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Manual de Prcticas
del
Laboratorio de Ingeniera de Reactores y
Biorreactores
Agosto 2017
Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
ndice
Prctica 1. Diseo mecnico e instrumentacin de un biorreactor ......................................... 3
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PRCTICA 1
1. INTRODUCCIN
Un biorreactor puede ser definido como todo aquel recipiente o contenedor en el que,
mediante un biocatalizador, ciertas materias primas son transformadas a productos. Es
semejante a un reactor utilizado en la industria qumica en el que los reactantes, al ponerse
en contacto entre ellos, reaccionan con ayuda de un catalizador de naturaleza qumica para
formar productos.
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A partir de la segunda guerra mundial los biorreactores han sido ampliamente usados en la
industria de fermentaciones o en la productora de biolgicos y farmoqumicos, para elaborar
los tipos de productos arriba mencionados.
Entre las caractersticas que debe reunir un biorreactor se encuentran las siguientes:
Agitados mecnicamente
Biorreactores Columna
Propelas
Circulacin Airlift
Jet
Cada configuracin tiene sus caractersticas propias, mismas que sern descritas brevemente.
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A partir de que el ser humano toma conciencia de que los altos ndices de contaminacin de
las aguas, del suelo y del aire afectan negativamente su salud y la del medio ambiente en la
que vive, los biorreactores han sido exitosamente empleados en el rea ambiental para
disminuir, en buena medida, los ndices de contaminacin.
Existen varias diferencias entre los biorreactores empleados en los procesos biotecnolgicos
con aquellos utilizados en el rea ambiental, como puede constatarse en la Tabla 1. Respecto
al bioproceso, la diferencia principal radica en que en los primeros se produce un producto
de naturaleza muy distinta a las materias primas empleadas (teniendo el producto un valor
agregado mayor -y hasta mucho mayor- que las materias primas empleadas), mientras que
en los segundos el producto resulta ser la misma materia prima empleada pero sin rastros
de contaminantes, como en los casos de tratamientos de aguas, aire y suelos.
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Aire Aire
Dt = 45
Tubo de
arrastre
Aire
Aire
Bafle
Aire Aire
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Tabla 1.- Diferencias entre los biorreactores empleados en los procesos biotecnolgicos con
aquellos utilizados en el rea ambiental
Del rea biotecnolgica Del rea ambiental
Catalizador Se emplean tanto microorganismos, Por lo general, se emplea
clulas animales o vegetales o partes como biocatalizador a una
biolgicamente activas de ellas (enzimas gran asociacin de
generalmente), generalmente en estado microorganismos
puro, evitando la presencia de otros heterogneos cuyas
entes biolgicamente activos. Slo en poblaciones van cambiando
muy pocos casos se emplean conforme se desarrolla el
asociaciones de microorganismos bioproceso.
(cultivos mixtos) que no suelen sobrepasar
ms de 3 tipos distintos.
Sustratos Generalmente con un grado de pureza Con una extraordinaria
empleados elevado, de composicin constante, no variacin en su composicin
txicos. Poco margen de sustratos y con niveles de toxicidad
muy altos. Las composiciones
de los influentes llegan a
variar con el tiempo.
Condiciones de La gran mayora son sistemas aerbicos, Existen tanto procesos
aerobiosis con muy pocos casos de anaerobiosis. aerbicos como anaerbicos.
En los aerbicos, la velocidad de
transferencia de oxgeno es un factor
crtico
Condiciones de Generalmente aspticos No aspticos, sin embargo,
Asepsia deben existir medidas de
seguridad en el manejo de los
biorreactores para que el
personal no resulte afectado
microbiolgicamente.
Velocidades de Debe asegurarse que los valores ptimos Debido a los grandes
transferencia de de la temperatura, de la presin y del pH, volmenes empleados,
masa, calor y se mantengan constantes durante la pueden permitirse variaciones
momento biorreaccin ms amplias en sus valores.
alcanzadas
Tiempos de Generalmente comprendida en el intervalo Normalmente en das
duplicacin de de minutos hasta horas.
la biomasa
empleada
Dimensiones Varan de acuerdo a la clasificacin del Generalmente de grandes
producto a producir (de alto volumen de volmenes. Se han llegado a
produccin y bajo valor agregado o de construir unidades de hasta
bajo volumen de produccin y alto valor 1500 m3.
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agregado), desde 0.050 hasta 300 m .
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En el caso del tratamiento de aguas (por ejemplo), los materiales orgnicos solubles,
insolubles o en estado coloidal que contaminan las aguas a tratar, pueden ser utilizados
como fuentes de carbono por parte de los microorganismos, quienes los mineralizarn,
degradarn y transformarn en otros compuestos ms sencillos y de ms fcil
eliminacin (ej.: CO2, CH4) o bien los incorporarn al proceso de sntesis de nuevo
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material celular y, por lo tanto, concentrados en la biomasa misma. Esta ltima puede
entonces ser eliminada con ms facilidad por procesos de separacin slido-lquido,
resultando en una disminucin de la contaminacin del agua tratada.
