Procedimiento para la elaboración de un medio de

cultivo

1. Leer las instrucciones en el bote del medio de cultivo.

2. Calcular la cantidad de medio que se va a preparar:
a. 25 mL por caja petri sencilla
b. 30 mL por caja petri con divisiones
c. 7 mL por tubo con agar en inclinado
d. 4 mL por tubo con caldo o con paquete semisólido
3. Por ejemplo, si voy a preparar 8 cajas dobles de agar Sal Manitol: 8(30)=240 mL de
medio.
4. Medir la cantidad de agua destilada a utilizar. Llenar el matraz hasta máximo dos
tercios de su capacidad. Adicionar el polvo de medio de cultivo de acuerdo a las
instrucciones del bote.
5. Por ejemplo:
111g medio Sal Manitol  1000 mL agua destilada
X  240 mL agua destilada
= 26.64 g de Sal Manitol en 240 mL de agua destilada
6. Agitar el medio y clarificarlo (calentar en la flama del mechero hasta una disolución
completa, hasta que el medio quede “claro”). OJO: los caldos no se clarifican.
7. Poner un “gorrito” de algodón y encima papel estraza a los matraces.
8. Esterilizar en autoclave 15 minutos, 121°C, 15 lb/in 2. OJO: no todos los medios se
esterilizan. Esa instrucción viene en el bote del medio de cultivo. Los medios que van
en tubo, se vacían en los tubos ANTES de esterilizarlos, dejando el tapón flojo.
9. Para los medios que no se esterilizan, dejar enfriar hasta alrededor de 40°C (que lo
puedas tomar con tus manos y no te quemes) y vaciar en cajas petri. Los medios que
entraron al autoclave, cuando salgan esperar a que se enfríen y luego vaciar. El
vaciado debe ser en condiciones asépticas, junto al mechero, con guantes y
cubrebocas, flameando la boca del matraz entre cada caja.
10. Los medios que van en tubo, cerrarlos bien, inclinarlos cuando sea necesario. Dejar
que el medio solidifique, y voltear las cajas antes de guardarlas en el refrigerador.
11. No olviden que todo debe de estar etiquetado con el nombre del medio, la fecha y su
grupo, y ser guardado en el área correspondiente del refrigerador.