HISTOLOGÍA – UNIDAD 4 1

Técnicas Histológicas y
Microscopía
Histología: Estudio del tejido, análisis de la 4 tejidos básicos:
composición microscópica y las funciones de los
• Epitelial
organismos pluricelulares.
• Conectivo
Técnicas histológicas: Pasos necesarios para • Muscular
obtener las muestras aptas para su observación. • Nervioso
Células y tejidos vivos (cultivos). Organos: Unidades funcionales mayores
compuestos por distintos tipos de tejidos.
Material muerto o inanimado.
Técnica histológica
Primer Microscopio
Toma de muestra → Fijación → Inclusión → Corte
→ Coloración → Montaje → Observación.

Toma de Muestra
• Tamaño 1x1x1 cm.
• Instrumental en
buenas condiciones.
• Evitar desgarros del
material.
• Incluir tejido sano y
Un poco de Historia…
alterado (lesiones circunscriptas).
• Antonie Van Leewenhoek (1632-1723): Fijación
inventor del microscopio. •
• Marcello Malpighi (1628- 1694): Fundador de • Abolir el metabolismo celular.
la histología • • Detener autólisis (auto digestión).
• Hooke (1635-1702): Descubrió que el tejido • Preservar estructura celular y tisular.
vegetal está formado por pequeñas cámara • Destruir microorganismos patógenos.
o celdas a las que llamo células. • Tipos:
• 1838: Teoria celular (reino vegetal)
• 1839: Teoria celular (reino animal)
Célula: Elemento fundamental del organismo, los
cuales están formados por agrupaciones de las
mismas.
Tejido: Agrupación de células (de distinto tipo), que
llevan a cabo determinadas funciones.
Células + matriz extracelular
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HISTOLOGÍA – UNIDAD 4 2
Fijadores químicos: Corte
→ Formol 10% • Con micrótomo
→ Formol bufferado • Cortes delgados (5 - 15Mc)
→ Bouin • Cuchillas de acero
→ Alcoholes (etanol, metanol) • Recogidos en portaobjetos y se adhiere por
Considerar: calor en estufa

• Tamaño del frasco, cierre hermético.

• Proporción volumen fijador/muestra
(20:1 a 40/1).
• Tamaño de la muestra.
• Características de la muestra ¿pulmón?
• Tiempo de fijado (mín. 24hs).
• Rotular, breve reseña.
Inclusión
Tiene como objetivo endurecer el tejido. Tenemos 3
fases: Crióstatos: micrótomos de congelación para
→ Deshidratación: Con concentraciones muestras congeladas.
crecentes de alcohol.
→ Aclaramiento: Retirar el alcohol con
Coloración y montaje
solventes orgánicos (xileno o tolueno).
→ Inclusión: Con la parafina para obtener el
bloque.

Tinción de rutina: hematoxilina/ eosina.

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HISTOLOGÍA – UNIDAD 4 3
Artificios Tinción
Estructuras del preparado que no existen en el
tejido vivo, aparecen durante el proceso de
preparación.

Metacromasia: Si se tiñe un corte con una solución

de un colorante básico (azul de toluidina), el mismo
forma enlaces electrostáticos con los componentes
aniónicos y las moléculas del colorante se
acumulan donde estos grupos están mas cercanos,
en consecuencia el color se modifica (Vira al rojo-
purpura).

Métodos Histoquímicos
Permite obtener información sobre la localización
de las estructuras celulares y tisulares.
Excepciones a la técnica de
Se utilizan distintos métodos con diferentes
propiedades químicas y físicas que interaccionan rutina
con los componentes tisulares y celulares.
Los colorantes de rutina son Eosina y Hematoxilina. • Hueso
• Citología
• Sangre
• Microscopía
elerónica

Tinciones especiales
• PAS (hidratos de carbono)
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HISTOLOGÍA – UNIDAD 4 4
• Sudán (lípidos) Feulgen
• Impregnación argéntica (fibras reticulares)
• Romanovsky-May Grünwald-Giemsa Tiñe ADN.
(sangre)
• Orceína/ Resorcina- fucsina (fibras
elásticas)
• Tricrómico (diferenciar
tejidos)
Tricrómico de Mallory
• Inmunocistoquímica
• Azul de anilina (colageno)
(identifica
• Fuscina acida (núcleos)
proteínasantígenos en
• Naranja G (eritrocitos)
células o tejidos)

Microscopia
Reacción de PAS Microscopio: instrumento que aumenta el tamaño
de una imagen y permite ver detalles que no son
(Acido peryódico reactivo de shiff)
posibles ver a simple vista.
Tiñe carbohidratos y macromoléculas con
El poder de resolución es la distancia que debe
abundancia de los mismos. Color rojo-purpura.
haber entre 2 puntos del objetos para verse
Se usa para detectar: separados.
• Glucógeno en las células. Ojo humano: 0.2mm 1mm 10-3 mts
• Membrana Basal.
MO: 0.2 µm 1µm 10-6 mts 1µm 10-6 mts
• Fibras reticulares.
ME: 0.05 nm/1 nm 1nm 10-9 mts
1Å 10-10 mts

Sudan Microscopia Óptico (MO)

• Rojo Sudan ------- Adipocitos.
(Triglicéridos).
• Negro Sudan----- Vainas de mielina
(Lipoproteínas).

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HISTOLOGÍA – UNIDAD 4 5
Parte mecânica:
• Tubo
• Platina
• Subplatina
• Columna
• Pie
• Revolver
• Tornillos macrométrico y micrométrico
Parte óptica: Cuando se aleja del preparado aumenta el
contraste de la imagen.
• Ocular
• Objetivos
• Diafragma
• Condensador
• Fuente de luz
La imagen que se forma es…
• Virtual
• Invertida
• Aumentada
Puede ser natural o artificial.
Aumenta la imagen de 7x a 12x (10x)

Sostiene a los objetivos y permite el cambio Le da soporte y movilidad al preparado.

Se utiliza para poder regular la distancia.

Existen secos y de inmersión …

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HISTOLOGÍA – UNIDAD 4 6

Lentes del MO
Limite de resolución: 0,2 µm ( pero con los
preparados de rutina rara vez es > 0,5 µm). Diferencias MOC vs MET
Las lentes del objetivo tienen distintos aumentos (
4, 10, 20 y 40 X).
El lente ocular tiene un aumento de 10 X.
Aumento total resultante: producto entre los
aumentos del objetivo y el ocular.

Microscopia Electrónica (ME)

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