2ª Evaluación de Modulo II Submodulo 1 Identifica microorganismos en base a

técnicas bacteriológicas.
Género Staphylococcus
Pertenece a la familia Micrococcaceae al igual que los géneros Planococcus,
Stomatococcus , Micrococcus.

Características generales de Género Staphylococcus

Las especies del gènero Staphylococcus son cocos Gram positivos agrupados en
forma de racimo de uvas , no móviles , anaerobios facultativos , catalasa positiva.
Normalmente se encuentran en la piel y las mucosas de los humanos , así como en
las de otros mamíferos y aves . ; actualmente se reconocen más de 40 especies, las
más frecuentes asociadas a infecciones de humanos son : Staphylococcus
epidermidis , S. haemolyticus , S . saprophyticus , S. aureus siendo la única
especie hallada en humanos que produce la enzima coagulasa y considerado uno de
los màs virulentos ; todas las demás especies son conocidas habitualmente como
Staphylococcus coagulasa negativa.

Staphylococcus aureus
Como mecanismos de patogenicidad se encuentran los siguientes :
A) Presentan cápsula
B) Producen toxinas : Leucocidina ,exfoliativa , del síndrome del shock tòxico y
enterotoxinas , hemolisinas.
C) Producción de enzimas : Coagulasa ,catalasa , hialuronidasa , fibrinolisina ,
lipasas , nucleasas , penicilinasa

Se encuentra comúnmente como flora normal de piel y mucosas, pero es

causante de:
Abscesos
Foliculitis
Forunculosis
Síndrome de piel escaldada
Impètigo
Síndrome del shock toxico
Neumonía
Osteomielitis
Intoxicación alimenticia

Medios de aislamiento
Para su aislamiento crece perfectamente en la gelosa sangre pero se utilizan medios
selectivos y diferenciales como el agar de sal y manitol o el agar de S110 , tiene
como característica metabólica que utiliza el manitol observándose colonias de
color amarillo en el agar de SM.
Su identificación se basa principalmente con la realización de la prueba de la
coagulasa.

Pruebas de identificación
Prueba de producción de la catalasa
1
A una gota de peroxido de hidrógeno ( agua oxigenada ) se le agrega parte de una
colonia sospechosa del género Staphylococcus ; si se produce un burbujeo se dice
que la prueba es positiva ( catalasa positiva ) , y si no se produce dicho burbujeo se
dice que la prueba es negativa ( catalasa negativa ).

Prueba de la coagulasa
A un tubo de hemolisis se le agregan 10 gotas de plasma con citrato de sodio , se
deposita una muestra de la colonia sospechosa de Staphylococcus aureus y se
incuba a 37 ° C 24 hrs. : La formación de un coagulo indica que la prueba de la
coagulasa es positiva , confirmándose que se trata de un Staphylococcus aureus
considerándose éste como patógeno. Y si no se forma dicho coagulo , se dice que
se trata de un Staphylococcus coagulasa negativa.
Staphylococcus coagulasa negativa

Características de los Staphylococcus coagulasa negativa

Son todas aquellas especies de este género que son cocos Gram positivos
agrupados en forma de racimo de uva , catalasa positiva y no producen coagulasa,
se encuentran también normalmente como flora de piel ; crecen perfectamente en
los medios en que desarrolla S. aureus observándose colonias blancas o ligeramente
amarillas y el agar alrededor de ellas de color rosa y la forma de diferenciarlos se
basa en la prueba de la coagulasa , la especies de este grupo que se aíslan con más
frecuencia son el Staphylococcus epidermidis causante de endocarditis , infección
de catéteres y de infección en los sitios de prótesis , produce el limo , no fermenta
manitol.
Otra especie frecuente es el Staphylococcus saprophyticus que produce
infecciones del tracto urinario en mujeres jóvenes sexualmente activas.

Gènero Streptococcus

Esquemas de clasificación

Està integrado por una variedad de especies de cocos Gram positivos , muchas
veces dispuestos en pares o cadenas ,son catalasa negativa, que para su
identificación y clasificaciòn se toman en cuenta cuatro esquemas distintos
a) Presentación clìnica : Es en base a los cuadros clìnicos y sitios donde se
encuentran : Estreptococos piogènicos , orales , entèricos .
b) Propiedades serològicas : De acuerdo a carbohidratos especìficos que se
encuentran en la pared celular se formaron grupos ( A ,B.C,D,etc ) ,Conocida
como grupos de Lancefield.
c) Patrones de hemòlisis : Se basa en la capacidad de lisar eritrocitos y se dividen
en : Alfa hemolíticos ( hemolisis incompleta , presentan un halo color verde ) ;
Beta hemolíticos ( hemolisis completa , presentan un halo transparente ) y los
Gama hemolíticos ( no hemolíticos ).
d) Propiedades bioquímicas y fisiológicas : Se realizan pruebas que dan a conocer
el patrón metabólico de los estreptococos.
Además hay otros estreptococos que no estàn incluidos dentro de los grupos
ejemplo el Streptococcus pneumoniae.
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Streptococcus beta hemolítico del grupo A

