CITOGENETICA COMO HERRAMIENTA EN EL

DIAGNOSTICO Y PRONOSTICO HEMATOLOGICOS

TM HECTOR HERRERA
REYNOSO
Citogenetista Clínico
Mg. Genética Humana
Factores de
transcripción en
el sistema
hematopoyético
La figura recoge
diferentes FT de
transcripción con un
papel conocido en
la hematopoyesis,
en relación con las
poblaciones
celulares en las que
ejercen su acción
Hematopoyesis que se
produce en los seres humanos,
requiere importantes factores de
crecimiento hematopoyéticos
que afecta a la diferenciación.

Legend:
SCF= Stem Cell Factor
Tpo= Thrombopoietin
IL= Interleukin
GM-CSF= Granulocyte Macrophage-colony
stimulating factor
Epo= Erythropoietin
M-CSF= Macrophage-colony stimulating factor
G-CSF= Granulocyte-colony stimulating factor
SDF-1= Stromal cell-derived factor-1
FLT-3 ligand= FMS-like tyrosine kinase 3 ligand
TNF-a = Tumour necrosis factor-alpha
TGF-β = Transforming growth factor beta
Regulation of hematopoiesis via
growth factors and cytokines

Esta figura ilustra las relaciones jerárquicas de las

células madre hematopoyéticas multipotentes, los
progenitores y las células maduras de los linajes
mielopoyético, eritrocitario y plaquetario junto con los
principales factores de crecimiento, las citocinas y sus
acciones. Los factores de crecimiento y las citocinas
involucrados tienen acciones superpuestas durante la
diferenciación hematopoyética, como se indica, y,
para la mayoría de los linajes, el desarrollo óptimo
requiere una combinación de factores de acción
temprana y tardía.

LTR-HSC: long-term repopulating hematopoietic stem

cell; STR-HSC: short-term repopulating hematopoietic
stem cell; SCF: stem cell factor: IL: interleukin; CMP:
common myeloid progenitor; CLP: common lymphoid
progenitor; MEP: megakaryocyte-erythroid
progenitor; GMP: granulocyte-myeloid progenitor;
CFU: colony-forming unit; BFU: blast-forming unit;
Epo: erythropoietin; Tpo: thrombopoietin; G-CSF:
granulocyte colony-stimulating factor; M-CSF:
monocyte/macrophage colongy-stimulating factor;
GM-CSF: granulocyte-macrophage colony-stimulating
factor; TNF: tumor necrosis factor.

Reproduced from: Sieff CA, Zon LI. Anatomy and Physiology of

Hematopoiesis. In: Nathan and Oski's Hematology of Infancy
and Childhood, 7th ed, Orkin S, Fisher D, Look AT, et al. (Eds),
Elsevier, Philadelphia 2009. Illustration used with the
permission of Elsevier Inc.
 genes involucrados en el
crecimiento , desarrollo, diferenciación y
muerte celular son genes celulares normales

PROTO-ONCOGENES

Alteraciones del material genético (reordenamientos cromosómicos,

inserciones, amplificaciones, mutaciones puntuales)
pueden ver afectada su función transformando a
una célula normal en neoplásica

Proliferación
descontrolada Inhibición de la
Pérdida de apoptosis
capacidad de
diferenciación
MUTACION PUNTUAL
AMPLIFICACION GENICA
La leucemia mieloblástica aguda (LMA) es una enfermedad clonal heterogénea resultante de
la transformación maligna de células madre hematopoyéticas. Se caracteriza por la presencia
de diversas alteraciones genéticas adquiridas en células de estirpe mieloide que alteran sus
mecanismos normales de auto-renovación, proliferación y diferenciación celular (Fröhling et al., 2005).

Progenitores
Eritrocitos
CMH
mieloides
Plaquetas

Granulocitos

Macrófagos
Hematopoyesis normal

Mutación Mutación Expansión clonal

Leucemia Mieloide Aguda

Clasificación FAB. Criterios morfológicos y citoquímicos (Flandrin et al.,1976)
 Estudio Citogenético en Desordenes
Mieloproliferativos /Leucemias/Linfomas

