MICROBIOTA NORMAL AMBIENTAL

INTRODUCCION

La biodiversidad también conocida como diversidad biológica, está definida como la

variabilidad en diferentes escalas de organismos vivos ya sea en un ecosistema terrestre,
acuático o aéreo. El término engloba la diversidad genética, diversidad de los
organismos y diversidad ecológica, es decir, dentro de las especies (variación en genes),
entre las especies, y entre los ecosistemas, hábitats y comunidades naturales,
respectivamente (FAO, 2015, pág. 1)
.
Los microorganismos son organismos ubicuos y en los ambientes naturales se
encuentran usualmente como poblaciones mixtas, por lo que es necesario tenerlos como
cultivos puros por medio de aislamientos, para así poder identificarlos y caracterizarlos.
(Ramirez , Velasquez, & Mejia, 2006) Los microorganismos se encuentran
prácticamente en todas las regiones del planeta, desde los polos, en ambientes bajo el
punto de congelación y muy secos, hasta los trópicos con temperaturas altas y con
elevada precipitación pluvial. Su presencia y actividad es esencial para la salud y
funcionamiento adecuado de todos los ecosistemas. (Aguilera & Olalde Portugal,
1998).

La preparación de un cultivo puro implica aislamiento de un determinado

microorganismo y su mantenimiento y el de su descendencia. Es importante determinar
los diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación óptimas para cada uno de
ellos y así lograr la formación de colonias visibles aisladas. (Alvarez, Blandon,
Ceballos, & Mejia, 2018).

Es posible utilizar diferentes estrategias para el aislamiento e identificación de

microorganismos: Separación física mediante diluciones seriadas y siembra en medios
de cultivos selectivos y diferenciales y aprovechamiento de características particulares
de los microorganismos. Para facilitar y mejorar el proceso generalmente se combinan
estas estrategias. (Madigan, Martinko, & Parker, 2003)
El agua, sustancia esencial para la vida de microorganismos, actúa como vehículo de
transmisión de microorganismos entéricos ya que la materia fecal puede
accidentalmente alcanzar las fuentes de abastecimiento. Los controles rutinarios de la
totalidad de microorganismos hídricos resultan difíciles debido a la gran variedad de
bacterias patógenas cultivables. (Ramos, 2008)

El suelo presenta una dinámica tal que podríamos afirmar que es el ecosistema más
estable y sustentable para el grupo microbiano, los aportes de materia orgánica e
inorgánica mantienen una inmensa cantidad de microbios los cuales apenas estamos
comenzando a descubrir. (Toro Castaño, 2004). El suelo está constituido por minerales
de varios tamaños, formas y características químicas, raíces de plantas, población de
organismos vivos (microorganismos) y materia orgánica en varias etapas de
descomposición. Cada factor físico y químico del suelo influye en el crecimiento o
actividad de los microorganismos. (Benintende & Sanchez, 2000)

La atmósfera no tiene una microbiota autóctona, pero es un medio para la dispersión de

muchos tipos de microorganismos de otros ambientes. Estos tienen una gran
importancia biológica y económica ya que producen enfermedades en plantas, animales
y humanos y causan alteración de alimentos. (de la Rosa, Mosso, & Ullán, 2002)

Objetivos

 Aislar e identificar distintos microorganismos como bacterias y hongos presentes en

diferentes ambientes (suelo, agua y aire).

 Observar y caracterizar a partir de preparaciones microscópicas en fresco y tinciones

simples que permitan la diferenciación de la morfología y tamaño celular
 Materiales y métodos

Materiales

Figura 1: Espátula Figura 2: Luna de reloj Figura 3: Tubos de emsayo

Figura 5: CajasFigura
de Petri4: Frascos tapa Figura 6: Pipeta
azul de 500 ml

Figura 7: Micropipeta Figura 8: Pipeteador Figura 9: Autoclave

(puntas amarillas)
Figura 10: Plancha de Figura 11: Balanza Figura 12: Agua destilada
calnetamiento

Figura 14: Agar nutritivo Figura 15: Agar de papa

Figura 13: Solución salina dextrosa (PDA)
NaCl (0.95%)

Bibliografía:

Aguilera, L. I., & Olalde Portugal, V. (1998). MICROORGANISMOS Y BIODIVERSIDAD. Chapingo,

Mexico: Terra Lationamericana.

Alvarez, M., Blandon, L., Ceballos, V., & Mejia, M. (2018). Aislamiento de Microorganismos en
diferentes ambientes (Suelo, Agua y Aire). Colombia: Universidad Libre Pereira.

Benintende, S., & Sanchez, C. (2000). Microorganismos del suelo. Facultad de Ciencias
Agropecuarias: Universidad Nacional de Entre Ríos .

de la Rosa, M., Mosso, M., & Ullán, C. (2002). El aire: hábitat y medio de transmisión de
microorganismos. Observatorio medioambiental.