Llamado también Streptococcus pyogenes, se caracteriza por producir la beta

hemólisis , es el causante de faringitis ,escarlatina , erisipela , fiebre reumática
aguda y la glomerulonefritis .
Los mecanismos de patogenicidad son :
a) La presencia de cápsula: Que lo protege de la fagocitosis.
b) Producción de toxinas : Como la eritrogènica y la estreptoloisina que pueden ser
dos la S y la O.
c) Producción de enzimas : Como la estreptocinasa , la Dnasa , hialuronidasa.
Se puede hacer una identificaciòn presuntiva apartir de los sitios de la lesión y se
observan cocos Gram positivos en pares.
Para su aislamiento se utiliza la gelosa sangre , observándose colonias pequeñas
blancas con una zona de beta hemólisis y se identifica de la siguiente manera :
Hacer un frotis de la colonia sospechosa y teñir con la tinciòn de Gram.
a) Prueba de la bacitracina : Que consiste en sembrar la colonia en una placa de
gelosa sangre y colocar en el centro un disco con bacitracina , que incuba 37 ª
C 24 hrs. Debe de presentar un halo de inhibición , en dado caso de que no se
presente y la colonia es beta hemolítica se dice que es un Streptococcus beta
hemolítico no del grupo A.
b) Serologìa : Se utiliza un juego de antisueros específicos de grupo ( A , B ,C,
D,F , G) Se preparan seis suspensiones bacterianas y a cada una de ellas se le
agrega una gota por separado del antisuero , en donde se presente la aglutinación
a ese grupo pertenece.

Streptococcus del grupo B

Se le conoce también como Streptococcus agalactiae, se le encuentra colonizando el
tracto respiratorio alto , gastrointestinal bajo y la vagina ; es causante de la fiebre
puerperal , septicemia , y meningitis en recién nacido , se identifica mediante la
prueba de CAMP o utilizando antisueros específicos de grupo .

Streptococcus pneumoniae

Anteriormente llamado Diplococcus pneumoniae ya estos se encuentran en pares en

forma de punta de lanza , son cocos Gram positivos con una zona de alfa hemólisis
( halo color verde alrededor de la colonia ).
Se encuentra como flora normal en la región nasofaríngea ; los mecanismos de
patogenicidad son la presencia de cápsula que en base a ella existen alrededor de
120 serotipos , otros mecanismos son la producción de enzimas y toxinas. Es
responsable de causar neumonía , sinusitis , otitis y meningitis en niños menores de
cinco años.
Para su aislamiento se utiliza la gelosa sangre sospechándose de ésta bacteria por la
hemólisis característica , confirmándose el aislamiento con la prueba de la
optoquina o bien con el uso de antisuero específico.
a) Prueba de la optoquina : Que consiste en sembrar la colonia en una placa de
gelosa sangre y colocar en el centro un disco con optoquina , que se incuba 37 ª
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 C 24 hrs. Debe de presentar un halo de inhibición , en dado caso de que no se
presente y la colonia es alfa hemolítica se dice que es un Streptococcus alfa
hemolítico no Streptococcus pneumoniae.

b) Serologìa : Se utiliza un antisuero específico de Streptococcus pneumoniae. Se

prepara una suspensión bacteriana y se le agrega una gota del antisuero , y si se
presenta la aglutinación se dice que es un Streptococcus pneumoniae.

Streptococcus del grupo D

A este también se le conoce con el nombre de enterococos ya que se encuentran en el
intestino y una de las especies importantes es el Enterococcus faecalis y su importancia es
que es causante comúnmente de infección en vías urinarias , son alfa hemolíticos ,
identificándose a través de serología con antisueros específicos de grupo.

Streptococcus grupo Viridans

Es un grupo de Streptococcus que no tienen carbohidratos específicos de grupo y que por lo
general son alfa o gama hemolíticos ejemplos el Streptococcus milleri y Streptococcus
sanguis que son causantes de caries y algunas otras especies son causantes de endocarditis.

Cocos Gram negativos

Dentro de éste grupo se encuentran dos géneros Neisseria y Moraxella siendo el de mayor
importancia el género Neisseria.

Género Neisseria
Son cocos Gram negativos agrupándose comúnmente como diplococos caracterizándose
por ser intracelulares.
Las especies mejor conocidas son : Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae

Neisseria meningitidis
Pueden colonizar la nasofaringe de los individuos sanos sin producir sintomas o bien causar
meningitis fulminante , neumonia , también se les conoce como meningococos , son
capsuladas ; para su aislamiento se utiliza gelosa chocolate.

Neisseria gonorrhoeae
Son conocidos como gonococos es causante de una de las enfermedades más comunes de
transmisión sexual , además ocasiona artritis , conjuntivitis : Son capsuladas , para su
aislmaiento se utiliza e medio de Tayer Martin , se puede hacer un diagnóstico presuntivo
mediante un frotis con tinción de Gram observando diplococos Gram negativos
intracelulares.

