los resultados se expresan en unidades hemolíticas las
cuales represetan la cantidad de complemeto requerido para lograr la hemolisis
del 50% de los globulos rojos de una suspensión estandarizada

Enfermedades donde el complemento se ve afectado

Deficiencia de C1q: El tipo de herencia es autosómico recesivo.8 Se asocia a

LES e infecciones principalmente por microorganismos piógenos (Cuadro II). 9 C1q
tiene un rol crucial para mantener la tolerancia; a este respecto, ayuda para el
aclaramiento de complejos inmunes y células apoptóticas, por lo que disminuye el
número de autoantígenos.8-10 Se ha visto disminución de complejos inmunes que
contienen nucleoproteínas.11 Por lo tanto la deficiencia de C1q no sólo afecta la
activación de complemento por vía clásica con la participación de C3 a C5, generando
actividades biológicas tales como opsonización, quimiotaxis y actividad bactericida,
sino también se ve comprometida la eliminación de células apoptóticas.8 La
deficiencia de C1q se asocia hasta en un 93% a lupus eritematoso sistémico (LES); sin
embargo menos de 1% de los casos de LES se asocian con deficiencias del
complemento

Deficiencia de C1r/s: El tipo de herencia es autosómico recesivo. Los pacientes tienen

disminuida la actividad del complemento hemolítico total (CH50) y actividad funcional
de C1. Típicamente C1r están muy reducidos (menor de 1% de lo normal) y los niveles
de C1s son del 20-50% de lo normal. 8 En cuanto a las características clínicas se han
descrito algunas personas con deficiencia combinada C1r y C1s. La forma de
presentación más común ha sido como LES en la deficiencia de C1r y C1s (hasta 57%
y 75%, respectivamente) o como procesos autoinmunes complejos. Las infecciones
reportadas han sido similares a las observadas en la deficiencia de C1q

) Deficiencia de C3: El tipo de herencia es autosómico recesivo. La actividad de

opsonización, quimiotaxis y bactericida se encuentran ausentes o disminuidas. Las
infecciones que predominan son neumonía, bacteriemia, meningitis y osteomielitis
encontrando los microorganismos más frecuentes los encapsulados (neumococo, H.
influenzae y meningococo).8 En una revisión de 37 casos se dividieron las
características clínicas encontrando infecciones severas principalmente meningitis
(81%), las cuales fueron recurrentes en un 60%; otras fueron bacteremia, sepsis,
infecciones de vías respiratorias y otitis media aguda; enfermedades reumatológicas
en ocho casos (22%) principalmente LES, de estos seis pacientes con ANA+;
enfermedad renal en ocho casos (22%) de los cuales a cinco se les realizó biopsia
encontrando glomerulonefritis membranoproliferativa, mesangiopática y nefropatía por
IgA en dos, uno y un caso respectivamente

El tipo de herencia es autosómico recesivo. Tiene variaciones en dos loci, para C4A y
C4B. Una deficiencia completa de C4 es extremadamente rara. Homocigotos para
deficiencia de C4A se estima que ocurre en 1% y homocigotos para deficiencia de
C4B en 3% de caucásicos.18 La asociación con LES se estima que es en 75%9 (con
predominio de manifestaciones cutáneas). Deficiencias en C4A y C4B se han asociado
con nefropatía IgA, púrpura de Henoch-Schönlein, hepatitis crónica, esclerodermia,
nefropatía membranosa, panencefalitis, y diabetes mellitus tipo 1