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Aplicacin de las BPL en laboratorios de Microbiologa de los Alimentos.

Autor: Mabelin Armenteros. Centro de Ensayos para la Calidad de la Leche y Derivados Lcteos (CENLAC), Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Carretera de Tapaste y Autopista Nacional, San Jos de las Lajas, La Habana. Introduccin:
La Buenas Prcticas de Laboratorio son los principios que identifican, definen y describen la organizacin de las condicio nes bajo las cuales se deben llevar a cabo la planificacin y ejecucin de los ensayos de laboratorios, incluyendo el registro de los datos, la preparacin de informes y el aseguramiento de la calidad de estas actividades: en general constituyen un conjunto de requisitos cientficos tcnicos tanto para la direccin como para la ejecucin de sus actividades lo cual garantiza la calidad y confiabilidad de los resultados. Los objetivos principales de un laboratorio de microbio loga se corresponden exactamente con lo antes expuesto, por ello es preciso que el trabajo del laboratorio sea de calidad, que no es ms que el aumento en la confianza y el prestigio del laboratorio. En general el trmino aseguramiento de la calidad es considerado como el sistema de actividades que brinda confianza en que el sistema de control de calidad es seguro y efectivo para producir resultados analticos confiables.Dicho de otra forma un programa de aseguramiento de la calidad se puede clasificar en tres categoras principales:Prevencin, Anlisis y Correccin La FAO (Organizacin de las Nacio nes Unidas para la Agricultura y la Alimentacin) y la ECCLC (European Co munity Standard for Quality Assurance) recomiendan los siguientes aspectos a tener en cuenta para un buen control interno de la calidad en los laboratorios de Microbio loga: I. II. III. IV. V. VI. VII. VIII. IX. X. Organizacin del laboratorio Personal: Seleccin, higiene y preparacin Muestras: Recepcin, identificacin, y transporte Equipamiento: Uso y cuidado Agentes qumicos y medios de cultivos Standard de referencia Limpieza y desinfeccin de reas aspticas Medidas de Bioseguridad Documentacin: Trazabilidad, procedimientos standard operacionales de laboratorio y registros de resultados Auditoras

I.- Organizacin del laboratorio

I. a. Area de fregado, esterilizacin y preparacin de materiales b. Area de preparacin de medios de cultivos c. Laboratorio para la diferentes especialidades Todo laboratorio debe constar de un reglamento interno que defina las funcio nes y responsabilidades de cada unidad organizativa adems de tener en cuenta otros requisitos constructivos, ambientales y operacionales que se mencio nan a continuacin:
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Los locales deben brindar espacio suficiente que permita la realizacin de las operaciones que se van a efectuar en los mismos, as co mo un flujo de trabajo eficaz y una buena comunicacin. Deben construirse y mantenerse con el objetivo de ofrecer una proteccin adecuada contra la entrada y pro liferacin de ratones, pjaros y todo tipo de animales. Los locales deben mantenerse convenientemente reparados y en buen estado. Efectuar revisio nes peridicas y las reparaciones necesarias. Estos locales deben poseer una buena iluminacin La superficie de paredes, pisos y techos, deben ser lisos, impermeables y sin fisuras, a fin de minimizar la acumulacin y propagacin de partculas y permitir la aplicacin de agentes limpiadores. Los materiales empleados en la terminacin de paredes, pisos y techos no deben emitir ni absorber partculas y ser resistentes al desgaste y deterioro mecnico. Las transicio nes entre superficies y diferentes materiales deben ser hermticos, uniformes y redondeadas. Deben evitarse las esquinas pronunciadas y rincones. Debe co locarse los equipos y materiales estrictamente necesarios para minimizar zonas de acumulacin y facilitar la limpieza del lo cal. Las mesetas y muebles deben ser de acero inoxidable No debe colocarse falso techo y en caso necesario deben ser adecuadamente sellados para prevenir la contaminacin de los espacios superiores. No deben existir tragantes ni fregaderos. Los lavamanos sern ubicados en locales de cambio. Evitar puertas de correderas, por la difcil limpieza de los rieles Evitar ventanas y si existen sern selladas a fin de evitar fugas y entradas de aire. Debe existir una presin positiva de los locales ms limpios a los menos limpios Deben existir controles de temperatura y humedad para mantener una constancia en las condicio nes ambientales: Temperatura:20C Humedad relativa: 60%

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El acceso estar limitado a personas autorizadas. Se debe realizar un programa de control microbiano en los locales y establecer ciclos de desinfeccin adecuados. El control ambiental debe ser monitoreado a intervalos establecidos por conteo microbiano.

