Universidad de Puerto Rico en Cayey

Departamento de Biología
Cayey, Puerto Rico
BIOL 3033 -Laboratorio de Biología General I

Laboratorio #4: Membrana Celular

Al finalizar esta experiencia de laboratorio el estudiante será capaz de:

1 – Describir que se entiende por transporte pasivo y transporte activo utilizando
a - un modelo artificial de membrana,
b - la difusión de una sustancia en otra incluyendo diferentes estados de la materia
2 – Aplicar el modelo artificial de membrana a una célula viva
3 – Citando los modelos adecuados, definir los términos: difusión, difusión facilitada, osmosis, diálisis y
transporte activo

Procesos pasivos de transporte

La composición de la membrana plasmática determina el movimiento de las partículas que entran o
salen de las células. El movimiento de estas partículas puede seguir un gradiente de concentración y utilizar la
energía de este gradiente para entrar a la célula, o la célula puede gastar energía para lograr el paso de una
sustancia a través de la membrana. En el primer caso decimos que el transporte de la sustancia ocurre en forma
pasiva, mientras que en el segundo caso decimos que el transporte ocurre de forma activa. El modelo de
membrana plasmática que hemos estudiado en clase, el Mosaico Fluido, posee unas propiedades que
determinan la permeabilidad de esta membrana a diferentes sustancias. Según el libro de la conferencia tenemos
la siguiente permeabilidad de estas membranas, en términos generales:

Tipo de molécula Ejemplo Permeabilidad

Hidrofóbica N2, O2 hidrocarbonos Permeable

Polar pequeña H20, C02, glicerol, urea Permeable

Polar grande o glucosa, otros monosacáridos Impermeable

sin carga, disacáridos

Iones/moléculas Aminoácidos, H+ HCO3- , Na+ Impermeable

con carga K+, Ca2+, Cl-, Mg2+

El movimiento de las partículas depende también del tamaño de las partículas, de su forma, y de la carga
eléctrica. En los ejercicios de hoy realizaremos varias pruebas para demostrar como ocurre la difusión, diálisis,
y osmosis. Diálisis ocurre a través de una membrana que es selectiva por el tamaño de sus poros. Las
moléculas de mayor tamaño no pasan la membrana.

A. Osmosis y diálisis en una célula modelo artificial

Procedimiento:
1. Amarre la bolsa de diálisis por un extremo
2. Con una pipeta de transferencia llene la bolsa con la solución preparada que contiene: 15% glucosa y
5% Almidón, y amarre el otro extremo)
3. Pese la bolsa y anote el peso (Nota: seque cuidadosamente la bolsa con papel absorbente
(servilletas) antes de pesar)
1
 4. Coloque la bolsa en el fondo del beaker de 250 mL y cubra la misma con solución de Albumina 5%.
5. Añada 8,000 µL de solución Yodo/Lugol al beaker.
6. Mover ligeramente el beaker cada 15 minutos por 2hrs.

7. Prepare 3 tubos de ensayo cada uno con 1000 µL de la solución de 15 % de glucosa con 5% de
almidón. Identifique con Inicio Dentro- Benedict, Inicio Dentro -Biuret, Inicio Dentro -Lugol.
Recuerde que es referente al contenido de la bolsa
8. Prepare 3 tubos de ensayo adicionales y a cada uno le añade 1000 µL de la solución de Albumina
5%. Identifique con Inicio Fuera-Benedict, InicioFuera -Biuret, InicioFuera-Lugol. Recuerde
que es referente al contenido del beaker
9. Al término de las 2hrs remueva la bolsa del beaker y seque con cuidado (Nota: seque
cuidadosamente la bolsa con papel absorbente (servilletas) antes de pesar). Obtenga el peso.
10. Examine bien la bolsa y el agua del beaker. Anote sus observaciones. ¡Observe bien!
11. Prepare 3 tubos de ensayo adicionales con: Final Dentro-Benedict, Final Dentro-Biuret, Final
Dentro- Lugol para realizar las pruebas con el contenido de la bolsa luego de la hora y prepare 3
tubos de ensayo adicional con: Final Fuera -Benedict, Final Fuera-Biuret, FinalFuera- Lugol para
realizar las pruebas con el contenido del beaker luego de la hora.
12. Realice los análisis correspondientes según el protocolo que corresponda.
 La prueba de Benedict utiliza 1000 µL del reactivo y calienta tres minutos
 La prueba de Biuret va a utilizar 500 µL de NaOH 10% y 250 µL de CuSO4 1%
 La prueba de Lugol/ Yodo ya usted lo añadió al comienzo, (8,000uL) en el beaker, cuando
montó su experimento (sin embargo puede realizar la prueba con 100 µL adicionales para hacer
más evidente los resultados y observe).
13. ¡Anote todos los resultados y observaciones!