Bacilos Gram positivos esporulados

Dentro de este grupo se encuentran los generos Bacillus y Clostridium.
Genero Bacillus
Está formado por varias especies , las más comunes son : Bacillus subtilis , Bacillus cereus
y Bacillus anthracis , siendo el más importante este ultimo por ser el causante del antrax o
carbunco que se puede presentar como carbunco cutáneo , intestinal y pulmonar.
Género Clostridium
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El género está formado de por lo menos 100 especies , siendo de importancia médica las
siguientes y que se caracterizan por ser anaerobios:
Clostridium tetani, causante del tetanos.
Clostridium botulinum, causante del botulinismo en el consumo de alimentos procesados y
envasados en casa.
Clostridium perfringens, causante de la gangrena gaseosa además e intoxicación
alimenticia.
El daño ocasionado por estas especies se debe principalmente a la producción de toxinas
Otros bacilos gram positivos
Los géneros ubicados en este grupo no presentan esporas , algunos de los géneros son
Corynebacterium diphtheriae que se observa en forma de letra china causante de la difteria
, Listeria monocytogenes capaz de producir meningoencefalitis , bacteriemia.

Características de las Enterobacterias

La familia Enterobacteriaceae constituye el mayor conjunto y heterogéneo de los bacilos
Gram negativos de importancia médica y que se encuentran en su mayoría formando parte
de la flora normal del intestino aunque algunos géneros son patógenos, son capaces de
crecer en condiciones aeróbicas y anaeróbicas en medios de cultivo sintéticos.
Una de las diferencias más importantes establecidas dentro del grupo de estas bacterias, se
basa en la capacidad de utilizar azúcares a través de la vía fermentativa. En su mayoría
son miembros de la flora saprofita normal que producen infecciones oportunistas y las
infecciones causadas pueden ocurrir a partir de los humanos o de reservorios.
Los miembros de esta familia son bacilos Gram negativos , móviles e inmóviles , no
esporulados , que producen endotoxinas que se liberan cuando estas se lisan , que son
capaces de fermentar la glucosa e incapaces de producir la enzima citocromo oxidasa.
Esta familia se ha reclasificado, tomando en cuenta una variedad de características, esta
formada por más de 40 géneros y 150 especies que una de las clasificaciones más
utilizadas es en base a Tribus que se basa en reunir a géneros que tienen alguna
característica en común:
• Mayor grupo de bacterias gran negativas
• Formado por más de 40 géneros
• Forman parte de la flora intestinal causan infecciones oportunistas
• Algunos géneros son patógenos
• Fermentan azúcares
• Utilizan fermentando la glucosa
• Móviles e inmóviles, no esporuladas
• Oxidasa negativa
• Se clasifican en tribus

Tribu Escherichiae
Genero Escherichia ……..................5 especies

5
 “ Shigella................................4 especies

Tribu Salmonelleae
Genero Arizona
“ Salmonella........................... 3200 especies
“ Citrobacter...........................4 especies

Tribu Edwarsielleae
Genero Edwarsiella……………….4 especies
Tribu Klebsielleae
Genero Klebsiella…………………7 especies
“ Enterobacter……………...13 especies
“ Serratia...............................10 especies
“ Hafnia.................................2 especies

Tribu Proteae
Genero Providencia........................5 especies
“ Proteus..............................4 especies
“ Morganella .....................2 especies

Existiendo otros géneros como lo son:

Erwinia
Yersinia..........................................11 especies
Kluyvera........................................2 especies
Ewingella.......................................1 especie

Medios de aislamiento

Debido a que la mayoría de las muestras que se envían al laboratorio contienen una
variedad de especies bacterianas , se deben utilizar medios selectivos para aislar aquellas
especies que puedan ser de importancia médica , los medios de cultivo selectivos deben
tener los siguientes componentes :

1.- Hidrolizados de proteínas : ( Peptonas , infusión de carne ,triptonas , caseína ) ,