II. - Personal
En un tpico laboratorio de microbio loga de los alimentos, existen dos tipos de personal tcnico: analistas, que realizan los anlis is y el personal de apo yo, que con un adecuado entrenamiento preparan medios, limpian la cristalera y realizan otras actividades de apoyo. El jefe del laboratorio de Microbio loga debe ser un microbilogo, que pueda dirigir el laboratorio tanto tcnica como administrativamente. Debe poder realizar los anlisis y ensear al resto del personal. De manera general el personal que labora en estos laboratorios debe reunir los siguientes requisitos:
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Estar perfectamente entrenado Capacitacin previa Entrenamiento inicial y perodo Motivacin y disciplina Tener conocimientos elementales de qumica y microbio loga Experiencia prctica adecuada Tener inters en establecer y mantener patrones de alta calidad Deben ser preparados con programas especficos de: higiene personal, tcnicas manipulativas, seguridad, procedimientos de limpieza. Debe ser sometido peridicamente a un control de salud: No debe padecer de lesiones en la piel, heridas expuestas, afeccio nes del tracto respiratorio, alergia, infeccio nes gastrointestinales, enfermedades nerviosas ni transmisibles.

Higiene y disciplina del personal


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Mantener manos, cara, uas limpias No usar maquillajes ni embellecedores en general No usar esmalte para uas No usar prendas No fumar No comer Controlar los movimientos dentro del rea Usar el uniforme de trabajo o batas sanitarias Eliminar los desperdicios en los lugares indicados y apropiados Controlar el equipo de trabajo y la limpieza antes de comenzar las tareas Mantenerse en sus lugares de trabajo, evitar distraerse.

III.- Muestras, recoleccin y transporte


El personal que recolecte las muestras conocer los mtodos de muestreos y la importancia de un tratamiento adecuado de los mismas. Es imprescindible que las muestras de alimentos que se tomen para el anlisis microbio lgico reflejen con exactitud las condicio nes microbio lgicas existentes en el

mo mento del muestreo. Por consiguiente, este debe efectuarse aspticamente, utilizando recipientes e instrumentos estriles y protegiendo las muestras de la contaminacin externa. Adems deben mantenerse en condicio nes tales que la micro flora original que contiene el alimento no se afecte ni se multiplique. Las muestras que se han tomado congeladas deben mantenerse de esa forma, las no congeladas y putrescibles deben refrigerarse y mantenerse entre 0 y 5C de temperatura desde el mo mento en que se toman hasta que se analizan en el laboratorio, plazo que no debe exceder de 36 horas. La normas y procedimientos normativos de operacin de cada tcnica deben ser revisados para una vez recepcionadas las muestras en el laboratorio estas conserven su integridad.

IV.-Equipos
El cuidado y mantenimiento de los equipos pueden ser realizados en dos niveles:
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El jefe de Grupo asume la responsabilidad del plan de mantenimiento de los equipos, velando porque se cumpla con el tiempo establecido y de reportar cualquier desperfecto que se presente. La responsabilidad a nivel de laboratorio de los investigadores y tcnicos que trabajan con los equipos, en cuanto a limpieza, cuidado y monitoreo para detectar cuando existan fallas. Debe existir un rea especfica centralizada para colocar equipos de uso colectivo Los equipos sern utilizados slo cuando se hayan estudiado las instrucciones. Cuando un equipo presente desperfectos se reportar inmediatamente. Cada equipo debe tener un cronograma de mantenimiento y verificacin por escrito y las cartas de instrucciones del uso y control de uso. Se deben calibrar en el tiempo establecido utilizando los standars correctos. Establecer los lmites de sensibilidad de cada equipo y trabajar dentro de estos lmites.

