UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS - ESPE

SANTO DOMINGO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA
CARRERA DE INGENIERÍA AGROPECUARIA

FITOPATOLOGÍA

VECTORES USADOS PARA

CLONAR GENES
INTEGRANTES:
● Bernal Paulo
DOCENTE: Ing. Javier Romero
● Morales Marcelo
FECHA: 10-08-2023
● Sigcho Bryan
● Taipe Odalis
● Vera Dylan
Tipos de vectores utilizados en clonación de
genes.
Los vectores de clonación son plásmidos que llevan
insertados fragmentos de ADN, tipicamente un gen, que
nosotros queremos introducir o expresar en el
hospedador. Para poder ser insertado es necesario cortar
el vector con enzimas de restricción y una vez
introducido pasa a denominarse: vector recombinante.
Características y funciones de los vectores
de clonación.

● Los vectores de clonación son moléculas de ADN utilizadas para transportar

fragmentos de ADN insertados en ellos.

● Sus funciones incluyen replicación en células hospedadoras, selección de células que

contienen el vector, y expresión del gen insertado si es un vector de expresión.
 Vectores de expresión
Un buen vector de expresión debe:
Herramientas para producir
Ser adecuado para el sistema u organismo donde se
proteínas recombinantes. realizaría la transcripción

Asegurar la transcripción a ARNm estables, mediante el

uso de promotores y potenciadores apropiados.
Un vector de expresión
bien diseñado da Mantener el marco de lectura si se va a traducir una
como resultado una proteína de fusión o proteínas con etiquetas.

expresión mejorada y Muchas características deben diseñarse con suficiente

estable y una mayor antelación para lograr la máxima eficiencia en cada
secreción. sistema.

Tener secuencias óptimas de iniciación de la

transcripción o sitios de inicio de la transcripción, TSS.
APLICACIONES DE LA EXPRESIÓN
DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES

Son proteínas que están

codificadas dentro del plásmido
de expresión proteica y que han
sido modificadas para una
expresión o purificación
proteicas máximas o mutadas
para evaluar la función de la
proteína.

Capacidad para Proporciona a los

añadir, quitar o investigadores una herramienta
alterar la inmensamente potente para
secuencia que estudiar una gran variedad de
codifica la aspectos en investigación
proteína fundamental
 Vectores plasmídicos
Su papel en la
clonación de genes Los plásmidos que contienen el gen
de interés se transforman o se
Son secuencias circulares de ADN transfectan posteriormente a las
que utilizan a menudo los células para sobreexpresar la
investigadores como una proteína.
herramienta para alojar el gen que
codifica su proteína de interés.
Contienen varios elementos útiles
que facilitan la clonación, la
selección de clon y la expresión y
Un sitio de multiclonación (MCS), genes de
purificación de las proteínas
resistencia a antibióticos utilizados para la
selección de clones, etiquetas únicas para
identificación y purificación de proteínas y
fuertes regiones promotoras para impulsar
la expresión de las proteínas.
 Vectores virales: su uso en la terapia génica y la clonación de genes.

Vectores Virales:
● Utilizan virus modificados para
entregar genes a las células.
● Ejemplos: Virus de la mosaico
del tabaco, Virus del mosaico
de la coliflor, Agrobacterium
tumefaciens
Terapia Génica
La terapia génica se define como la transferencia o
introducción de material genético (ácido nucleico)
a una célula eucariótica con el propósito de alterar
el curso de una enfermedad o corregir una
alteración metabólica o genética.

Uso de Vectores Virales: Los vectores virales son

vehículos utilizados para transportar material
genético (ADN) a las células en las células de las
plantas. Estos vectores permiten la
transferencia de material genético de un virus
a una planta, lo que puede tener aplicaciones
en investigación científica y en la mejora
genética de los cultivos.
 Pasos en la Terapia Génica con Vectores Virales:

Pasos en la Terapia Génica con Vectores Virales:

● Selección del Vector: Se elige un vector viral adecuado

según el tipo de enfermedad y las características de las
células diana.
● Diseño del constructo de inserción: Se crea un constructo
de ADN que contiene el gen de interés o el fragmento de
ADN que se desea introducir en la planta.
● Introducción del constructo en el vector viral: El constructo
de inserción se inserta en el genoma del vector viral.
● Entrega a las Células: El vector modificado se introduce en el
paciente, y las células afectadas por la enfermedad captan el
gen terapéutico.
● Producción del vector viral modificado: Se cultiva el vector
viral modificado en células o tejidos vegetales en el
laboratorio para producir una cantidad suficiente de vectores
virales modificados.
● Integración del material genético: El virus introduce el
material genético del constructo de inserción en las células
 Ventajas
Qué son los Vectores Bacteriófagos

● Vectores: vehículos para transportar material genético. ● Eficiencia en la transferencia de genes.