elementos nutritivos que promueven el desarrollo suministrando carbono y nitrógeno.
2.- Carbohidratos : Incluyen glucosa , lactosa , sacarosa , maltosa que proveen de energía .
3.-Buffers : Proveen de un pH estable para el crecimiento.
4.- Enriquecimientos : Suplementos vitamínicos , sangre , suero , extractos de levadura ,
para promover el desarrollo de bacterias exigentes .
5.- Inhibidores: Componente responsable de dar el grado de selectividad a los medios , ya
que inhiben el desarrollo de ciertas especies bacterianas no deseadas ejemplos sales
biliares , verde brillante , eosina , bismuto , citrato , desoxicolato , selenito.
6.- Indicadores de pH : Son utilizados para detectar los cambios de pH producidos por el
metabolismo bacteriano , los más usados son el rojo de fenol , rojo neutro , púrpura de
bromocresol y azul de bromotimol .
Rojo de fenol : pH ácido color amarillo , pH alcalino color rojo o rosa fuerte
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Rojo neutro : pH ácido color rojo o rosa fuerte , pH alcalino color amarillo
Azul de bromotimol : pH ácido amarillo , pH alcalino azul
Púrpura de bromocresol : pH ácido amarillo , pH alcalino morado
7.- Otros indicadores : Son ciertos compuestos que al ser utilizados por la bacteria el
producto se manifiesta por la presencia de cierto color ejemplo la producción de ácido
sulfhídrico por la utilización de sales de fierro y azufre.
Tomando en cuenta la selectividad de los medios de cultivo utilizados para el aislamiento
de las enterobacterias , se clasifican de la siguiente manera :
a) Medios de baja selectividad o de aislamiento primario : Contienen cantidades mínimas
de inhibidores , por lo que inhiben bacterias Gram positivas y ciertas Gram negativas , pero
permiten el desarrollo de todas las enterobacterias y otras bacterias Gram negativas
Agar de Mac Conkey ( MC ) : Es un medio selectivo y diferencial donde las bacterias
fermentadoras de lactosa forman colonias de color rosa fuerte por el pH ácido debido a los
productos del metabolismo del azúcar y las colonias lactosa negativas incoloras o
transparente.
Agar de eosina azul de metileno ( EMB ) : Es otro medio selectivo y diferencial donde las
colonias de las bacterias fermentadoras de lactosa toman un color verde metálico , violetas
y las no fermentadoras de lactosa son incoloras o transparentes .
b) Medios de mediana selectividad o moderadamente selectivos : Estos medios contienen
inhibidores en mayor concentración que los de aislamiento primario e inhiben ciertas
enterobacterias y permiten la recuperación de Salmonella y Shigella , apartir de muestras
con un escaso número de estas bacterias en comparación con la concentración masiva de
otras bacterias de flora normal ejemplos :
Agar de Salmonella y Shigella ( SS ) : Las colonias de las bacterias que fermentan
la lactosa presentan coloración rosa fuerte y las que no fermentan lactosa son transparentes
o incoloras , y las que producen precipitado de ácido sulfhídrico presentan un centro color
negro.
Agar de xilosa lisina desoxicolato ( XLD ) : Las colonias de las bacterias que
fermentan lactosa presentan un color amarillo , las que no la fermentan son transparentes o
incoloras con el medio color rojo y las que producen ácido sulfhídrico presentan un centro
color negro.
c) Medios de alta selectividad : Contienen una mayor concentración de inhibidores y
generalmente permiten solo el desarrollo de Salmonella y se utilizan después de haber
utilizado un caldo de enriquecimiento ejemplos:
Agar de sulfito de bismuto ( SB ) : En este medio las bacterias que fermentan la
lactosa son inhibidas , las colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa presentan un
color verdoso o negras con brillo metálico.
Agar de verde brillante ( VB ) : Las bacterias fermentadoras de lactosa presentan
colonias color verde y las bacterias que no fermentan la lactosa presentan un color
transparente o incoloro con el medio rojo .

Caldos de enriquecimiento

Estos son utilizados para facilitar el crecimiento de ciertas especies cuando la población es
escasa , inhibiendo el crecimiento de la flora normal ; son utilizados comúnmente para el
aislamiento de Salmonella , los más utilizados son el caldo de tetrationato y caldo selenito o
bien el caldo Gram negativo ) GN ) para Shigella .
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Pruebas bioquímicas utilizadas para la identificación de Enterobacterias

La morfología colonial y las reacciones bioquímicas en los medios de aislamiento se toman

en cuenta para realizar un a identificación preeliminar y la identificación de las especies
requiere la determinación de características metabólicas adicionales que reflejan el código
genético y la identidad única de la bacteria en el estudio .
Las pruebas que comúnmente se utilizan en un laboratorio son las siguientes :
Agar hierro y triple azúcar ( TSI ) o Agar de hierro Kligler ( KIA )
Agar de hierro y lisina ( LIA )
Medio MIO
Agar de citrato de Simmons ( CIT )
Caldo malonato ( MAL )
Caldo urea o agar urea de Christensen ( UR )

Agar de TSI o KIA : Es utilizado para determinar la utilización de glucosa , lactosa y

sacarosa en el TSI y solo glucosa y lactosa en el KIA la fermentación ocurre en condiciones
anaeróbicas además ambos permiten determinar si la bacteria produce ácido sulfhídrico
( H2S ) y gas. Es un agar inclinado que se siembra por picadura y estría , tiene como
indicador el rojo de fenol , para su lectura se divide en pico de flauta y fondo pudiendo dar
las siguientes determinaciones de acuerdo al cambio de color pH , inicialmente el medio
es de color naranja :
K : pH alcalino color rojo
A : pH ácido color amarillo
Pico de flauta / fondo
K/N : No utilizó carbohidratos alcalino / neutro , rojo / naranja
K/A: No fermentó lactosa , fermentó glucosa , alcalino / amarillo , rojo / amarillo
A/A: Fermentó lactosa y glucosa , ácido / ácido , amarillo / amarillo
Fondo color negro : Producción de H2S positivo
Formación de burbujas , desplazamiento del medio , medio agrietado : Producción de gas.
LIA : Se utiliza comúnmente para determinar si la bacteria es capaz de descarboxilar el
aminoácido lisina que ocurre en condiciones anaeróbicas , contiene glucosa y lisina , como
indicador de pH el púrpura de bromocresol es un medio inclinado que se siembra por
picadura estría , para su lectura se divide también en pico de flauta y fondo , inicialmente el
medio es de color lila.
Pico de flauta / fondo
K : Alcalino morado
A : Acido amarillo
R : rojo
Las lecturas que se pueden presentar son las siguientes :
K/N : Alcalino / neutro , Morado / lila , descarboxiló la lisina.
K/K : Alcalino / alcalino , morado / morado , descarboxiló la lisina
R/ A : rojo / acido , rojo / amarillo , No descarboxiló la lisina sino que la desaminó.
K/N :Alcalino / Neutro , Morado / Lila , Descarboxilación positiva
Fondo de color negro : Producción de ácido sulfhídrico positivo.
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CIT : Se utiliza para determinar si la bacteria es capaz de utilizar al citrato de sodio como
fuente de carbono , es un agar inclinado que se siembra solo por estría en la superficie ,
como indicador de pH tiene el azul de bromotimol , el medio inicialmente es de color
verde pizarrón.
Color verde pizarrón : No fue capaz de utilizar al citrato como fuente de carbono CIT
negativo
Color azul de Prusia : Fue capaz de utilizar al citrato como fuente de carbono CIT positivo.

