DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE

NITRÓGENO POR MÉTODO DE MICROKJELDAHL

DETERMINATION OF NITROGEN CONTENT BY MICROKJELDAHL METHOD
Valentina Ramirez Zapata a1735113, Juan Pablo Gil Burgos b1924441, Laura Daniela Arango Ortiz
c
2042816
a
valentina.ramirez.zapata@corrreounivalle.edu.co
b
juan.gil.burgos@correounivalle.edu.co
c
laura.daniela.arango@correounivalle.edu.co

Resumen
Se determinó el porcentaje de nitrógeno y de proteína de una muestra de SOY
PLUS a partir del método microkjeldahl. Se realizó mediante la digestión de
0.0467 g de muestra con CuSO4・MgO, K2SO4 y H2SO4 en un matraz microkjeldahl,
seguido se una microdestilación, que arrastró el nitrógeno, absorbido en H3BO3
al 4% formando iones amonio y borato. Finalmente se tituló los iones borato con
HCl utilizando 5.78 mL al 0.0196M. Se obtuvo porcentajes de 3.60% y 20.56%
correspondientes al porcentaje de nitrógeno y de proteína respectivamente y
obteniendo un porcentaje de error relativo de 14.22%, con un valor mayor del
%proteína descrito para la muestra, con posibles errores en el proceso de
digestión, procesando al nitrógeno no proteico como proteico.

1. Datos, cálculos y resultados. H3BO3. Una vez el indicador viró, se

La determinación de proteína en una realizó la titulación utilizando como
muestra de SOY PLUS se hace a titulante HCl hasta un viraje del
partir del contenido en nitrógeno de naranja de metilo (ver tabla 1).
esta. Se tomaron 0.0467 g
aproximadamente de la muestra, a la Tabla 1. Resultados obtenidos en el
laboratorio.
cual se le añadió CuSO4・MgO y
K2SO4. Luego se adicionó 2.5 mL de Peso de la muestra 0.0467 g
H2SO4 y se digestó la muestra hasta
Peso CuSO4 0.1518 g
el cambio de coloración a incoloro.
Seguidamente se dejó enfriar, se Peso K2SO4 2.02 g
añadió una pequeña porción de agua
Titulación con HCl 5.78 mL
para disolver la muestra y se
procedió a realizar la destilación (ver
figura 1), de tal manera que el
nitrógeno arrastrado fue recibido en
 mismo de sus concentraciones;
dando como resultado
𝑥̄ = 8. 13 𝑦 𝑥̄ = 0. 0196
respectivamente.
Se procede a determinar el
porcentaje de nitrógeno que
contiene esta muestra, a partir de la
Ecu. 2 (ver Anexos)con un resultado
de 3.60%; el %Humedad fue
Figura 1. Montaje para destilación en el determinado por un grupo de
método de Microkjeldahl laboratorio y su valor es de 5.7087%.

Para el tratamiento de la solución de Posteriormente se calcula el

HCl, 2 analistas realizaron 3 porcentaje de proteína contenida en
estandarizaciones cada uno, la dicha muestra a partir de la Ecu.
estandarización se realizó con 5 mL 3,(ver Anexos) obteniendo un valor
de una muestra de Na2CO3 0.01593 M de 20.56%.
preparada por un grupo de
laboratorio; los resultados obtenidos De acuerdo con la etiqueta de la
son: muestra (ver figura 2) y siguiendo la
Ecu. 4 se calcula el porcentaje de
Tabla 2. Resultados de la error relativo.
estandarización del HCl de cada
analista.
Analista 1 Analista 2

Volumen 1 8.10 mL 8.20 mL

Volumen 2 8.00 mL 8.30mL

Volumen 3 8.10 mL 8.10 mL

Volumen 8.07 mL 8.20 mL

promedio

La concentración del HCl fue

determinada de acuerdo con la Ecu.
Figura 2. Etiqueta informativa de la muestra.
1, (ver Anexos) obteniendo un valor
para el analista 1 de 0.0197 M, y para |𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 − 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙|
%𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜
𝑥100
el analista 2 de 0.0194 M.
%𝑒𝑟𝑟𝑜𝑟 = 14. 22%
Se calcula el promedio del volumen Ecuación 4. Porcentaje de error relativo
del HCl para el analista 1 y 2, así

