Schaeffer - Foulton y tinta china, tinciones especiales

Ciertas bacterias y hongos por sus propiedades patogénicas suelen poseer una cápsula
cuya composición incluye ciertas glicoproteínas, polisacáridos y derivados de los sacáridos,
esta especial característica le provee viscosidad y un color brillante a las colonias de las
bacterias y levaduras que usan este mecanismo para evitar ser fagocitadas por macrófagos,
para resistir ciertos agentes químicos y darle propiedades de adherencia a superficies [1].
Debido a esto, cuando una bacteria o levadura posee cápsula suele asociarse a un factor
de patogenicidad [2], esto hace hincapié en que la colonia tomada es producto de un cultivo
cuya muestra se obtuvo de un raspado a un orinal y a la suela de zapato, sitios donde
requieren adherencia y mejor protección por sus condiciones. La técnica de la tinta china se
fundamenta en generar un contraste ya que las cápsulas no permitirán realizar la tinción del
microorganismo, por lo que se verá un halo alrededor del microorganismo [3]. Así pues, se
tomó una colonia de color amarillonto quemado, brillante, bordes redondos y una elevación
ligeramente convexa.

Figura 1: Imágenes en 100X te tinción negativa (superior) y tinción negativa con Fucsina de
Gram (inferior).

En la Figura 1 se aprecia la tinción negativa aplicada a la unidad formadora de colonia

previamente descrita. A esta colonia se le habría hecho una caracterización previamente , la
cual correspondería a Staphylococcus aureus por las características macroscópicas y
microscópicas (agrupaciones) [4], sin embargo, en las imágenes de la Figura 1 no es
posible visualizar con claridad morfologías, sin embargo sí es correcto incluir que es una
bacteria gram positiva, cuyas características comprenden, entre una de ellas, poseer
cápsula bacteriana. Es posible visualizar el campo oscuro como forma de contraste, así
como el halo que rodea a los microorganismos, permitiendo confirmar que son bacterias
que poseen cápsulas. Cuando se realiza la tinción con Fucsina, es posible visualizar un
color rosado, con la finalidad de visualizar mejor los microorganismos.

Las esporas son células que ciertos microorganismos como las bacterias emplean con el fin
de proveer supervivencia en ciertos medios con condiciones no óptimas para el crecimiento
de la bacteria, así pues, la espora germinará nuevamente en una bacteria cuando las
condiciones de crecimiento sean favorables [5]. Así pues, inherentemente las esporas son
estructuras bastante resistentes a los cambios ambientales, como la temperatura, pH o uso
de ciertos agentes químicos; esta resistencia es proveída por la composición química de
sus múltiples capas, las cuales son tres, un núcleo compuesto de dipliconato de calcio para
proteger el material genético de la espora, una membrana celular, una corteza formada de
péptido glicano, una capa cortical compuesta de proteínas y el exosporio, compuesto de
glicoproteínas [5]. Este conjunto de capas hacen que a la hora de realizar una tinción de
Gram no sea posible visualizar un color definido, por lo que generalmente se ven más
pequeños que la bacteria y en su centro la ausencia de color, esto debido a sus múltiples
capas.

Para esto, la técnica de Schaeffer Foulton se emplea como un método idóneo para
visualizar puntualmente las estructuras esporuladas, empleando el colorante verde
malaquita que tiñe las esporas de color verde y que son fácilmente visibles y diferenciables
de otros microorganismos al microscopio. Al aplicar calor en la tinción hace que las capas
de las esporas se desnaturalicen, de esta forma el colorante verde malaquita con una carga
positiva podrá unirse a moléculas de carga negativa, las cuales se caracterizan las
membranas por sus grupos fosfato y ciertas proteínas con aminoácidos de carácter ácido;
finalmente se usa safranina como colorante de contraste que permite diferenciar los
microorganismos de sus esporas [3].
 Figura 2: Imágenes en 100X de la tinción de Schaeffer Foulton aplicada en la colonia
descrita.

Figura 3: Unidad formadora de colonia tomada para realizar la tinción de Schaeffer Foulton

Se tomó una unidad formadora de colonia seca y de color blanco, de bordes irregulares y
plana (Figura 3), a la cual se le realizó tinción de Schaffer Foulton y se visualizó al
microscopio. En la Figura 2 es posible observar una gran cantidad de esporas, a su vez, es
de destacar que estos microorganismos son bacilos, a los cuales previamente se les realizó
una tinción de Gram y se pudo evidenciar que son bacilos Gram positivos; normalmente los
géneros Clostridium y Bacillus son característicos de ser Gram positivos y de formar
esporas, sin embargo hay una característica del género Bacillus que lo distingue de
Clostridium, y es que la formación de esporas que no deforman al organismo y se
encuentran concéntricas a este, esto es evidenciable en la Figura 2, donde aquellas
estructuras donde no hay esporas y no se encuentran en la forma característica del bacilo
podrían ser bacilos que durante la tinción sufrieron alguna ruptura, esto también es
observable por ciertas esporas que se encuentran en el medio [5].