MO/SP

LMC/SMPC SMD/LMA/ LLA/SLPC B ó T

MM MM/Linfomas

Directo/24 h 24 y 48 h 48 y 72 h

Sin estimulante mitogénico

CULTIVO DE MEDULA OSEA
CULTIVO MEDULA
OSEA
Anormalidades cromosómicas en cáncer (Frohling & Hartmut, 2008)
Clasificación MIC: Morfología-inmunofenotipo-Citogenética (Hage & Group 1988)
CLASIFICACION MIC
Anomalía Cromosómica FAB Frecuencia Genes Implicados
. t(8;21)(q22;q22) M2 5-10% AML1-ETO
. t(15;17)(q22;q21) M3 10-15% PML-RARalfa
. inv16/t(16;16) M4 5-10% CBFB-MYH11
. Anomalías en el 11q23 M4/M5 5-10% MLL
- t(9;11)(p21-22;q23) M5 5% AF9-MLL
- t(11;19)(q23;p13.1) MLL-ELL
- t(11;19)(q23;p13.3) MLL-ENL
. t(6;9)(q23;q34) M2/M4 1% EK-CAN
. t(8;16)(p11;p13) M4/M5 <1% MOZ-CBP
. Anomalías en 3q26
- inv(3)(q21;q26)/t(3;3) M4 3-5% EVI1
- t(3;21)(q26;q22) 1% EVI1-AML1
- t(1;3)(p36;q21) <1% EVI1
. t(9;22)(q34;q11) M1 3% BCR-ABL
. t(1;22)(p13;q13) M7 <1% OTT-MAL
1990: Citogenética Molecular
Estación de trabajo FISH
 FISH
-Núcleos interfásicos
-Sonda locus específica con señal extra
-Punto de ruptura m-bcr y M-bcr

Gene ass (65Kb) Gene abl (225 Kb)

Sonda abl 1b 1a 2...............................11

650 Kb

m-bcr
M-bcr

e1 e2 e3...............................12 13 14
Sonda bcr 5´ 3´

300 Kb
Translocación t(9;22) : Gen de fusión BCR / ABL
La translocación t(9;22)(q34;q11) que origina
el cromosoma Filadelfia está presente en casi todos
los casos de leucemia mieloide crónica (95%) y en
algunos casos de leucemia linfocítica aguda, siendo
de importancia diagnóstica la detección del gen de
fusión BCR / ABL, mediante Hibridación in situ con
Fluorescencia (FISH).

Translocación t(8;21) : Gen de fusión AML1 / ETO

La translocación t(8;21)(q22;q22) es una de las
alteraciones cromosómicas más frecuentes en LMA,
especialmente de tipo M2. La detección de la presencia
del gen de fusión AML1 / ETO, o translocación
t(8;21)(q22;q22) mediante FISH, la cual indica un buen
pronóstico.
 LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA

LEUCEMIA MIELOCITICA AGUDA (M2)

t(8;21)(q22;q22) 5q-/-5 7q-/-7 del(3p) t(6;9)(p22;q34)
t(9;22)(q34;q11) +8
CITOGENETICA FISH
LEUCEMIA PROMIELOCITICA (M3)
t(15;17)(q22;q11)

t(15,17)(q22;q11)
LEUCEMIA MIELOMONOCITICA AGUDA (M4)
inv(16)(p13q22) 16q- t(6;9)(p22;q34) +8 t(?;11)(?;q23)
5q-/-5 7q-/-7 t(9;22)
LEUCEMIA MONOCITICA AGUDA (M5)
del(11)(q23) t(9;11)(p21;q23) t(?;11)(?;q23) +8
La clasificación de la
Organización Mundial de la
Salud (OMS:2005)
Intenta ser más útil que la FAB
desde el punto de vista clínico.
Su objetivo es dar más
información significativa
relacionada con el pronóstico
de la LMA.
 CITOGENÉTICA Y PRONÓSTICO EN LA LMA
La citogenética es uno de los factores más importantes para poder obtener un pronóstico fiable de la
enfermedad, ya que existen ciertas anomalías cromosómicas estrechamente relacionadas con subtipos
concretos de leucemia. existen ciertas anomalías citogenéticas conocidas y asociadas a un pronóstico
adverso, ya que presentan un elevado riesgo de recaída tras el tratamiento

Grupo de Supervivencia tras Tasa de

Anomalía 5 años recidiva
riesgo

Favorable t(8;21), t(15;17), inv(16) 70% 33%

Normal, +8, +21, +22, del(7q), del(9q), Anormal

Intermedio 11q23, cualquier otro cambio estructural o 48% 50%
numérico

Adverso -5, -7, del(5q), Anormal 3q, Citogenética compleja 15% 78%
Estratificación pronóstica de la LMA en función de las anomalías citogenéticas, según diferentes grupos cooperativos
Alteraciones Moleculares
European LeukemiaNet (ELN). (Mroźek et al., 2012).
ESTUDIO CITOGENETICO DE LEUCEMIA LINFOBLASTICA AGUDA (LLA)

INTRODUCCION
➢La LLA es una enfermedad neoplásica que resulta de una proliferación clonal de precursores linfoides (linfoblastos), que
infiltra médula ósea, produce un grado variable de pancitopenia, puede comprometer diferentes órganos y/o sistemas y
causa la muerte por hemorragia y/o infección. Esta enfermedad es heterogénea, desde el punto de vista morfológico y
citogenético, suele ser frecuente en la edad pediátrica, aunque también se presenta en adultos con menor frecuencia.