MIO: Es un medio semisólido que se siembra por picadura en el centro sin mover el asa ,
contiene glucosa , los aminoácidos ornitina , triptófano y como indicador de pH el púrpura
de bromocresol , esta permite determinar la movilidad , producción de indol y
descarboxilación de ornitina , inicialmente es de color morado.
Movilidad : Cuando el fondo del medio se observa turbio indica que la bacteria es móvil
MOV positiva y si el fondo se observa transparente indica que la bacteria es inmóvil MOV
negativa.
IND : Para determinar esta prueba se agregan cinco gotas del reactivo de Erlich o Kovac ´s
y si toma un color rosado o rojo la superficie del medio indica que la bacteria produjo
indol IND positivo , y si la superficie del medio queda amarillo indica que la bacteria no
produjo indol IND negativo.
ORN : Se lee en el fondo del tubo , la aparición de un color amarillo indica que la bacteria
no descarboxiló la ornitina ORN negativa y cuando el fondo se observa de color morado
bajito o grisáceo indica que la bacteria descarboxiló la ornitina ORN positiva.
UR: Es utilizada para determinar si la bacteria es capaz de desdoblar la urea , el agar se
siembra por estría en la superficie y el caldo solo se introduce el asa sin agitarla , como
indicador de pH tiene el rojo de fenol , el agar inicialmente es de color paja y el caldo de
color rosa débil.
En el agar la parición de un color rosa indica que la bacteria fue capaz de desdoblar la urea
UR positiva y si permanece el color inicial ( color paja ) indica que la bacteria no fue
capaz de desdoblar la urea UR negativa .
En el caldo la parición de un color rosa intenso , indica que desdoblo urea UR positiva , y si
permanece rosa débil indica que no la desdobló UR negativa.

MAL : Es utilizado para determinar si la bacteria es capaz de utilizar al malonato como

fuente de carbono , tiene como indicador de pH el azul de bromotimol , se siembra solo
introduciendo el asa sin agitar , inicialmente el caldo es de color verde olivo.
Si el color permanece verde olivo indica que la bacteria no lo utilizó MAL negativo y si
presente un color azul indica que si utilizó al malonato como fuente de carbono MAL
positivo.

Género Escherichia
Está formado por cinco especies y la Escherichia coli es la aislada con más frecuencia , en
el tracto gastrointestinal existen un gran número y esta es la enterobacteria más frecuente
causante de sepsis bacteriana , meningitis neonatal , infecciones del tracto urinario y
gastroenteritis en viajeros que visitan países con higiene deficiente . La mayoría de las
infecciones a excepción de la meningitis neonatal y la gastroenteritis son endógenas es

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decir la flora normal del individuo es capaz de producir infección cuando las defensas están
disminuidas.
Existen seis tipos de Escherichia coli causantes de problemas intestinales y que no se
encuentran como flora normal y son las siguientes :
Escherichia coli enteropatogena ECEP
Escherichia coli enterotoxigenica ECET
Escherichia coli enterohemorragica ECEH
Escherichia coli enteroinvasiva ECEI
Escherichia coli enteroagregativa ECEAg
Escherichia coli de adherencia difusa ECAD
Son generalmente lactosa positiva presentando una coloración verde metálico ,
morada ,amarilla o rosa intenso según en el medio en que se desarrolle , bioquímicamente
presentan las siguientes lecturas :