A continuacin nos referiremos a algunos equipos de amplio uso en Microbio loga que requieren de determinadas medidas para controlar su buen funcio namiento: Autoclaves: Para el control de las autoclaves se han desarrollado un gran nmero de productores a base de esporas como los deno minados indicadores biolgicos que se usan desde hace mucho tiempo por integrar todos los parmetros involucrados en la esterilizacin (tiempo, temperatura, presin), estos indicadores son esporas de Bacillus stearothermophilus para calor hmedo (autoclave) y de Bacillus subtilis para calor seco (horno) en formas de tiras como en bulbos. El empleo de estos bio indicadores es seguro y sencillo y permite mo nitorear todas las zonas de la cmara interna de la autoclave. Tambin exis ten los indicadores qumicos (cintas termocrmicas) que son agentes qumicos basados en la capacidad de poder cambiar su

estado fsico, estas cintas impregnadas en algn colorante termo lbil se coloca en cada ciclo de esterilizacin y los indicadores bio lgicos semanalmente o quincenalmente. Es importante que el personal que manipule estos equipos conozca bien su funcionamiento y sea capaz de informar rpidamente cualquier dificultad. Entre las causas de mal funcio namiento de las autoclaves podemos mencio nar:
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Sobrecarga o mal aco modo de la carga Obstruccin de la entrada o salida de vapor Mal estado del manmetro de presin Mala manipulacin Problemas elctricos en caja de control o conexio nes Bajo nivel de agua

Incubadoras: Las incubadoras son los equipos ms co mnmente usados en los laboratorios de microbio loga de los alimentos. Aunque muchos fabricantes explican que la temperatura interna no es afectada por fluctuaciones normales en la temperatura de la habitacin. Algunos modelos son ms sensibles, por ello el analista debe tomar las suficientes precauciones para que no ocurran grandes fluctuaciones en la temperatura de estos locales, especialmente durante cambios estacionales. Al menos una vez al mes, la superficie interna debe limpiarse con solucin detergente y secarla. Debe medirse la temperatura interior diariamente. Flujos laminares: Todos los procedimientos microbio lgicos que involucran microorganismos patgenos, distribuir medios de cultivos o el anlis is de alimentos deben ser conducidos bajo flujo laminar. Son tambin llamados gabinetes de seguridad bio lgica (GBS) y constituyen el principal medio de contencin usados como barreras primarias para evitar la fuga de aerosoles al ambiente. Estos GBS van desde clase I hasta clase III y todos poseen filtros de alta eficiencia (HEPA) 95-99% en remover partculas 0,3 m o mayores en dimetro. El uso de mecheros dentro de la cabina de flujo no es recomendado. Las lmparas ultravio letas deben ser encendidas al menos 10 minutos antes de usar el equipo y usadas 10 minutos despus de haber concluido el procedimiento analtico en el flujo.

El interior del flujo adems debe ser desinfectado antes y despus de cada uso. La tabla 1 muestra las diferentes clases de GBS. CLASE DESCRIPCION CLASE I: Protege al operador, al medio ambiente pero no al producto, es una unidad de contencin parcial su tirofrontal es 75 pies/min. CLASE II: Se conoce ordinariamente como flujo laminar horizontal o vertical, en dependencia del uso tiene una apertura frontal que permite el acceso a la superficie de trabajo, posee filtros HEPA de alta eficiencia para filtrar el aire que recircula dentro de la cmara y el que entra del ambiente. CLASE III: Este gabinete es completamente cerrado con ventilacin propia y fabricado a prueba de fuga. La entrada y salida de materiales se efecta por esterilizadores de doble puerta y recipientes de inmersin con desinfectantes, es de seguridad mxima para el personal, medio ambiente y producto. Mtodos de certificacin de los gabinetes: 1. Certificacin del tiro de aire 1. Certificacin de la hermeticidad 1. Prueba de eficiencia de los filtros HEPA 1. Certificacin de presin negativa del aire en el sistema de clase III. Adems debe realizarse monitoreo microbiano dentro del gabinete por placas expuestas en diferentes puntos.

