Protocolo para el cultivo de microorganismos del suelo en

medio PDA.

1. Picar las papas en pedazos pequeños, hasta alcanzar 125 gramos de estos
mismos.
2. Hervir los trozos de papa en 250 mililitros de agua por 30 minutos.
3. Una vez listo, filtrar con la ayuda de una gasa el caldo de papa en
un vaso precipitado.
4. Medir el volumen de 250 mililitros de caldo de papa en una probeta.
5. Agregar 7.5 gramos de Agar y agitar con la varilla de vidrio hasta disolver.
6. Agregar 10 gramos de Dextrosa y agitar hasta disolver.
7. Medir el potencial de hidrógeno con un potenciómetro. Igualar el medio a
un pH neutro.
8. Esterilizar el medio de cultivo.
9. Esterilizar 8.5 a 9mL de solución salina a 120°C por 20 minutos en la
autoclave.
10. Colocar en un tubo de ensayo la solución salina, posteriormente introducir
1g de suelo en la solución.
11. Calentar en el microondas el medio solidificado con la reacción del Agar
por 3 a 6 minutos, hasta lograr un medio líquido.
12. Plaquear en las placas Petri el medio de cultivo PDA.
13. Agitar la muestra del tubo de ensayo con el Vortex, 20 RM por 20 segundos.
14. Pausar por 10 segundos para sedimentar la muestra, y repetir este paso dos
veces.
15. Desinfectar el ambiente donde se va a trabajar, para prever la
contaminación delmedio de cultivo.
16. Colocar la muestra bocabajo, utilizando una sola mano.
17. Con la ayuda de una Micropipeta, agregar 50 microlitros de la muestra en el
medio de cultivo previamente plaqueada en las placas Petri. Es importante
abrir la tapa del tubo de ensayo con una sola mano.
18. Uniformizar los microorganismos en las plantas Petri, luego con el uso del
método del agotamiento, llevar los microorganismos en zigzag hasta llegar
a la mitad de la placa, para luego terminar con otro zigzag por la otra mitad.

COMOPARADO CON: Gallut P. (2016). AISLAMIENTO Y CULTIVO DE

MICROORGANISMOS ASOCIADOS A ONCOIDES DE MANANTIALES
HIDROTERMALES DE SANTISPAC, BAHÍA CONCEPCIÓN, B.C.S.,
MÉXICO.

Autor: Luis Alonso Sordómez Torres de Oliva