IND H2S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN

Escherichia coli + - + - - - + + 65 +

Genero : Salmonella
Se han descrito más de 3000 especies de este género , las cuales han reclasificado , todas
las especies se identifican en base a pruebas serologicas por los antigenos de grupo y
especie , bioquímicamente solo se identifica el género.
Su distribución es muy amplia sobre todo en el reino animal ya que se han recuperado
apartir de aves de corral , reptiles , ganado , roedores , animales domésticos , pájaros y
también del humano.
Las especies de Salmonella typhi y Salmonella paratyphi están plenamente adaptadas al ser
humano y no producen enfermedad en animales. Otras especies están adaptadas a los
animales y cuando infectan al humano producen enfermedad grave como en el ejemplo de
Salmonella cholerae suis ( El cerdo ) ; y existen especies que no tienen huéspedes
específicos y causan enfermedad tanto en el humano como en los animales.
El origen en la mayoría de las infecciones es por la ingestión de agua y alimentos
contaminados o bien la diseminación directa por la ruta fecal oral en los niños .La máxima
incidencia de la enfermedad se observa en niños de corta edad que se infectan en los meses
cálidos , también afecta a los ancianos.
La infección por Salmonella puede manifestarse en cuatro formas como son la enteritis
septicemia , fiebre entérica y portador sano .
Enteritis : Es la forma más común de salmonelosis presentándose inicialmente nauseas ,
vómito y diarrea sin sangre , puede en ocasiones presentarse fiebre , mialgias y dolor de
cabeza .
Septicemia : Todas las salmonelas pueden causar bacteriemia , aunque la infección por S.
cholerae suis , S. paratyphi , S . typhi y S. dublín conducen con más frecuencia a una fase
bacteriemica y pueden llegar a ocasionar osteomielitis, endocarditis o artritis.
Fiebre entérica: S. typhi produce una enfermedad febril conocida como tifoidea y S.
paratyphi A , S. schottmuelleri llamada antes S. paratyphi B y S.hirschfeldii antes S.
paratyphi C producen una forma leve de la enfermedad denominada paratifoidea , la
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infección se caracteriza por una fiebre remitente , con cefalea , mialgias y síntomas
gastrointestinales.
Portador sano : Los pacientes después de haber tenido tifoidea o paratifoidea , las
bacterias son mantenidas en una colonización crónica durante más de un año alojándose
sobre todo en la vesícula biliar , actuando estas personas como una fuente de infección
sobre todo en los manipuladores de alimentos .
Se le puede aislar apartir de diferentes fuentes , son bacterias que no fermentan la lactosa y
producen H2S , características que se toma en cuenta para sospechar , para ello se utilizan
diferentes medios de cultivo y presentan las siguientes morfologías .
Agar de EMB colonias incoloras.
Agar de SS colonias incoloras con un centro negro que abarca casi toda la colonia.
Agar de XLD colonias incoloras con un centro negro que barca casi toda la colonia.
Agar de SB Colonias negras con brillo metálico.
Agar de MC colonias incoloras.
Para su identificación bioquímica se toma en cuenta el siguiente patrón metabólico.

IND H2S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN

Salmonella sp - 95+ 95+ 95+ - - - 98+ 97+

Género Shigella
Al contrario de Salmonella, la clasificación de este género es muy sencilla, solo se
describen cuatro especies con serotipos basados en el antígeno O que son las siguientes :
Shigella dysenteriae o grupo A con quince serotipos
Shigella flexneri o grupo B con ocho serotipos
Shigella boydii o grupo C con diecinueve serotipos
Shigella sonnei o grupo D con un serotipo
Shigella sonnei es la especie más común en los países desarrollados , mientras que
Shigella flexneri constituye el agente causal más común en los países subdesarrollados.
La shigelosis es una enfermedad que afecta a niños menores de cuatro años y los brotes
epidémicos se producen habitualmente en guarderías, orfanato; la infección se transmite por
la ruta fecal oral por las manos contaminadas y con menos frecuencia por los alimentos ,
el inoculo infectante es bajo que es de 200 bacterias , de manera que la shigelosis se
disemina rápidamente cuando las condiciones sanitarias y los niveles de higiene personal
son deficientes.
La infección y enfermedad recibe el nombre de disentería bacilar se caracteriza por cólico
abdominal, diarrea , fiebre , vómito y heces muco sanguinolentas , los síntomas aparecen de
1 a 3 días después de la ingestión , los bacilos colonizan el intestino delgado y se
multiplican , las heces contienen abundantes neutrófilos , moco y eritrocitos , la infección
suele ser autolimitada , pero se recomienda tratamiento para impedir la diseminación.
Metabólicamente es muy inactiva, son incapaces de fermentar la lactosa, para su
aislamiento se utilizan los siguientes medios de cultivo:
Agar de EMB colonias incoloras.
Agar de SS colonias incoloras
Agar de XLD colonias incoloras y alrededor del medio tono rojo
Agar de MC colonias incoloras.
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Bioquímicamente presentan el siguiente patrón metabólico :
IND H2S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN
Shigella sp 50- - - - - - - - -
IND : A,B,C -/+ D-

Género Klebsiella
Las especies de éste género tienen una cápsula responsable del aspecto mucoide de las
colonias y es el factor de virulencia , la especie aislada con más frecuencia es Klebsiella
pneumoniae causante de neumonía , los alcohólicos y pacientes con compromiso
pulmonar presentan un riesgo aumentado de neumonía debido a que son incapaces de
eliminar las secreciones orales aspiradas hasta el tracto respiratorio bajo , también es
causante de infecciones de heridas , tejidos blandos , vías urinarias y causante de
infecciones intra hospitalarias.
Desarrolla en todos los medios de cultivo utilizados para el aislamiento de enterobacterias ,
sospechándose de este género por el aspecto mucoide de las colonias y bioquímicamente
presentan el siguiente patrón metabólico.
Klebsiella IND H2S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN
K. oxytoca + - - + + + + + -
K. ozanae - - - 70 - - - 70 - 60 - -
K. pneumoniae - - - 98+ + 95 + 98+ 98 + -
K. rhinoscleromatis - - - - + - - - -
K. planticola - - - + + + + + -

Genero Proteus
Se encuentra formado por cuatro especies que son las siguientes:
Proteus vulgaris
Proteus mirabilis
Proteus penneri
Proteus myxofaciens
La especie que comúnmente se aísla es Proteus mirabilis como causante de infección en
vías urinarias.
Las especies de éste género tienen la capacidad de producir grandes cantidades de ureasa
desdoblando la urea a bióxido de carbono (CO2) y amoniaco (NH3) , incrementando el pH
de la orina y facilitando la formación de cálculos: La mayor alcalinidad de la orina también
resulta toxica para el uroepitelio.
Se pueden cultivar en cualquier medio empleado para el cultivo de Enterobacterias, en
general son bacilos Gram negativos que producen ácido sulfhídrico ( H2 S ) , son lactosa
negativa además tienen una característica muy propia que es la de producir Swarming .