V.-Agentes qumicos y medios de cultivos


1.- Agentes qumicos: Los compuestos qumicos son ampliamente usados como componentes de los medios, agentes selectivos, indicadores y para tincio nes en varios procedimientos microbio lgicos. Se conoce que las impurezas qumicas pueden inhibir o estimular el crecimiento microbiano, o puede provocar reacciones indeseables por ello so lamente deben ser usados para estos fines los reactivos de proveedores que garanticen este aspecto. 2.- Preparacin, mantenimiento y control de los medios de cultivos: 2.1- Almacenamiento de los productos deshidratados:

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Se almacenarn en un lugar seco y protegido de la luz. El recipiente permanecer hermticamente cerrado y se realizar una comprobacin de cada lote que se cambie con respecto a su efectividad co mo sustrato, comparado con el medio anterior que se estaba usando, este control debe establecerse en el laboratorio y llenar el registro para este fin. Se debe registrar la fecha de recibido y la que ha sido abierto; utilizndose los ms viejos primero. La temperatura de almacenamiento ser de 25C aproximadamente, pudiendo ser menos, de no estar indicada otra temperatura. Se chequear visualmente el aspecto fsico del po lvo y cuando se detecte cambio de color u otra caracterstica desechar el frasco.

2.2- Preparacin de los medios de cultivos:


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Se seguir fielmente las instrucciones del fabricante, siguiendo estrictamente las normas de exactitud en el peso y vo lumen de agua. Se emplear agua recin destilada o desionizada, lavando previamente el recipiente donde se prepara el medio.. No se deben preparar volmenes mayores de 1 2 litros y en recipientes adecuados para realizar una correcta agitacin. Los medios de cultivos que contienen agar deben ser calentados hasta lograr su completa diso lucin, antes de esterilizarlos. Se debe controlar pH a todos los medios utilizados en el laboratorio. Los medios que contiene co lorantes sern protegidos de la luz y estos se adicio narn al medio en forma de so lucio nes. Los medios no deben fundirse en ms de una ocasin y no permanecern expuestos a temperaturas elevadas por tiempo prolongado. Cada lote de medio esterilizados en autoclaves ser etiquetado con el no mbre del producto y el ciclo de esterilizacin. Posteriormente sern almacenados en condicio nes que permitan conservar su humedad y propiedades nutricio nales, protegindo los del calor y la evaporacin; se conservarn hasta 2 semanas a 4C protegidos de la luz.

2.3- Prueba de esterilidad: Entre 3-5% de los recipientes (tubos, placas) de cada uno de los lotes de medios se incuban el tiempo normal de incubacin con observacin diaria a fin de estimar a partir del resultado obtenido de la muestra la esterilidad del lote de medio. 2.4- Control bio lgico de los medios de cultivos: Antes de utilizar los medios con muestras para su estudio estos sern comprobados en cuanto a sus propiedades mediante la inoculacin de microorganismos adecuados que sean capaces de ofrecer los resultados esperados para ese medio.
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Los microorganismos utilizados deben pertenecer a una coleccin es decir cepas de referencias o aislamientos que no tengan ms de 5 pases.

El medio diferencial Agar Vio leta rojo bilis se comprueba con un grmen que fermente la lactosa ej: E.coli y otra que no la fermenten Salmorella sp. y uno que sea inhibidor: Staphylococcus sp.

Tomar todas la medidas necesarias permitir un mejor funcio namiento de los medios de cultivos y resultados confiables.

VI.- Standards de referencia


Los standard de referencia son materiales ho mogneos con propiedades tales co mo identidad, pureza y potencia han sido medido y certificados por el National Institute of Standards and Techno logy, the U.S. Pharmacopeial Convention, the American Society for Testing Materials u otra organizacin equivalente. La Microbio loga es relativamente menos exacta que la qumica, standard de referencia son usados en el laboratorio de microbio loga. Los microbilogos usan cultivos de referencia para determinar cualitativamente que el medio est preparado apropiadamente. American Type Culture Colection (ATCC) es la mayor fuente de estos cultivos. El analista debe manejar la siguiente informacin: no mbre del cultivo (gnero y especie), designacin de especie, fuente de cultivo, fecha de recepcin, rehidratacin, medios usados, perodo y temperatura de incubacin y otros datos de inters como pureza, morfo loga, reacciones bioqumicas y sero lgicas.