● Vectores Bacteriófagos: virus que infectan bacterias. ● Especificidad bacteriana.
● Alta tasa de multiplicación.
● Especificidad bacteriana.

Pasos en la Clonación con Vectores Bacteriófagos

● Selección del Bacteriófago: Elegir un bacteriófago apropiado según la bacteria huésped y el gen
que se va a clonar.
● Inserción del material genético en el vector bacteriófago: El material genético deseado se
inserta en el genoma del bacteriófago.
● Infección Bacteriana: Permitir que el bacteriófago infecta bacterias huésped.
● Reproducción del Bacteriófago: Los bacteriófagos se multiplican y el genoma de interés
también se replica.
● Incorporación del material genético: Recuperar el material genético clonado a partir de los
 Diseño y construcción de vectores para clonar
genes específicos
● El clonaje de genes específicos es esencial
para la investigacion genetica y
biotecnologia.
● Los vectores son herramientas clave en este
proceso, permitiendo la inserción y
manipulación de genes

Aplicaciones del clonaje de genes

Investigación de funciones genéticas y expresión.

Produccion de proteinas recombinantes
Ingenieria genetica y terapia genica.
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Diseño de Vectores

Selección del vector apropiado Elementos Esenciales Sitios de clonación

1. Origen de replicación: Garantiza la

-Elección basada en características
como tamaño del gen, tipo de célula
huésped, promotores, resistencia, etc.
-Ejemplos comunes: plasmidos, virus
modificados (adenovirus, lentivirus).
duplicación del vector en la célula -Secuencias donde se inserta
huésped. el gen de interés en el
2. Marcadores de selección: Permite la vector.
identificación de células que han -Enzimas de restricción crean
tomado el vector (resistencia extremos cohesivos para
antibioticos). facilitar la union del gen.
3. Promotores y terminadores: controlan
la expresión del gen clonado.

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 Construcción de vector
Mediante técnicas como PCR O digestión enzimática del
Aislamiento del Gen de interés ADN genómico.
Uso de cebadores específicos para amplificar el gen.

Digestión y Ligación EL gen y el vector se cortan con enzimas de restricción

específicas
Los extremos cohesivos permiten la ligación del gen en el vector.
Transformacion celular

Introducción del vector recombinante en la célula huésped

(bacteria, levaduras, células animales).
Seleccionar células transformadas usando marcadores de
selección.
 Métodos de selección y detección de vectores clonados.

Dado que existe una respuesta biológica natural de silenciamiento específico de genes estimulada por la presencia de
ARN de interferencia, se ha desarrollado una estrategia alternativa para combatir enfermedades infecciosas o
degenerativas la cual consiste en la generación de anticuerpos recombinantes bloqueadores que se expresen en el
interior de las células, estos anticuerpos intracelulares o “intrabodies” se pueden generar al introducir a las células
blanco los genes de las cadenas VH y VL junto con secuencias específicas de localización subcelular para que los
anticuerpos recombinantes se transporten a algún compartimiento como el núcleo, las mitocondrias o el retículo
dependiendo del lugar donde se encuentre la molécula a bloquear.
 1
Aplicaciones de los vectores utilizados en clonación de genes biotecnológicas

La aplicación más reciente en la Biotecnología es la modificación genética (GM), también conocida

como ingeniería genética, manipulación genética,tecnología genética, entre otras.

Microorganismos GM
Técnicas de la clonación de genes

A pesar que el sistema básico de codificación es el

mismo en todos los organismos, los finos detallado
del control genético a menudo difieren. Un gen de
una bacteria, es muy probable que no funcionen
correctamente si es introducido, sin ser modificado,
dentro de una célula animal o vegetal

Plantas modificadas genéticamente Animales manipulados

genéticamente
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