Cuestionario
anticuerpo esté acoplado a un sustrato sólido
1. Menciona tres métodos para
precipitar proteínas.
precipitación de proteínas con sulfato de
amonio: las proteínas son solubles gracias a
su interacción con el agua, al añadir el sulfato
de amonio se unen al agua formando puentes
de hidrogeno, la proteína se deshidrata y las
biomoléculas interactúan hidrofóbicamente
entre ellas y forman el precipitado, la proteína
menos soluble en solución se une a las sales
presentes (sulfato de amonio).
precipitación isoeléctrica: Técnica que
aprovecha el hecho de que las proteínas
tienen baja solubilidad en su punto
isoeléctrico, utilizada en la recuperación de
proteínas en soluciones acuosas. En él se
ajusta el pH del medio (usualmente utilizando
ácidos y bases minerales) hasta que sea igual
al punto isoeléctrico (pI) de la proteína y de
esta forma, la carga neta total de la molécula
sea nula, la repulsión electrostática entre las
moléculas es mínima, prevaleciendo así
interacciones hidrofóbicas proteína-proteína.
En algunos casos, puede ocurrir la
desnaturalización e inactivación de la
proteína precipitada (generalmente a altas
concentraciones de ácidos), lo que hace que
este proceso sea útil para eliminar proteínas
indeseables de la solución que contiene la
proteína objetivo, siempre que, en las
condiciones de precipitación, la proteína
objetivo sea estable. Además, para obtener
proteínas de alta pureza y evitar contaminar el
medio ambiente con residuos indeseables, es
necesario un proceso adicional para
neutralizar la solución y eliminar las sales
generadas.
técnica mediante la cual un antígeno proteico
es precipitado de una solución haciendo uso
de un anticuerpo que se une específicamente
a una proteína. Este procedimiento puede ser
utilizado para aislar y concentrar una proteína
particular de una muestra que contenga miles
de proteínas distintas. La
inmunoprecipitación requiere que el
en algún momento del procedimiento.
Los dos métodos generales de
inmunoprecipitación son:
método de captura directa: Los anticuerpos
que son específicos para una proteína (o
grupo de proteínas) en particular se
inmovilizan en un sustrato de fase sólida
como microperlas superparamagnéticas o en
perlas microscópicas de agarosa (no
magnéticas). Las perlas con anticuerpos
unidos posteriormente se agregan a la mezcla
de proteínas, y aquellas que son objetivo de
los anticuerpos se capturan en las perlas a
través de los anticuerpos; o en otras palabras,
se inmunoprecipitan.
método de captura indirecta: Los anticuerpos
que son específicos para una proteína en
particular, o un grupo de proteínas, se añaden
directamente a la mezcla de proteínas. En esta
técnica, los anticuerpos aún no se han unido a
un soporte en fase sólida. Así, los anticuerpos
son libres de flotar alrededor de la mezcla de
proteínas y unirse a sus objetivos. A medida
que pasa el tiempo, se añaden perlas
recubiertas de Proteína A/G a la mezcla de
anticuerpos y proteínas. En este punto, los
anticuerpos, que ahora están unidos a sus
objetivos, se pegarán a las perlas.
A partir de este momento, los métodos de
captura directos e indirectos convergen
porque las muestras tienen los mismos
ingredientes. Ambos métodos dan el mismo
resultado final con las proteínas o los
complejos proteicos unidos a los anticuerpos
que a su vez se inmovilizan en las perlas.
2. Cuando una proteína se
desnaturalizada, puede seguir actividad
biológica?
La mayoría de las proteínas pierden su
función biológica cuando están
desnaturalizadas, por ejemplo, las enzimas
pierden su actividad catalítica, porque los
sustratos no pueden unirse más al sitio activo,
y porque los residuos del aminoácido
implicados en la estabilización de los
sustratos no están posicionados para hacerlo.
2. Porque se forman grumos en la
leche cuando adicionas el limón o el
HCl?
Son proteínas desnaturalizadas que
precipitaron por el cambio brusco en el
pH del medio
Bibliografía:
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/
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http://bq.facmed.unam.mx/tab/wp-content/
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https://www.abyntek.com/
inmunoprecipitacion-claves/
https://www.quimica.es/enciclopedia/
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