VII.- Limpieza y desinfeccin de reas aspticas


Antes de comenzar a destacar la importancia del uso de tcnicas de control de microorganismos co mo la limpieza, es necesario hablar de los elementos que ayudan a mantener las condicio nes en estas reas. Un local asptico es un espacio cerrado mantenido a una presin positiva relativa a sus alrededores en el cual la cantidad de partculas en el aire viables y no viables es limitada y controlada. La clasificacin de estas reas aunque no se ha logrado que se mantenga una clasificacin comn en todos los pases, existen diferentes clasificacio nes para el ambiente por ejemplo: Ambiente negro (contaminado): Presenta una concentracin por pie cbico de aire igual o mayor a diez partculas inertes de mil micras o ms 107 mayores o igual a 0,5 y ms de 2,5 UFC. Ambiente controlado u opaco

El que presenta una concentracin por pie cbico de aire desde 107 partculas inertes iguales o mayores de 0,1, 106 ms iguales a 0,5 y ninguna mayores de 100 y 25 UFC Ambiente blanco El que presenta menor de 107 partculas inertes iguales o menores a 0,1, 106 iguales o menores de 0,3 y ninguna de 100 y viables menor de 2 UFC. Se ha comprobado que el ho mbre es el que mayor cantidad de partculas emite generadas por minutos en funcin de la actividad realizada siendo proporcional a los movimientos ejecutados por ejemplo: De pie o sentado Sentado moviendo una mano e inclinado el tronco Caminando lentamente Haciendo movimientos bruscos 10 000 partculas 1000 000 partculas 500 000 partculas 30 000 000 partculas

Adems al hablar se generan partculas que son proyectadas a 30 cm, de distancia, al toser de 60 a 90 cm. Y al estornudar de 4 a 5 metros. El objetivo principal de la limpieza es eliminar o remover la contaminacin microbiana de las superficies. Los trapeadores, utensilios o el agua de enjuague que estn sucios pueden dar como resultado una mayor contaminacin del piso despus de la limpieza que antes. Debe existir un manual de limpieza y descontaminacin que especifique:
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Frecuencia de limpieza: diaria, mensual o segn necesidad Nivel de limpieza requerido: Trapeo hmedo,Trapeo mojado, inundar, fregar y aspirar Agentes qumicos a usar y su concentracin: se deben usar a una concentracin efectiva y el tiempo de contacto es vital.

En estos locales debe existir un equipo de limpieza no intercambiable con el de otras reas. La ropa se debe lavar con mayor frecuencia y ser exclusiva para l actividad. Antes de comenzar a utilizar los desinfectantes, es necesario elaborar una poltica de desinfeccin, al conocer la historia y niveles de desinfeccin de los locales. Un desinfectante es una so lucin qumica de accin antimicrobiana; con toxicidad selectiva aunque txicos para las clulas.

Su efectividad depende de varios factores:


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Caracterstica del microorganismo: Fase de crecimiento Carga microbiana Especie de microorganismo

Caracterstica del agente desinfectante: Naturaleza Concentracin Toxicidad

Interaccin entre microorganismos y desinfectantes: Temperatura Tiempo de contacto pH Presencia de materia orgnica

Forma de aplicacin: Gas Aerosol Inmersin

Los desinfectantes deben ser preparados antes de su uso y no con anterioridad. Deben presentar las siguientes propiedades:
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Elevada potencia antimicrobiana Amplio espectro antimicrobiano Baja tensin superficial Estabilidad con alto poder de penetracin Accin residual prolongada Rpida accin No corrosivo No txico Econmico

No basta conocer las propiedades generales y/o particulares de los desinfectantes si no se establece una adecuada po ltica para su utilizacin. Ejemplo de algunos desinfectantes:

Bromuro cetilpiridina 0.3% Manos Alcoho l etlico 70% Alcoho l isoproplico 70% Hibitane 0.5% + 1% Glicero l +Etanol Alcoho l isoproplico Formaldehdo Utensilios Feno l Hexaclorofeno Alcoho l isoproplico 70% +30% formaldehdo 1-3% Bromuro-cetil-piridina 3% Formaldehdo Superficie 6% Hipoclorito de sodio Tego Etanol 70% Hibitane 1-1000mL Glutaraldehdo 2% Glico les (aerosol) 5 mg/m Aire Formaldehdo 25g/m (gas) Acido lctico (vapores) Acido peractico (vapores) Las mesetas de los laboratorios se limpiarn al menos dos veces al da con un pao o algodn estril con agua y detergente y se desinfectarn posteriormente utilizndose frecuentemente alcoho l al 70% o feno l 3-5%. Para la desinfeccin del rea adems se utiliza sistemas de vapores de KMN04 y formo l en una proporcin de 1,3g de permanganato y 15 mL de formo l por m3 de rea.