Proteus IND H2 S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN

Proteus mirabilis 98- 98+ 95+ 65+ 98- 98+ 98- - +
Proteus penneri - 70+ 85+ - - + - - -
Proteus vulgaris 98+ 95+ 95+ 95- - 95+ 98- - -

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Géneros: Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Providencia
Estos géneros rara vez producen infecciones en pacientes inmunocompetentes: Se asocian
con más frecuencia a infecciones intrahospitalarias en pacientes con afecciones del sistema
inmunitario como recién nacidos prematuros; y el tratamiento es complicado debido a la
resistencia que presentan a los antibióticos, los géneros más comunes causantes de este
problema son: Serratia y Enterobacter.

IND H2 S MOV CIT MAL UR LAC LIS ORN

Citrobacter
C. amalonaticus + - + + - + - - +
C. diversus + - + + + + 50V - +
C. freundii 67- + 89+ 78+ 89 - 56+ 78+ - -
Enterobacter
E. aerogenes - - + + + - + + +
E. agglomerans - - V V V V V - -
E. cloacae - - + + + 65 + + - +
Providencia
P. alcalifaciens + - + + - - - - -
P. rettgeri + - + + - + - - -
P. stuarti + - 55+ + - 70 - - - -
Serratia
S. licuefaciens - - + + - - - + +
S. marcescens - - + + - - - + +
S. odorífera 50V - + + - - + + +
S. rubidea - - + + + - + - -

Características de las Bacterias Gram Negativa no Fermentadoras (BGNnF)

El termino no fermentadoras se refiere a un grupo de bacterias Gram negativas , que son
incapaces de utilizar carbohidratos como fuente de energía por la vía fermentativa sino que
los degradan por la vía oxidativa.
Este grupo se encuentra integrado de por lo menos siete generos, todos tienen la capacidad
de crecer en gelosa sangre , medio utilizado para los aislamientos.
Las pruebas principales que se toman en cuenta para sospechar de alguna bacteria de este
grupo son las siguientes :
a) Lectura de K / N en el Kligler : Cuando en el Kligler se observa rojo sobre naranja ,
esto sugiere la presencia de una BGNnF.
b) Reacción de citocromo oxidasa positiva : Toda bacteria que desarrolle en gelosa
sangre y que la prueba de la oxidasa sea positiva , se debe de sospechar de una
BGNnF . No todas las bacterias de este grupo son oxidasa positiva.
c) Incapacidad de crecer en Agar de Mc. Conkey : Toda bacteria Gram negativa que
desarrolle en gelosa sangre y no desarrolle en agar de Mc. Debe de sospecharse de
una BGNnF.

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Esquema de King - Weaver
Para la identificación de los géneros más comunes de este grupo se utiliza el esquema de
King –Weaver y consiste en las siguientes pruebas:
1.- Realizar un frotis y determinar si son bacterias Gram. negativas
2.- Determinación del tipo de metabolismo de la Glucosa : Se utiliza el medio de Hugh y
Leifson conocido como medio O/F ; contiene peptonas 2 % , carbohidrato 1 % , Buffers y
como indicador de pH el azul de bromotimol ( pH acido : amarillo y pH alcalino : Azul ) ,
es un medio semisólido .Se emplean dos tubos , a uno se le agrega aceite mineral para
darle las condiciones de anaerobiosis y al otro sin aceite.
Metabolismo Oxidativo ( O ) : Solo producen acido en el tubo sin aceite , cambiando de
verde a amarillo la parte superior del medio .
Metabolismo Fermentativo ( F ) : Producen acido en ambos tubos , cambiando de verde a
amarillo los dos tubos .
Metabolismo No sacarolítico o Inerte ( I ) : No producen acido y solo el tubo sin aceite
presenta un cambio en la parte superior cambiando de verde a azul .
3.- Desarrollo en agar de Mc. Conkey : Se determina observando si crece o no en el agar.
4.-Producción de la citocromo oxidasa: Se utiliza un papel filtro impregnado con reactivo
de para fenilen diamina ; se le agrega con un aplicador un inoculo del cultivo en base de
agar sangre y la aparición de un color lila a morado en segundo indica que se produce la
enzima ( OXI + ) y si no se presenta cambio alguno la prueba es ( OXI - ).
5.- Determinación de la movilidad : Se siembra la bacteria a identificar en un medio MIO o
SIM; si se enturbia el fondo o crece en la superficie en forma de sombrilla la movilidad es
positiva (MOV + ) y si se observa transparente el fondo sin crecimiento en sombrilla la
movilidad es negativa ( MOV - ).
Con las pruebas antes mencionadas se pueden identificar los siguientes géneros :

METABOLISMO MOVILIDAD OXIDASA CREC. EN Mc

Pseudomonas O + + +
Acinetobacter O o I - - +
Flavobacterium O V + Pobre o -
Bordetella O V + Pobre o -
Moraxella O o I - + Pobre o -
Stenotrophomonas O + - / Débil -
Alcaligenes O o I + + -

Características del Genero Pseudomonas

Se encuentran comúnmente en el suelo, agua y vegetación y desafortunadamente también
se encuentra en el medio ambiente hospitalario, reservorios húmedos como el suelo, baños,
equipos de respiración e incluso en soluciones desinfectantes.

