CURSO DE INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA

ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN

Sanitización: conjunto de procedimientos usados para disminuir la población

microbiana a niveles no infecciosos y remover la suciedad profunda.

Desinfección: destrucción de microorganismos superficiales. La Acción es

bactericida y antiviral pero no esporicida. Se clasifica en diferentes niveles:
. Alto: elimina todos los microorganismos y algunas esporas.
. Intermedio: inactiva Micobacterias, pero no elimina esporas ni algunos
microorganismos resistentes.
. Bajo: no elimina Micobacterias ni esporas.

Hay que tener en cuenta que el desinfectante actúa sobre material inerte y el
antiséptico sobre material vivo.

Esterilización: conjunto de operaciones que mata, elimina o destruye todo

microorganismo contenido en un espacio. El microorganismo pierde viabilidad y
capacidad de reproducirse, pero sus toxinas o productos metabólicos podrían
permanecer luego de este proceso. La esterilidad de una sustancia u objeto
dependerá entre otros factores:
.Del microorganismo: tipo, número, velocidad de muerte.
.Del proceso: tiempo de esterilización.
.De la limpieza: cantidad y tipo de suciedad.
.Del material a esterilizar: características.

SANITIZACIÓN Y SANITIZANTES

Los agentes sanitizantes son: agua caliente, hidróxido de sodio al 0,1%, carbonato
de sodio al 2% y detergentes. Tienen como función remover toda la suciedad
dejando los materiales perfectamente limpios para luego ser desinfectados y/o
esterilizados.

DESINFECCIÓN Y DESINFECTANTES

A-.DESINFECTANTES DE BAJO NIVEL: Compuestos de amonio cuaternario:

Quats.

B-DESINFECTANTES DE NIVEL INTERMEDIO:

1. HIPOCLORITO DE SODIO:
-Mata bacterias, virus, hongos y Micobacterias.
-No mata esporas.
-Mecanismo de acción: liberación de cloro o ácido hipocloroso que inhibe la
acción enzimática, desnaturaliza las proteínas, inactiva a los ácidos nucleicos.
 Es el desinfectante universal a pesar de ser un oxidante corrosivo para los
metales. Es activo a través de la concentración de cloro libre, por lo que deben
prepararse soluciones en diferentes concentraciones según el uso:
.Desinfección general 20 ml. de lavandina en 1 litro de agua: lavandina al 0,1%
1000 ppm de Cl2 activo (1g/l).
.Desinfección de materia orgánica: 5000 ppm (5 g/l ) de Cl2 libre
.Desinfección de agua: 2 gotas en 1 litro de agua.
.Fórmula a utilizar: 100 ml de lavandina llevar hasta un litro de agua.
Se puede utilizar la CLORAMINA (polvo) pero en concentración de 20 g/l aprox.
25% de Cl2 libre; esto es porque al liberar más lentamente el cloro requiere
concentraciones iniciales más altas.

2. FENOL AL 5%

Mecanismo de acción: destruye la pared celular e inhibe las enzimas precipitando

las proteínas. Desinfecta las superficies contaminadas, ej: mesadas. Se puede
usar cuando no se dispone de hipoclorito.

3. PERÓXIDO DE HIDRÓGENO:

Es un potente oxidante. No debe usarse sobre aluminio, cobre, zinc, bronce.

Mecanismo de acción: libera radicales libres hidroxilos, alcoxilos, precipita las
membranas celulares liposolubles, DNA.
Las bacterias catalasa + se protegen de este mecanismo, por lo cual necesitan
más tiempo de contacto para disminuir la carga bacteriana.
Se utiliza al 30% en agua y diluyendo hasta 5 veces su volumen con agua
hervida.

4. YODO:

Es desinfectante sobre tejidos vivos.

Mecanismo de acción: se une a las proteínas irreversiblemente y las precipita
Se une a la Povidona para hacer más efectivo su poder antiséptico.
Se usa en soluciones al 0,075 g/l (75 ppm de yodo libre).

5. ALCOHOL:

El etanol y el isopropanol son activos contra algunas bacterias, hongos y virus

pero no es esporicida.
La concentración óptima es 70% en agua.
Mecanismo de acción: desnaturalización proteica y coagulación proteica.

C-DESINFECTANTES DE ALTO NIVEL:

1) GLUTARALDEHÍDO AL 2%:
 Al ser activo contra todos los microorganismos se lo puede considerar como fluido
esterilizante. La concentración usada es 20 g/l es decir 2% v/v.
Se puede utilizar para esterilizar materiales de fibrobroncoscopía a pesar de
saber que es tóxico, irritante y mutágeno, por ello hay que respetar la
concentración y evitar el contacto con las mucosas al prepararlo.

2) ORTOFTALDEHíDO AL 0.55%:

Tiene similar utilidad que el anterior.

3) FORMALDEHÍDO:

Es un gas activo contra todos los microorganismos excepto a bajas Tº que

requiere 70% humedad. Se vende sólido en tabletas, o como formol (solución del
gas en agua al 37%).
Se sabe que es cancerígeno, peligroso e irritante.

ESTERILIZACIÓN
CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS:

1. QUÍMICOS: Óxido de etileno y desinfectantes de alto nivel.

2. FÍSICOS: que se dividen según su mecanismo de acción en:

ESTERILIZACIÓN POR TEMPERATURA

CALOR
El mecanismo de acción del calor es la desnaturalización proteica, fusión de
membranas lipídicas. Se desestabiliza la conformación nativa de la proteína, ya
que se rompen fácilmente las uniones puentes hidrógeno entre el carboxilo y
amino, así se reemplazan por uniones de hidrógeno a moléculas de agua. Es por
esto que el calor seco necesita una temperatura mayor para causar el daño
irreversible, además penetra los materiales porosos más lentamente que el vapor.