Se realizar adems como complemento de la limpieza y desinfeccin, el mo nitoreo de estas reas; para lo cual se emplean diferentes mtodos: 1. Establecimiento de placas: Este mtodo consiste en la exposicin al ambiente de 30 a 60 min de placas conteniendo triptona soya agar, posteriormente se incuban y se realiza el conteo que debe ser por debajo de 2 colonias. 1. Muestreador de impacto de corte sobre agar: Es un instrumento que emplea una placa giratoria conteniendo un medio de cultivo slido haciendo pasar el aire a examinar por medio de vaco, cuantifica la cantidad de aire analizado. 1. Filtrado con membrana: El aire se aspira a travs de la superficie del filtro de membrana y estos filtros son montados sobre un medio nutriente para cuantificar las UFC. Las superficies de trabajo tambin se controlan mediante placas expuestas, hisopajes y placa de contacto.

VIII.- Medidas de Bioseguridad


Nuestros laboratorios son clasificados como bsicos debido a que se trabaja con agentes de los grupos I y II, es decir los que entraan un riesgo escaso o moderado para el personal del laboratorio y un riesgo bajo o limitado para la co munidad. La bioseguridad consta de tres principios bsicos para garantizar el aislamiento o contencin de agentes bio lgicos: a. Tcnicas y prcticas correctas de laboratorio b. Equipos de seguridad o barreras primarias c. Diseo de instalacin o barrera secundaria Las verdaderas causas de infeccio nes de laboratorio consisten en una combinacin de circunstancias de causa y efecto. Las prcticas incorrectas son causa de la mayor parte de los accidentes e infeccio nes afines. Por ello debe respetarse las medidas de seguridad en el trabajo de laboratorio como las de cumplimiento de las reglas elementales de trabajo. No pipetear con la boca para evitar aspiracin oral, descontaminacin del material infeccioso por medio de autoclaves, la correcta manipulacin de la muestra que de ser diferente no slo pone en peligro al personal inmediato sino al personal de apo yo. Seguridad qumica, elctrica y proteccin contra incendios: Los incendios o los accidentes de origen qumico y elctrico pueden tener como consecuencias indirectas un fallo de las medidas de contencin de microorganismos ms patgenos. As pues, en el laboratorio de Microbiologa es indispensable mantener un nivel de seguridad qumica y elctrica y de proteccin contra incendios.

En caso de roturas y derramamiento de recipientes de cultivos, estos deben ser cubiertos con un trapo empapado en desinfectante. Al cabo de los 10 minutos como mnimo, se evacuarn los trozos rotos y el trapo en un recogedor de polvo y se fregar el suelo con un desinfectante. Para determinar el grado de riesgo que tienen las tcnicas ms co munes usadas dentro del laboratorio se han utilizado estudios experimentales para cuantificar la probabilidad que existe de infectar al ambiente y al personal (tabla 2). Tabla 2. Aerosoles producidos por las tcnicas ms comunes utilizando como microorganismo de prueba Serratia (segn Handbook of laboratory Safety 1985). Tcnicas Centrifugacin: Remover el sedimento despus de centrifugado Decantar el sobrenadante dentro del frasco Adicio nar30 mL de solucin Salina en el sedimento resuspender por agitacin con pipetas Inoculacin de m.o en medio de cultivos: Inocular placas de agar con 1mL de Serratia Inocular 5 mL de cultivo en 100 mL de medio Lio filizacin: Romper mpulas conteniendo 2 mL de Serratia lio filizada Abrir un mpula lio filizada por limado Transferir un inculo de un mpula lio filizada a tubos con medio Transferir un inculo de un mpula lio filizada a placas petri 20 50 15 86 1 2.6 250 10 10 10 10 2.3 17.6 4.5 N de Operaciones UFC

15 0.60 0.80 741

b. Equipos de bioseguridad o barreras primarias

Es la primera lnea de defensa para prevenir escape de aerosoles de microorganismos constituidos por el investigador o tcnico y los medios que utiliza con este fin. En tal sentido los gabinetes de seguridad bio lgica (GBS) son el principal medio de utilizacin y fueron referidos en el epgrafe de equipos. c. Barreras secundarias En estas barreras encontramos los sistemas de extraccin y purificacin del aire de los laboratorios con construcciones especficas, sistema de tratamientos lquidos, autoclaves con doble puerta y acceso controlado con doble aire y pagos sanitarios.