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Presenta diversos factores de virulencia como son componentes estructurales, toxina y
enzimas.
Anteriormente este género estaba formado por una gran variedad de especies y en base a
estudios de RNA se ha reclasificado creándose una variedad de géneros como son
Burkholderia, Brevundimonas, Flavimonas , Comamonas , Shewanella , Stenotrophomonas
y las especies que siguen conservándose dentro de este género son : Pseudomonas
aeruginosa , Pseudomonas fluorescens , Pseudomonas putida , Pseudomonas stutzeri y
Pseudomonas mendocina . Se aíslan apartir de una variedad de muestras como son orina,
sangre, secreciones oculares, aspirados bronquiales y teniendo una gran importancia en los
pacientes quemados sobre todo la Pseudomonas aeruginosa.
Crecen perfectamente en todos los medios utilizados para el aislamiento de Enterobacterias
observándose como colonias lactosa negativa, pero se utiliza un medio selectivo para
Pseudomonas aeruginosa que es el agar de Cetrimida (AC), donde produce una
pigmentación característica azul verdosa.
Al igual que el Género Pseudomonas otros Géneros han sido reclasificados como son:
Flavobacterium, creándose Chryseobacterium, Empedobacter, Sphingobacterium.

Género Brucella
Las bacterias de este género son coco bacilos muy pequeños Gram negativos
intracelulares, está integrado por seis especies de las cuales cuatro están asociadas a
infecciones al humano, tienen como reservorio una variedad de animales:
Brucella abortus: Vacas
Brucella suis: Cerdos
Brucella melitensis: Cabras
Brucella canis: Perros
La enfermedad que producen es la Brucelosis recibiendo una variedad de nombres siendo
la más conocida como fiebre de Malta; las diferentes especies se distinguen en base a sus
reservorios, propiedades de crecimiento, pruebas bioquímicas y composición de los ácidos
grasos de su pared celular.
La brucelosis se considera una enfermedad ocupacional frecuente en matanceros y
veterinarios sobre todo por Brucella abortus y Brucella suis ; también por el consumo de
productos lácteos elaborados por leche bronca de cabra , esto es en el caso de Brucella
melitensis.
En animales son causantes de abortos , en el caso de los humanos se presentan cuadros
febriles con irritación . mialgias , artralgias , insomnio , cefalea , dolores generalizados.
Para el cultivo se realiza un hemocultivo utilizando el medio bifásico de Ruíz Castañeda ,
en el caso de muestras contaminadas de animales se utiliza un medio selectivo con
antibióticos como la bacitracina , polimixina y vancomicina .
Los estudios más realizados para el diagnóstico de esta enfermedad son las pruebas
serológicas utilizando los siguientes métodos para detectar anticuerpos :
Aglutinación con antígenos de rosa de Bengala
Aglutinación estándar: Detecta IgM, IgG e IGA.
Aglutinación en presencia de 2 – mercaptoetanol: Detecta IgG

Género Bordetella
Son cocobacilos gram negativos capsulados y está formado por las siguientes especies:
Bordetella pertussis
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Bordetella parapertussis
Bordetella bronchiseptica

La especie de importancia para el humano es Bordetella pertussis causante de una

enfermedad infectocontagiosa que afecta las vías respiratorias bajas de niños menores de
tres años no inmunizados.
Los mecanismos de patogenicidad son la presencia de capsula, fimbrias , producción de
toxinas y enzimas como la hemaglutinina , hemolisina , toxina dermonecrótica , toxina con
actividad de adenilato ciclasa , toxina pertussis , citotoxina traqueal .
Para su cultivo se utiliza el medio de Bordet – Gengou , tomando la muestra con un hisopo
de nylon , dacron o alginato de calcio en alambre flexible para tomar una muestra de
exudado nasofaringeo.

Género Haemophilus
Son cocobacilos Gram negativos , exigentes nutricionalmente ya que requieren de la
Hemina ( Factor X ) , Niacin adenin dinucleotido ( NAD ) ( Factor V ) , pueden afectar
animales y al humano ; las especies reconocidas son 16 , las cuales se diferencian
bioquímicamente y fisiológicamente , siendo de importancia médica las siguientes:
Haemophilus influenzae: Produce meningitis, epiglotitis , neumonia .
Haemophilus aegyptius: Produce conjuntivitis ( ojo rosado )
Haemophilus ducreyi: Produce el chancro blando o chancoide
Y la especie de mayor importancia es Haemophilus influenzae que en base a su capsula se
clasifican en seis serovares designados de a – f , siendo Haemophilus influenzae b asociado
a meningitis en niños menores de 5 años .
Este serovar requiere tanto del factor X y del factor V para su desarrollo , las muestras que
se utilizan para el aislamiento son el liquido cefalorraquideo , sangre , aspiración
translaringea , el medio utilizado es la gelosa chocolate o bien una placa de gelosa sangre
con una estría de Staphylococcus aureus observándose el crecimiento en satelitismo en esta
última , la confirmación del serovar se realiza utilizando antisueros específicos.

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