2. Discusión
Para la determinación de nitrógeno y
proteína en una muestra de SOY
PLUS se empleó el método de
microkjeldahl. Este método se divide
en tres etapas principales conocidas
como: digestión, destilación y
titulación.
En el proceso de digestión se
rompen todos los enlaces de
nitrógeno de la muestra y se
convierte todo el nitrógeno unido
orgánicamente en iones amonio
(NH4+), mientras que el carbono
orgánico y el hidrógeno forman
dióxido de carbono y agua. [1]. Este
proceso se realizó con ácido
sulfúrico concentrado, que bajo la
influencia de altas temperaturas
actúa como un agente oxidante, en
presencia de CuSO4・MgO y K2SO4,
catalizadores que provocan un
aumento en la temperatura de
ebullición del ácido sulfúrico y la
velocidad, con mayor eficiencia del
procedimiento de digestión. El
catalizador con el elemento Cu es
altamente utilizado debido a que es
más seguro para las personas y el
medio ambiente. El uso del K2SO4 es
para aumentar la severidad de la
reacción, debido a que muchos de
los componentes con nitrógeno no
se descomponen, o sólo
parcialmente, a la misma
temperatura del punto de ebullición
del ácido sulfúrico, aumentando esta
temperatura en el ácido,[1] mientras
que el MgO es usado para reducir, si
se presenta en la muestra, los grupos
azo y nitro en nitrógeno amoniacal.
En este proceso se produjo espuma
negra, indicando la carbonización de
la materia orgánica. Esta espuma se
descompuso pasando a un líquido
claro que indicó la finalización de la
reacción.
La reacción llevada a cabo en el
proceso es la siguiente:
Proteína + H2SO4→(NH4)2SO4 +CO2+H2O
Reacción 1.
Luego se pasó al segundo proceso
que es la destilación mediante el
traspaso del líquido al matraz
kjeldahl, en el cual los iones amonio
se convierten en amoniaco mediante
la adición de NaOH, recomendado
para neutralizar los digeridos antes
de la destilación [2], como se muestra
en la siguiente reacción:
(NH4)2SO4 + 2NaOH → 2NH3 + Na2SO4 + 2H2O
Reacción 2.
El destilado fue recibido en un
contenedor con la solución
absorbente de ácido bórico para
capturar el gas amoniaco disuelto:
B(OH)3 + NH3 + H2O → NH4+ + B(OH)4
Reacción 3.
Para el proceso de valoración se usó
HCl, que al estandarizar con Na2CO3
al 0.01593M se obtuvo una
concentración de 0.0196M, La
detección del punto final se realizó
con una valoración colorimétrica,
utilizando el naranja de metilo como
indicador, con un valor de 5.78 mL
como promedio de los valores de los
dos analistas.
B(OH)4 +HCl → B(OH)3 + H2O + Cl-
Reacción 4.
nucleicos, urea, aminoácidos libres,
compuestos amoniacales, etc, que
hacen parte de los compuestos NNP.
Otro de los posibles errores que
puede llegar a interferir es la poca
cantidad de muestra que se analizó,
que debe de ser representativa de un
lote de producción [4].

Al terminar la valoración se procedió

a calcular el porcentaje de N. por 3. Preguntas
medio de la ecuación 2 indicando un
3.60% de N y un 20.56% de proteína 1. Explique claramente por qué
en la muestra, usando el factor de la titulación final debe
5.71 que es el valor que corresponde realizarse con HCl y no con
al valor en la literatura para la soya. NaOH.
Como en el proceso de destilación se
En la mayoría de los procesos
recibe el amoniaco en exceso de
kjeldahl hay pérdidas por la
H3BO3 y este último es un ácido
volatilidad del NH3, o por la
débil, su pH se ve afectado de tal
descomposición incompleta en la
manera que se convierte en alcalino
digestión, pero en este caso hubo un
al contacto con el amoniaco, y de
valor mayor en el %N en la muestra
acuerdo con esto se debe titular con
de soya analizada, con un error
HCl el exceso del complejo H2BO3-1
relativo de 14.22% comparado con el
utilizando indicador ácido.
valor del empaque. Este error puede
ser debido a que en el proceso de
2. Si el amoniaco proveniente de
digestión, para la cuantificación de
1.50 g de una muestra que
los compuestos nitrogenados
contiene 8.5% p/p de N, se
proteicos (NP) de la muestra, se
recibe en HCl 0.1 M ¿Cuál debe
descomponen compuestos
ser el mínimo volumen del
nitrogenados no proteicos (NNP),
ácido a utilizarse para
que interfieren con el valor obtenido
garantizar que el análisis es
de N, mostrando un mayor
correcto?
porcentaje. Para este método en la
Para este caso se titula con NaOH el
soja se asume una baja relación
exceso de iones H+, lo que quiere
NNP/NP [3]. pero la soja puede tener
decir que el volumen mínimo
presencia de creatina, como también
requerido para efectuar el análisis lo
pueden estar presentes ácidos
podemos encontrar en los anexos.