➢En la LLA se reportan varios tipos de alteraciones cromosómicas que tienen valor pronóstico
bien conocido, estas alteraciones permiten valorar la respuesta al tratamiento y la
supervivencia.
➢Incidencia y epidemiología: Tiene una distribución bimodal con un primer pico en pacientes < de 20 años (± 60%) y el
segundo a partir de los 45 años de edad (20%). Representa el 75 – 80% de las leucemias agudas en edad pediátrica con un
pico de incidencia entre los 2 a 5 años y el 20% de las de edad adulta.

➢La LLA ocurre con mayor frecuencia durante la primera década de vida, pero su frecuencia vuelve a aumentar en
personas mayores, siendo una enfermedad agresiva que presenta un comportamiento diferente al descrito en los niños;
en la actualidad, cerca de 90% de los sujetos menores de 15 años logran remisión completa (RC) y 70% se cura de la
enfermedad. A pesar del progreso en el tratamiento de las enfermedades hematológicas malignas, los adultos con LLA
tienen tasas de RC de 75% y una supervivencia libre de enfermedad (SLE) a largo plazo que no supera 30%.
Alrededor de 40 a 50% de niños y adultos con LLA tienen alteraciones cromosómicas; éstas pueden ser de tipo numérico (hiperdiploidia o
hipodiploidia) y estructural, siendo la más frecuente las translocaciones. En la fig 1 se muestran los subtipos citogenéticos, y su frecuencia en niños
y adultos jóvenes.Estas alteraciones pueden ser detectadas por citogenética clásica, citogenética molecular (hibridación in situ con fluorescencia,
FISH) y biología molecular (RT-PCR).

Juan Carlos Bravata-Alcántara,* Sonia Chávez-Ocaña,** Mónica Sierra-Martínez*** Citogenómica

en leucemia linfoblástica aguda Artículo de revisión Rev Hosp Jua Mex 2014; 81(3): 182-187
NEOPLASIAS LINFOIDES DE CÉLULAS PRECURSORAS SEGÚN WHO 2008

LEUCEMIA/LINFOMA LINFOBLÁSTICO B
➢Leucemia / Linfoma Linfoblástico B, NOS (No especificado de otro modo)
CD19+cCD22+CD79a+CD22s+/-CD10+TdT+CD24+CD34 y CD20variable, CD45-/+, CD33 y CD13variable

➢Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con anomalías citogenéticas recurrentes

.- Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con t(9;22)(q34;q11.2); BCR/ABL1
CD19+CD79a+cCD22+CD10+TdT+CD34+CD38-/+CD25+, CD13 y CD33 variable
.- Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con t(v;11q23); con rearreglo de MLL
CD19+CD79a+cCD22+CD10-TdT+CD34++CD45+NG2+, CD15 y CD65 variable
.- Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con t(12;21)(p13;q22); TEL/AML1
CD19+CD79a+cCD22+CD10+TdT+CD34+CD9-, CD20- y CD66c- CD13variable
.- Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con hiperdiploidía
CD19+CD79a+cCD22+CD10+TdT+CD34+CD123+CD45-
.- Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con hipodiploidía
CD19+CD79a+cCD22+CD10+Indice ADN<1
.- Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con t(5;14)(q31;q32); IL3-IGH
CD19+CD79a+cCD22+CD10+ con eosinofilia
.- Leucemia / Linfoma Linfoblástico B con t(1;19)(q23;p13.3); E2A-PBX1 (TCF3-PBX1)
CD19+CD79a+cCD22+CD10+μ+CD34-CD9-
LEUCEMIA/LINFOMA LINFOBLÁSTICO T
➢LEUCEMIAS AGUDAS DE LINAJE AMBIGUO
Leucemia Aguda Indiferenciada
HLA DR+CD34+CD38+TDT+ ningún otro marcador de línea
➢Leucemia Aguda con Fenotipo Mixto con t(9;22)(q34;q11.2); BCR/ABL1
Linaje B y Mieloide más frecuente, T y mieloide y trilinaje menos frecuente.
➢Leucemia Aguda con Fenotipo Mixto con t(v;11q23); con rearreglo MLL
CD19+ CD79a+cCD22+CD10-CD15+MPO+CD13+CD33+CD117+
➢Leucemia Aguda con Fenotipo Mixto B/ Myeloid, NOS
CD19+CD79+cCD22+CD13+CD33+CD117+MPO+ población de blastos B con CD20+
➢Leucemia Aguda con Fenotipo Mixto T/ Myeloid, NOS
cCD3+CD79+cCD22+CD13+CD33+CD117+MPO+ población de blastos T con CD3+
➢Leucemia / Linfoma Linfoblástico Natural Killer (entidad provisional sin
identificación: ICD-O) (actualmente en revisión)
CD3s-CD56+CD57-CD16- rearreglos TCR - CD2+/-CD4+/-CD5+/-CD7+/-CD33+/-