A. CALOR SECO:

a)- Por acción de la llama directa: Se logra al calentar al rojo sombra por más de
10 segundos los metales, ej: ansas, boca de tubos de ensayos, Erlenmeyers,
superficies termorresistentes contaminadas. También se pueden impregnar los
objetos con alcohol y luego pasarlos rápidamente por el fuego directo.

b)- Por aire caliente: En estufas u hornos, se realiza a 160ºC durante 1 a 2 hs.
No es útil para papel, gasa, algodón, material termolábil, soluciones líquidas
acuosas, textiles, gomas, aparatos eléctricos. Se utiliza para esterilizar materiales
de vidrio, metal, porcelana, polvos, vaselina aceites, grasas.

Estufas de esterilización

B. CALOR HÚMEDO:

a)- Baños termostatizados: Con agua destilada, agua con sales disueltas para
elevar el punto de ebullición, ej: glicerina, aceites, etc.

Baños termostatizados

b)- Ebullición: Ebullición directa del agua o soluciones que deben esterilizarse,
durante 20 minutos. Tener en cuenta que algunas esporas pueden soportar la
ebullición durante horas.
c)- Vapor de agua: Se puede realizar a Presión normal o vapor efluente, realizado
en el autoclave con la espita abierta, durante 30 minutos o más si los volúmenes
son mayores a 100 ml, o a Sobrepresión, que es el fundamento del método más
utilizado en bacteriología.
 AUTOCLAVE: Mecanismo de acción. Vapor de agua a Sobrepresión.
Basado en la acción del calor del vapor a Pº superior a la atmosférica: 1,1 atm
sobre la presión normal, corresponde a una Tº de 121 ºC, 15 a 20 minutos. Estos
tiempos son mayores si los volúmenes son superiores a 500 ml. La Pº no esteriliza
por sí sola, permite que el vapor llegue a una Tº mayor a 100 ºC. Este tipo de
esterilización se utiliza para materiales termorresistentes, líquidos que no formen
emulsiones con el agua (ej: aceite), materiales de vidrio, gomas, guantes, telas,
ropa, material de curación, soluciones acuosas, medios de cultivo. No se debe
usar para soluciones glucosadas ya que se caramelizan.

Autoclaves: Autoclave de laboratorio y de hospital

FRÍO

El frío no esteriliza, reduce el número de microorganismos viables. La congelación

destruye el 50-80% de los gérmenes por desnaturalización proteica y daño físico
causado por los cristales de hielo.

COMBINACIÓN DE MÉTODOS

A. TINDALIZACIÓN: Se basa en calentamientos repetidos. Consiste en calentar

el material a esterilizar entre 55 hasta 80ºC, durante 1 hora, luego se incuba
durante 24 hs a 37ºC en estufa, posteriormente se repiten los calentamientos
hasta 3 a 5 veces más. El primer calentamiento destruye las formas vegetativas,
pero las esporas germinan a 37ºC y serán destruidas en los calentamientos
siguientes
B. PASTEURIZACIÓN: Destruye una parte de los microorganismos. Se realiza a
Tº menores a 100ºC. El calor es suministrado por vapor, agua caliente o corrientes
eléctricas. Se usa cuando:
-El tratamiento térmico más elevado dañaría el producto.
-Sólo se desea destruir microorganismos patógenos.
-Son materiales termosensibles.
-Los microorganismos supervivientes se pueden controlar por otros métodos
adicionales, ej. Refrigeración.
Los tiempos y Tº varían dependiendo del método y del producto a esterilizar. A
mayor Tº, menor es el tiempo. En el caso de la leche la pasteurización puede ser
de:
1) Baja Tº: 60-63ºC durante 30 minutos.
2) Tº intermedia: 72-75ºC durante 3 minutos.
3) Alta Tº: 85ºC menos de 15 segundos, o UAT, ultra alta Tº 138ºC menos de 15
segundos.

ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN

A- FILTRACIÓN DE FLUÍDOS LÍQUIDOS: Se utilizan para filtrar materiales

termolábiles líquidos :
-Método de membranas filtrantes: Se usan filtros de acetato, celulosa, poliamida,
gelatina, fibra de vidrio, etc.
-Método de bujías filtrantes: bujías de Chamberland, filtros de yeso, de vidrio
poroso, de Saitz.

B-FILTRACIÓN DE FLUÍDOS GASEOSOS: Se esteriliza el aire (en la industria

farmacéutica, cirugía, bacteriología, salas de aislamiento de pacientes
oncohematológicos, etc.) En el aire hay partículas en suspensión que no se ven, el
método óptimo para eliminarlas es por filtración. Se utilizan filtros HEPA.
El flujo de aire laminar es el que permite obtener aire estéril dentro de un espacio
o cabina o campana
ESTERILIZACIÓN POR RADIACIONES

El mecanismo es la ionización de las moléculas de agua que genera radicales

libres, muy reactivos que producen alteraciones en los ácidos nucleicos. Pueden
ser: Microondas, Rayos UV, Radiaciones ionizantes

Esterilizador por radiación UV

ESTERILIZACIÓN POR ULTRASONIDO

Se usan frecuencias superiores a 20000 ciclos por segundo, se supone que la
mayor parte de efecto letal sobre los microorganismos es debido al calor generado
y a las roturas de las membranas por las vibraciones producidas.