Teniendo en cuenta las características del sitio donde se tomó la muestra, de sus
características microscópicas y macroscópicas, creemos que se trata de la bacteria Bacillus
Licheniformis, sus esporas no deforman su morfología, además es importante resaltar que
alrededor de su colonia hay un halo donde no hay invasión de otra de las colonias, en
especial de hongo filamentoso, que es el alrededor blanco de forma algodonosa, además la
pequeña colonia amarillenta se asimila mucho a la de Staphylococcus aureus. Realizando
una búsqueda de la literatura, Moore y Wooldridge (1950) [6] nos mencionan que Bacillus
Licheniformis produce un polipéptido con características antibióticas llamado Bacitracina; los
autores en este mismo artículo mencionan que este polipéptido cíclico posee propiedades
antifúngicas y antimicrobianas, en especial susceptibilidad con cepas de Staphylococcus
aureus cuando se trata una infección de la piel con Bacitracina de forma tópica, a su vez
múltiples autores [7, 8] han podido evidenciar la actividad antifúngica de la bacitracina en
distintos hongos patogénicos que se encuentran en el ambiente. Asimismo, Bacillus
Licheniformis se caracteriza por ser un organismo anaerobio facultativo y patógeno, alberga
en suelos y cuerpos de agua, teniendo en cuenta que el cultivo tiene un origen de una
muestra tomada de orinal y suela de zapato [9] se permite reforzar el argumento por el cual
ese podría ser el microorganismo que se encuentra en la colonia de la Figura 3 y las
imágenes observadas de la Figura 2.

1. ¿Cuál es la composición de la pared de bacterias ácido alcohol resistentes?

Estas bacterias poseen cápsulas de polisacáridos, glicoproteínas y derivados de sacáridos

que le confieren cierta viscosidad y brillantez macroscópica, sin embargo, el ácido micólico
es el principal componente que le confiere una gran resistencia a la decoloración y mayor
retención de Fucsina. [5]

2. ¿Cómo se explica el concepto de ácido-alcohol resistente?

Un microorganismo es ácido-alcohol resistente cuando retiene la Fucsina pero es resistente

a la decoloración con los agentes decolorantes, como el ácido clorhídrico en etanol y de
donde se deriva su término. [3]

3. ¿Cuál es la composición de la pared de las endosporas?

(Esto está explicado más arriba)

4. ¿Qué papel juega el calor en la realización de tinciones de Sheaffer Foulton y Ziehl

Niehlsen ?

Permiten denaturar las múltiples capas de la espora, lo que le facilita al colorante penetrar
en la membrana de la espora para unirse con sus grupos fosfato por interacciones
electrostáticas. [3]

5. ¿Qué estructuras tiñe la Fushina en microorganismos esporulados?

Los microorganismos, pero no sus esporas, ya que sus múltiples capas de la pared de las
endosporas no les permite penetrar fácilmente. [3]

6. ¿Cual es el fundamento de las tinciones que se realizan para la identificación de

estructuras flagelares?

(Esta se la dejo a ud me dio pereza)

7. ¿Cual es el fundamento del empleo de la Tinta China para observación de
microorganismos encapsulados?

La tinta china se emplea como un contraste para que los microorganismos capsulados se
vean como un halo que los rodea en un campo oscuro. [3]

8. ¿Estructuras como esporas y cápsula son evidenciables en todos los microorganismos?.

Porque?

No, debido a que no todos los microorganismos requieren de estas estructuras.

Normalmente los microorganismos que poseen alguna de estas dos tienen características
patogénicas o extremófilas, por lo que no en todos los tipos de microorganismos se podrá
evidenciar alguno de los dos fenómenos. Por ejemplo, las endosporas no se forman en
cocos ni en bacilos gram negativos. [5]

Bibliografía

[1] Atlas, R. M. (1995). Microorganisms in our world. Mosby-Year Book, Inc..

[2] Mishra, S. K., & Agrawal, D. (2012). A concise manual of pathogenic microbiology. John Wiley &
Sons.

[3] Cappuccino, J. G., & Welsh, C. T. (2017). Microbiology: a laboratory manual. Pearson Education.

[4] Foster, T. J. (2002). Staphylococcus aureus. Molecular Medical Microbiology, 839-888.

[5] Prescott, L. M. (2002). Microbiology.

[6] Moore, M., & Wooldridge, W. E. (1950). Antifungal properties of various extracts of Bacillus subtilis
(Tracy strain) obtained in the bacitracin recovery process. Journal of Investigative Dermatology, 14(4),
265-281.

[7] Robinson, K., Xiao, Y., Johnson, T. J., Chen, B., Yang, Q., Lyu, W., ... & Zhang, G. (2020). Chicken
intestinal mycobiome: initial characterization and its response to bacitracin methylene disalicylate.
Applied and environmental microbiology, 86(13), e00304-20.

[8] Venkateswerlu, G. (1981). Antifungal activity of bacitracin and its interaction with metals. Journal
of Biosciences, 3, 1-5.

[9] Muras, A., Romero, M., Mayer, C., & Otero, A. (2021). Biotechnological applications of Bacillus
licheniformis. Critical Reviews in Biotechnology, 41(4), 609-627.