Gökbuget N. Acute lymphoblastic leukemia in older patients. Hematology

Education Program of EHA. 2011;5:20-26.
Classical and Molecular Cytogenetic Analysis of Hematolymphoid Disorders Mark A. Micale 2011
HIPODIPLOIDIA (42 Cr)
HIPERDIPLOIDIA (62 Cr)
46,XY,t(9;22)(q34;q11)
46,XY,t (4;11)(q21;q23)
46,XX,t(1;11)(q21;q23)
46,XY,t(8;14)(q24;q32)
CARIOTIPO COMPLEJO
Microarreglos que detectan ganancias y pérdidas de genes (pérdida de heterocigosidad y número en copias variables)
Simons y col.(2011) analizaron 60 casos, encontrando una tasa de detección en función en el número de copias en 90%, mientras que en el
cariotipo sólo se encontraron en 61% de alteraciones, las alteraciones encontradas específicamente fueron: deleción de 3p14.2 (FHIT), 5q33.3
(EBF), 6q, 9p21.3 (CDKN2A/B), 9p13.2 (PAX5), 13q14.2 (RB1) y 17q11.2 (NF1), ETV6, y IKZF1,los cuales están asociados con la expresión y
regulación de genes que contribuyen a una transformación neoplásica en la hematopoyesis y se localizan en células de tipo B. Finalmente se
encontró que pueden presentarse alteraciones en los cromosomas 9, 6, 12, y su aportación más relevante fue la participación del gen IKAROS,
el cual sólo se observó en edad pediátrica, además de que juega un papel importante en la prognosis de la enfermedad.
Translocación en la LMC,
t(9;22)(q34;q11). El cromosoma
Filadelfia es el resultado de la
fusión de dos genes: BCR en el
cromosoma 22 y ABL en el
cromosoma 9. Las flechas
indican los sitios de ruptura en
ambos genes y abajo están
representados las diversas
proteínas y transcriptos que
resultan de la fusión de estos
dos genes que a su vez da
origen a los distintos fenotipos.
 PCR
CONVENCIONAL

PCR
TIEMPO REAL
https://www.youtube.com/watch?v=0SC45X0RKDE
DIAGNOSTICO
INTEGRADO
 Deteccion de anormalidades con diferentes tecnicas
citogeneticas en pacientes con LA (McGrattan et al., 2008).

Por citogenética convencional

(Bandeo G), identifica rearreglos
y desequilibrios génicos en un
33% de los casos; mientras que
para citogenética molecular que
incluyen FISH y CGH, se detectan
alteraciones en un 57% de los
casos, en conjunto las técnicas
detectan en general un 75%
(McGrattan, 2008).
 Técnicas Moleculares de Diagnóstico

*Ventajas -alta sensibilidad

-alta especificidad
-Permite diagnóstico, pronóstico
y seguimiento
-rápido
-permite el diagnóstico en casos con
cariotipo normal
-Permite diferenciar los diferentes puntos
de ruptura en el gene, lo que se encuentra
asociado a distintos tipos de patologías
Estudio de Marcadores Genéticos

Estas Técnicas Citogenéticas y Biología Molecular repercute directamente en:

1. La confirmación del diagnostico,
2. La información útil para la clasificación, la estadificación y el pronostico
3. La información para guiar la elección apropiada de la terapia, y
4. Determinación de la remisión o recaída (Micale, 2010).
https://www.youtube.com/watch?v=3sEolby8V1M
 TALASEMIAS
➢ El término talasemia engloba a un grupo
heterogéneo de trastornos hereditarios que
se caracterizan por un defecto en la síntesis
de una o varias de las cadenas de la Hb.
➢ La molécula de Hb está formada por
cuatro cadenas polipeptídicas, dos cadenas
tipo alfa (α o ζ) y dos tipos beta
(β, δ, γ o ε), unidas cada una de ellas a un
grupo hemo.
➢ Las combinaciones de estas cadenas
producen seis hemoglobinas: tres
embrionarias (Hb Gower-1 [ζ2ε2], Hb
Gower-2 [α2ε2] y Hb Portland [ζ2γ2]), una
fetal [α2γ2] y dos adulta (HbA [α2β2] y
HbA2 [α2δ2]).
➢ El tipo de Hb que se expresa depende
del estadio del desarrollo.
TALASEMIAS. Caso Clínico: Paciente con anemia microcítica.
PILAR CARRASCO SALAS, JUAN LÓPEZ SILES. Centro de Genética Molecular Genetaq,.Málaga.2015
❖ A nivel molecular, la síntesis de las
cadenas de la Hb es controlada por dos
agrupamientos de genes o clúster.
❖ El clúster de la globina α se sitúa en el
cromosoma 16 y comprende tres genes
funcionales: HBZ (OMIM: 142310), HBA2
(OMIM: 141850) y HBA1 (OMIM: 141800),
que codifican las cadenas ζ, α2 y α1,
respectivamente.
❖ El clúster de la β-globina, localizado en
el cromosoma 11, consiste en cinco genes
funcionales: HBE1 (OMIM: 142100), HBG2
(OMIM:142250), HBG1 (OMIM: 142200), HBD
(OMIM: 141900) y HBB (OMIM: 142000) que
codifican las cadenas ε, γG, γA, δ y β,
respectivamente.
❖ La expresión de ambos clúster depende de
regiones reguladoras situadas en la región
promotora en 5’. En el adulto, los dos genes
que se transcriben en mayor proporción son
HBA2 y HBA1 en el cromosoma 16 y HBB en el
cromosoma 11, formando la hemoglobina A
(α2 β2).
Los diferentes tipos de talasemia se clasifican según las
cadenas de globina cuya síntesis esté afectada, siendo las
más comunes y de mayor importancia clínica la α, β, y
δβ-talasemia y la persistencia hereditaria de
hemoglobina fetal (PHHF).
Exceptuando algunos casos, tanto la talasemia α como la
talasemia β presentan una herencia autosómica recesiva.
La talasemia α se produce por mutaciones que afectan a
los genes HBA1 y HBA2. Mientras que los individuos
normales presentan 4 alelos funcionales, dos en cada
cromosoma (genotipo αα/αα), la mayoría de los
pacientes con talasemia α presentan deleciones que
afectan a uno (α-) o a ambos genes (--).
Entre las primeras, la deleción -α3.7 es la alteración
molecular más frecuente en las talasemias α. Supone la
desaparición de un fragmento de 3,7 kb que elimina
parte del gen HBA1 y del HBA2, dejando un gen híbrido.
Menos frecuente es la deleción -α4.2, propia de los
países del Sudeste Asiático, que supone la pérdida de un
fragmento de 4,7 kb que afecta al gen HBA2. Deleciones
más amplias, como –MED, de 17,4 Kb frecuente en el
Mediterráneo o –SEA, típica en las poblaciones asiáticas,
de 20 kb, delecionan los genes HBA2 y HBA1.
Ocasionalmente, la talasemia α se puede deber a
mutaciones puntuales en alguno de los genes o en zonas
reguladoras.
A diferencia de las talasemias α, las mutaciones más
frecuentemente descritas en las talasemias β son
mutaciones puntuales en el gen HBB del clúster de la β-
globina. Hasta el momento, se han descrito más de 200
diferentes
Esquema metodológico en las talasemias α, en las talasemias β y en las talasemias
que cursan con aumento de HbF (δβ-talasemias y PHHF). Entre paréntesis, se indica
la técnica más utilizada.

TALASEMIAS. Caso Clínico: Paciente con anemia microcítica.

PILAR CARRASCO SALAS, JUAN LÓPEZ SILES. Centro de Genética Molecular Genetaq,Málaga.2015
 TROMBOFILIA
Desorden del mecanismo hemostático donde se demuestra una predisposición anormal a la trombosis.
Desde el punto de vista genético, los factores de riesgo que se asocian con trombosis arteriales son
hiperhomocisteinemia con mutación de la enzima Metilentetrahidrofolato Reductasa (MTHFR),
presencia de anticoagulante lúpico/Síndrome Antifosfolipídico y Deficiencia de Proteína C (PC) y
Proteína S (PS), mientras que la trombosis venosa se presenta en Factor V Leiden (FVL), mutación del
gen de protrombina, deficiencia de PC y PS y otras mutaciones menos frecuentes.
https://www.youtube.com/watch?v=lvGNZGK7m8Y
MUCHAS GRACIAS