Madigan, M., Martinko, J., & Parker, J. (2003). Biología de los microorganismos. 10ª edición.
España: Prentice Hall Iberia.

Ramirez , L., Velasquez, V., & Mejia, A. (2006). Manual de Prácticas de Microbiología General.
5ª edicion. Mexico: Universidad Nacional.

Ramos, J. (2008). Microorganismos del agua. Mexico: Universidad Autónoma de Yucatán.

Departamento de Biologia Experimental.

Toro Castaño, D. (2004). LA BIODIVERSIDAD MICROBIANA DEL SUELO, UN MUNDO POR

DESCUBRIR. Universidad de Caldas.
Procedimiento
Preparación de medios de cultivo
(Agar nutritivo y PDA) y de agua peptona
 Preparar 350 ml de agar nutritivo y 50 ml de PDA según protocolo.
 Llevar a autoclave durante 15 min a 121 °C;
 Servir en cajas de Petri y se llevar a prueba de esterilidad.
Preparación de Agua Peptona
 Preparar 200 ml (6 tubos) de agua peptona según protocolo.
 Llevar a autoclave por 15 min a 121 °C.

Preparación de agar nutritivo

Contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulación suficiente para el
desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne proporciona al medio fuente de
carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El empleo de este medio es de acuerdo al tipo de
estudio por realizar.
Preparación: Rehidratar 23 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15
minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto
para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante
15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar
en refrigeración de 2 a 8ºC.
Preparación de agar PDA
Tiene infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa son la base para el
crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita el crecimiento de las bacterias.
Cuando se va a usar para el recuento de hongos y levaduras, agregar al medio de cultivo
una vez esterilizado y enfriado aprox. a 45ºC, 14 ml de una solución estéril de ácido
tartárico al 10% para obtener un pH aprox. de 3.5. Sembrar el medio de cultivo por estría
en la superficie o adicionar la muestra para la técnica de vaciado en placa. Incubar hasta
7 días a temperatura ambiente.
Preparación agar de dextrosa y papa: Rehidratar 39 g del medio en un litro de agua
destilada. Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de
ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC
 (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar de
acuerdo a la técnica a seguir en cajas de Petri estériles.
-Agua peptonada tamponada o bufferada
Contiene hidrolizado enzimático de caseína, cloruro de sodio, pH final es de 7,0 ± 0,2.
El inóculo se realiza colocando la muestra de forma directa. Se usa para diluir las
muestras, especialmente cuando se sospecha que puedan haber bacterias dañadas. Por lo
general las diluciones son 1:10 y 1:100.

Preparación, pesar 15 g del medio deshidratado y disolver en 1 litro de agua destilada.

Dejar en reposo por 5 minutos aproximadamente. Calentar por 1 minuto hasta disolver
completamente. Verter sobre frascos adecuados según la necesidad. Esterilizar utilizando
el autoclave a 121°C por 15 minutos.

Aislamiento de microorganismos de suelo

 Pesar 1 g de tierra y se diluir en 9 ml de agua peptona estéril (10 -1),
 Homogenizar y dejar reposar un momento para que los sólidos decanten.
 A partir de esta solución realizar dos diluciones más (10 -2 y 10-3) en agua peptona
estéril.
 Para la siembra se tomar 1 ml de cada dilución y sembrar cada una en agar nutritivo con
ayuda de un asa de drigalsky.
 Finalmente incubar las placas a temperatura ambiente por 7 d y evaluar su crecimiento.
Aislamiento de microorganismos de agua
 Tomar una muestra de agua de charco y depositar en una botella de vidrio esteril.
 Luego tomar 1 ml de la muestra, y suspender en 9 ml de agua peptona (10 -1) y
homogenizar.
 A partir de esta solución realizar dos diluciones más (10 -2 y 10-3) en agua peptona
estéril.
 Para la siembra tomar 1 ml de cada dilución y sembrar cada muestra en agar nutritivo
con ayuda de un asa de drigalsky.
 Finalmente incubar las placas a temperatura ambiente por 7 d y evaluar su crecimiento.
Aislamiento de microorganismos de Aire
 Tomar una placa de PDA y exponer al aire libre por 15 min.
 Luego llevar a la incubadora por 7 d y evaluar su crecimiento.
Observación de los microorganismos
 Después de los 7 días de incubación a temperatura ambiente, evaluar el crecimiento de
microorganismos y observar sus características macroscópicas,
 Luego realizar un conteo de las colonias predominantes y realizar la tinción de las
mismas para su identificación microscópica;
 Para el caso de las bacterias realizar la tinción de Gram
 En el caso de los hongos realizar el montaje con Azul de Lactofenol.

RESULTADOS
DISCUSIÓN
CONCLUSIÓN
BIBLIOGRAFÍA