Tubos Benedict Biuret Lugol / Yodo

Dentro de la bolsa
Inicio
Final

Fuera de la Bolsa (Beaker)

Inicio
Final
Control Agua

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 Prueba de Benedict:
o Propósito – detectar azúcares reductoras
o Procedimiento
 Rotule los tubos de ensayo
 Añada 1000uL de muestra al tubo correspondiente
 Añada 1000uL de agua a un tubo adicional como control
 Cuando esté listo para la prueba, añada 1000uL del Reactivo de Benedict a todos los tubos
 Inmediatamente coloque todos los tubos en agua hirviendo por tres minutos exactos
 Saque del agua hirviendo con cuidado
 Observe y anote los resultados

 Prueba de Biuret:
o Propósito – detectar presencia de proteínas
o Procedimiento
 Rotule los tubos de ensayo
 Añada 1000uL de muestra al tubo correspondiente
 Añada 1000uL de agua a un tubo adicional como control
 Cuando esté listo para la prueba, añada 500 µL de NaOH 10% y 250 µL de CuSO4 1% a
cada uno de los tubos
 Observe los resultados

 Prueba de Lugol:
o Propósito – detectar presencia de almidón
o Procedimiento
 Rotule los tubos de ensayo
 Añada 1000uL de muestra al tubo correspondiente
 Añada 1000uL de agua a un tubo adicional como control
 Añada 100uL de Lugol (Yodo)
 Observe si hay la formación de precipitado negro

Contestas las siguientes preguntas referentes al ejercicio de la bolsita de diálisis

1. Luego de finalizar el ejercicio y realizar todas las pruebas (Benedict (Azúcares Reductoras),
Biuret (Proteínas) y Lugol (Azúcares complejos (Almidón)) ¿Qué sustancias estaban dentro de la
bolsita de diálisis?

2. Luego de finalizar el ejercicio y realizar todas las pruebas (Benedict (Azúcares Reductoras),
Biuret (Proteínas) y Lugol (Azúcares complejos (Almidón)) ¿Qué sustancias estaban fuera de la
bolsita de diálisis?

3. ¿Cuál es la función de la bolsita de diálisis?

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Prueba Benedict:

TEORÍA:

La prueba de Benedict una las reacciones de oxidación que ayuda a reconocer azúcares reductores, es decir, que
presentan su OH libre, como por ejemplo la glucosa, lactosa o maltosa, y pueden reducir el Cu +2. Este presenta
un color azul, en un medio alcalino. Este ion de cobre (Cu +2) se reduce a su forma de Cu+1, por efecto del
grupo aldehído del azúcar (CHO). Este nuevo ion, óxido de cobre (Cu 2O), se observa como un precipitado rojo
ladrillo que se precipita de la solución alcalina con un color rojo-naranja, a este precipitado se lo considera
como la evidencia de que existe un azúcar reductor.

El reactivo de Benedict está compuesto por:

-Sulfato de cobre
-Citrato de sodio.
-Carbonato anhidro de sodio.

1: Benedict's Reagent 2: Benedict's Reagent & 3: Benedict's Reagent & 4: Benedict's Reagent &
& Water Unknown: Negative rx Unknown: Positive rx Glucose Solution
(Negative control). (No reducing sugars). (Some reducing sugars). (Positive control).

http://www.nku.edu/~whitsonma/Bio150LSite/Bio150L%20Images/Lab%2003%20orgo/BenedictsRx.jpg

Prueba de Lugol

TEORÍA:

La prueba de yodo es una reacción química usada para determinar la presencia o alteración de almidón u otros
polisacáridos una solución de yodo - diyodo disuelto en una solución acuosa de yoduro de potasio que reacciona
con almidón produciendo un color púrpura; este tipo de prueba puede realizarse con cualquier producto que
contenga almidón como por ejemplo: las papas, el pan o ciertos frutos.

La prueba de yodo se da como consecuencia de la formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción

entre el almidón y el yodo presente en el reactivo de lugol. ( Preparación del reactivo de Lugol: Se
prepara, con 13 g/L de yodo y 20 g/L de yoduro de potasio, o 5 y 10 g/L respectivamente)

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https://lh4.googleusercontent.com/r14YnJ6VMBWF4w2nqACfofqghTvoDlzTr8OV1HzJrnOKeU8DJmRuJLWK-0Us-
myNLNC3sBIE1-sgZASSLygx0IIvpjwTlpBcdQmJRVY-AeacStvOIZD0FpvqooM4OhoQeg

Prueba del Biuret:

En soluciones alcalinas los iones de cobre, Cu+2, forman complejos con los enlaces péptidos de las proteínas lo
que resulta en la formación de un color morado o violeta. La intensidad del color es proporcional a la
concentración de proteínas. Este método es generalmente aplicable pero el límite de detección es de 0.25mg de
proteínas. Algunas soluciones amortiguadoras y así como otras sustancias encontradas en extractos de tejidos
crudos interfieren con esta prueba. (Wharton 1972)

Left to right: Biuret's reagent (BrR), water + BrR, egg albumin solution, egg albumin solution+ BrR.