3. Consulte sobre los montajes
experimentales diferentes al
que se realizó en la práctica de
Kjeldahl y menciona las
posibles ventajas.
Un montaje experimental posible
para prácticas más minuciosas y
avanzadas sería el uso de un
depurador (industrial), es un
dispositivo que depura la
contaminación del aire eliminando
partículas o gases de conductos de
escape industriales. Se refiere a
dispositivos que usan un líquido para
eliminar el contaminante no deseado
del conducto de escape de gases.
Diferente a como se realizó en esta
práctica.
Otro mecanismo no usado en esta
práctica, es el uso de catalizadores
Kjeldahl, los catalizadores están
compuestos por más del 97% de una
sal que provoca un aumento en la
temperatura de ebullición del ácido
sulfúrico y del 1-3% de un tipo de
catalizador o una mezcla de
catalizadores para aumentar la
velocidad y la eficiencia del
procedimiento de digestión. Los
catalizadores típicos son selenio o
sales metálicas de cobre o titanio.
4. Consulte algunos
procedimientos donde se
utilice la técnica de Kjeldahl,
es decir el tipo de alimento,
tratamiento de muestra y el
indicador. Debe de estar bien
referenciado.
El método de Kjeldahl es
ampliamente utilizado para la
determinación del contenido de
nitrógeno y cantidad de proteína de
muestras orgánicas e inorgánicas[5].
La determinación del nitrógeno
Kjeldahl se realiza en alimentos y
bebidas, carne, piensos, cereales y
forrajes para el cálculo del contenido
en proteína. También se utiliza el
método Kjeldahl para la
determinación de nitrógeno en
aguas residuales, suelos y otras
muestras. [6] generalmente este
procedimiento se hace a través de
tres etapas elementales, las cuales
son; la digestión donde el nitrógeno
orgánico se convierte en NH4+, la
destilación del NH3, el cual es
recogido en un recipiente receptor, y
por último la valoración, donde si la
solución receptora es ácido bórico,
los aniones tetrahidroborato
formados se titulan con una solución
estándar de un ácido fuerte. Esta
valoración se llama valoración
directa, y si la solución receptora es
un ácido clorhídrico o un ácido
sulfúrico estandarizado, el exceso de
solución ácida se neutraliza
exactamente mediante una solución
alcalina normalizada, como el
hidróxido de sodio. El punto final se
detecta con un indicador de color, el
más utilizado es el naranja de metilo.
Esta valoración se llama valoración
por retroceso[7].
4. Conclusiones
Se logró determinar el contenido de
nitrógeno y de proteína de la
muestra de SOY PLUS a partir del
método de microkjeldahl que es uno
de los métodos más utilizados para la
determinación de nitrógeno en
sustancias orgánicas, obteniendo un
error relativo del 14.22%, con un
valor mayor en el %proteina. A pesar
de ser un procedimiento directo y
sencillo en el que son utilizadas
mayores cantidades de muestra,
posee desventajas como lo es la
descomposición de compuestos
nitrogenados no proteicos que
contribuyen al valor final del %N que
posteriormente son analizados como
%proteína.
5. Referencias
[1] Bradstreet, R. B. (1965). The
kjeldahl method for organic nitrogen.:
New Jersey: Academic Press. 15-26.
[2] Ballentine, R., Gregg, JR. (1947).
Micro-Kjeldahl Determination of
nitrogen. Anal. Chem., 19 (4), 281–283.
[3] Krober, O., Gibbons, S. (1962).
Composition of Feedstuffs,
Nonprotein Nitrogen in Soybe ans. J.
Agric. Food Chem., 10 (1), 57–59.
[4] Otzen, T., Manterola, C. (2017).
Técnicas de Muestreo sobre una
Población a Estudio. Int. J. Morphol.,
35 (1), 227-232.
[5] NUTRICIÓN Y ALIMENTACIÓN
DE PECES Y CAMARONES
CULTIVADOS MANUAL DE
CAPACITACIÓN.(s / f). Fao.org.
Recuperado el 3 de enero de 2022,
de
https://www.fao.org/3/ab492s/AB49
2S06.htm
[6] Ma, TS y Zuazaga, G. (1942).
Determinación micro-Kjeldahl de
nitrógeno. Un nuevo indicador y un
método rápido mejorado. Edición
analítica de química industrial y de
ingeniería , 14 (3), 280-282.
[7] Villegas, E., Ortega Martinez, E. I.,
& Bauer Mengelberg, J. R. (1985).
Métodos químicos usados en el
CIMMYT para determinar la calidad
de proteína de los cereales.
[8] Skoog, D. A., & West, D. M. (1980).
Introducción a la química analítica.
Reverté. 318-333.
 ANEXOS

0.01593 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2𝐶𝑂3 5 𝑚𝐿 𝑁𝑎2𝐶𝑂3 2 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙

[𝐻𝐶𝑙] = 1 𝑚𝐿
𝑥 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
𝑥 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎2𝐶𝑂3

Ecuación 1. Concentración del HCl

1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑁 14 𝑚𝑔 𝑁
(𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝐻𝐶𝑙 × 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝐻𝐶𝑙) × 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐻 × 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝑁
% 𝑁𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜 = 𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑒𝑛 𝑚𝑔×(100−%𝐻𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑)%
× 100
% 𝑁𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜 = 3. 60%
Ecuación 2. Porcentaje de nitrógeno de una muestra

%𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 = %𝑁𝑖𝑡𝑟ó𝑔𝑒𝑛𝑜 × 5. 71 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑐𝑜 (𝑠𝑜𝑦𝑎) [1]

%𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 = 20. 56%
Ecuación 3. Porcentaje de proteína de una muestra.

8.5 𝑔 𝑁 1 𝑚𝑜𝑙 𝑁 1 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙 1000 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙

1. 50 𝑔 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥 100 𝑔 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑥 14.0067 𝑔 𝑁
𝑥 1 𝑚𝑜𝑙 𝑁
𝑥 0.1 𝑚𝑜𝑙 𝐻𝐶𝑙
= 91. 0 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙
Pregunta 2.