IX.- Documentacin
Debe existir un registro sistemtico y documentado de toda la informacin del anlisis realizado. Esta documentacin puede ser necesaria para reconstruir una situacin analtica de los eventos ocurridos o si un reanlisis debe ser ejecutado. Trazabilidad: La documentacin provee el mecanismo para trazar la localizacin de una muestra de laboratorio desde su coleccin inicial hasta su disposicin fina l. En caso que el laboratorio no realiza la co leccin de la muestra, describe como realizar las operaciones para que exista trazabilidad de las muestras desde su arribo al rea hasta el informe final. Procedimientos standard operacionales y registros de resultados: Deben desarrollarse las operaciones de ensayos de acuerdo con los mtodos y procedimientos de anlisis descritos en las normas cubanas y por mtodos actualizados que definen las organizacio nes internacio nales (FAO, ISO, FIL, AOAC). Todos los ensayos tendrn su procedimiento normalizado de operacin y su registro de resultados para posterior confeccin de informe final.

X.-Auditoras
Las auditoras y las revisio nes del cumplimiento de los principios del aseguramiento de la calidad permiten a la direccin del laboratorio evaluar la efectividad del sistema de calidad

ANEXO Tcnicas generales en la realizacin del conteo en placas.

La correcta ejecucin de la tcnica de conteo total en placas es el trabajo microbio lgico ms comn en nuestros laboratorios y puede ser afectado por 5 fuentes de posibles variacio nes: 1. La presencia de grumos de bacterias 1. Error al preparar las diluciones 1. Error en la transferencia de las diluciones a las placas. 1. La distribucin de las bacterias en las alcuotas inoculadas. 1. Los factores que influyen en el desarrollo de las clulas para formar colonias As la observancia del mayor cuidado en esta prctica minimizar la posibilidad de error y por tanto obtendremos resultados ms confiables.

Factores que influyen en los criterios microbiolgicos sobre un producto.


1. Las condicio nes en que se realiza el muestreo y transporte de la muestra. 1. La tcnica de anlisis utilizada 1. La calidad de los reactivos y los medios de cultivos 1. La destreza del tcnico que ejecuta el anlis is 1. El respeto que observa el analista por los pasos de la tcnica. 1. La presencia de sustancias que interfieren el desarrollo microbiano 1. El estado fisio lgico de los microorganismos presentes, su distribucin cualitativa y cuantitativa.

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA
1. Buenas Prcticas de Laboratorio en Microbio loga. Curso BPL, CENSA, 1996. 1. C.DC Clasification of etio logic agents on the bases of hazard 4th ed. Pub. of USPHs off biosafet y Attanta, 1977. 1. CDC-NIH Biosafety in Microbio logical and Bio medican Laboratories St UDS HHS/PHS, Atlanta, Georgia, 1984. 1. Collins. CH Laboratory acquired infection MD. Lab. Sc. 37: 191-298, 1980.

1. Controles Microbio lgicos en los Laboratorios. Curso Control de Laboratorios, CENSA, 1988. 1. European Communittes for Clinical Laboratory Standard Part. 2. Internal Quality Control in Microbio logical ECCLS. Documental Vol. 2, 1985. 1. Handbook of Laboratory Safety. 2da. edition. Normas V Steerc CRC Press. Inc. Design of facilities for Microbio logical Safety G. Breggs Phillips and Robert. 1985. 1. Manuales para el control de calidad de los alimentos. 4 anlisis microbio lgico, FAO, 14/4, Roma, 1981. 1. Manual o f Food Quality Control 12. Quality. Assurance in the food control microbio logical laboratory, FAO 14/12, Rome, 1991. 1. Principios bsicos de bioseguridad aplicados a los laboratorios bsicos. Curso Buenas Prcticas de Laboratorio, CIGB, 1996.