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B. Difusión de un sólido en otro sólido
Este ejercicio será en conjunto con todos los integrantes de la sección, a cada mesa de trabajo se le
asignarán 2 tintes y un tinte desconocido. Primeramente invierta la placa de agar e identifique en el fondo del
plato Petri cuales tientes tiene en su mesa. Coloque 20 µL del tinte indicado en el hueco que previamente
usted rotuló en el plato Petri con agar, tápelo y deje reposar por una hora. Mida el diámetro del círculo formado
y calcule la razón de difusión. Esta será inversamente proporcional al peso molecular de la sustancia. Comparta
sus datos con sus compañeros de toda la sección (Deben tener tanto las medidas de todos los tintes como las
fotos de los cuatro platos Petri con agar) OJO: Tiene que medir el tamaño del círculo inicial para poder
calcular cuánto se ha movido desde el frente al sustraer el diámetro pequeño del grande. Es la diferencia
radial lo que cuenta

Plato Petri de Agar

Tinte Peso molecular Medida en (mm) de difusión del

tinte
Iodo 126.90 g/mol
Azul de Metileno 319.85 g/mol
Desconocido # 1
“Neutral Red” 288.80 g/mol
Cristal Violeta 407.98 g/mol
Desconocido # 2
1

Giemsa 291.8 g/mol

Safranina 350.85 g/mol
Desconocido # 3
Azul de Toluideno 305.83 g/mol
“Janus Green” 511.10 g/mol
Desconocido # 4

Contesta las siguientes preguntas referentes al Plato Petri con agar y diversos tintes
1. De acuerdo a los resultados obtenidos, tanto en color como en medidas ¿cuál es su tinte
desconocido? Su tinte desconocido es uno de los ocho tintes utilizados (Iodo, Azul de Metileno,
“Neutral Red”, Cristal Violeta, Giemsa, Safranina, Azul de Toluideno y “Janus Green”.

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C. Osmosis en células de Elodea (se omite)

1. Remueva una hojita de una planta de Elodea.

2. Deposite una gota de agua destilada en una laminilla, luego la hoja, y un cubreobjeto sobre ellos.

3. Distinga entre pared celular, membrana celular, y divisiones celulares.

¿Puede percibir el fenómeno de ciclosis?

4. Añada una solución concentrada de sucrosa al 35% por el borde del cubreobjeto.
¿Qué le ocurre al citoplasma con respecto a la pared celular?
¿Como se llama este fenómeno?
¿Qué ocurriría si colocamos las células en agua pura?

5. Efectué el experimento en h. colocando agua destilada por el borde del cubreobjeto.

¿Cómo se llama este fenómeno?

D. Osmosis en células Sanguíneas (dejarlo para el próximo, ya que Maribel no esta)

Para realizar este ejercicio usaremos sangre humana; de esta forma podremos observar el proceso en una célula
viviente. Las células no pueden controlar el proceso de osmosis ya que, como hemos visto anteriormente, la
membrana plasmática es permeable al agua y osmosis es un proceso que ocurre espontáneamente siguiendo un
gradiente de concentración. Sin embargo las células tienen que controlar su concentración de agua y mantener
las concentraciones de sus solutos en la proporción correcta. Las células animales han desarrollado mecanismos
que las ayudan a mantener las concentraciones correctas de agua tales como la vacuola contráctil de algunos
protistas para la remoción del exceso de agua, y el aumento de concentración de sales internamente para
permitir la entrada del agua.

Procedimiento: (Solo lo realizará 4 estudiantes de la sección, es decir uno de cada grupo).

a. Rotule tres laminillas:
0.85% NaCl, 5% NaCl y Agua
b. Introduzca una lanceta en uno de sus dedos.
c. Coloque una gota de sangre en cada una de las laminillas
d. Agregue una gota de la solución indicada (0.85% NaCl, 5% NaCl y Agua).
e. Coloque cubre objetos y observe por el microscopio.
f. Dibuje las células sanguíneas según se observan en el microscopio

Agua 0.85% NaCl 5% NaCl

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 Tabla Comparativa

Célula animal Solución isotónica –
concentraciones de sal en
la célula están equilibradas
Célula vegetal Solución isotónica –
concentraciones de sal en
la célula están equilibradas
Solución hipertónica- Solución hipotónica- entra agua a la
célula se deshidrata. célula, se hincha y revienta. Ocurre
Ocurre crenación hemolisis
Solución hipertónica- Solución hipotónica- entra agua a la
se destruye la célula célula pero no revienta. Hay pared
Ocurre plasmólisis celular y le confiere turgencia
celular