Los valores a manejar de estas condiciones estn supeditados a la naturaleza propia del
biocatalizador. Los distintos agentes biolgicos (microorganismos o enzimas) tienen
sus requerimientos fsicos y qumicos para trabajar de manera ptima y realizar
eficientemente la transformacin de las materias primas a productos, por lo que ser
necesario establecer dichas condiciones en el biorreactor. Mientras que en los
bioprocesos de elaboracin de biolgicos resulta fundamental mantener constantes los
valores ptimos de pH, temperatura y presin mediante finos y precisos sistemas de
control, as como mantener la pureza del cultivo, en los procesos de tratamiento de
aguas, aire o suelos, los valores pueden llegar a variar sustancialmente, incluyendo las
poblaciones microbianas. Se sabe que en un proceso de tratamiento de aguas, las
poblaciones microbianas responsables de la degradacin de la materia orgnica,
fluctan sustancialmente de un biorreactor a otro e incluso en un mismo biorreactor.
A pesar de que existen varias formas de clasificar los modos de operacin de los
biorreactores, una de ellas y quiz la ms generalizada es la siguiente: i) en lote o
discontinuo, ii) semicontinuos, iii) continuos. Cada uno de estos modos o formas de
operacin tienen sus ventajas y desventajas cuando se relacionan a 2 aspectos
principales que son la productividad y la seguridad tanto de la operacin del biorreactor
como de la del producto final. A pesar de que los procesos continuos poseen mayor
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Los biorreactores estn equipados con distintos instrumentos que se utilizan para facilitar el
registro, anlisis y control de variables de operacin y de parmetros especficos, con fines
de maximizar la productividad y garantizar el xito de la biorreaccin. La instrumentacin,
definida como una ventana al proceso, tiene como objetivo mantener al mnimo la
diferencia entre el valor medido y un valor deseado. El control de un parmetro particular se
lleva a cabo a travs de un sistema que consta de un sensor (o electrodo), un medidor y un
controlador: el sensor es un dispositivo que transforma una magnitud de una propiedad que
se quiere medir, en otra que facilita su medida. El medidor recibe la medida del valor de la
propiedad que emite el sensor. El controlador compara dicha medida con un valor fijo. Del
resultado de la comparacin, el controlador toma una decisin enviando una seal
(generalmente elctrica) a algn dispositivo que ajustar el valor medido de la propiedad
hasta el valor predeterminado o de control (set point). La seal implica usualmente la
modificacin del estado de una vlvula, el encendido o apagado de una bomba dosificadora,
la modificacin de la velocidad de giro de un motor de algn equipo, etc. Si, por ejemplo, se
hace necesario el uso de una determinada fuerza para modificar el estado de una vlvula, se
requerir de un transductor y de un actuador. El transductor es un dispositivo que
convierte un tipo de energa en otro tipo de energa, mientras que los actuadores son
dispositivos capaces de generar una fuerza a partir de energa elctrica, gaseosa o lquida.
Los sensores pueden estar conectados directamente al biorreactor (en contacto directo con la
masa lquida o slida de fermentacin), en cuyo caso se dice que estn en lnea, si no estn
conectados directamente al biorreactor entonces se dice que estn fuera de lnea.
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Entre las propiedades ms comunes que se miden en un biorreactor estn las siguientes:
Temperatura
pH
Flujo de aire
Flujos de influentes y efluentes
Presin
Intensidad de agitacin
Volumen de operacin del biorreactor
Espuma
Concentracin de oxgeno disuelto
Concentracin celular o de lodos (biomasa)
Concentracin de sustratos (materia orgnica)
Concentracin de productos
Cuando se disea un biorreactor se deben tomar en cuenta ciertos factores, entre los que
destacan los siguientes:
Volumen
Capacidad de produccin
Material de construccin
Geometra del biorreactor
Tipo de biocatalizador (microorganismo, por ejemplo)
Variables de operacin (temperatura, presin, forma de mezclado, pH, etc.)
Modo de operacin
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Actualmente, los tratamientos biolgicos han cobrado un gran inters en los procesos de
depuracin de aguas residuales. Su utilizacin se fundamenta en el aprovechamiento de la
capacidad de los microorganismos para degradar, acumular, adsorber, precipitar o volatilizar
una gran variedad de contaminantes presentes en aguas o efluentes. Una etapa que juega un
importante rol en el desarrollo de estos procesos, es el diseo de los biorreactores o reactores
biolgicos.
A diferencia de lo que ocurre con equipos para procesos de transferencia de masa o de calor,
no existe una metodologa para el diseo de equipos, dentro de los cuales se desarrolle una
reaccin o conversin bioqumica, debido principalmente a que el diseo del biorreactor
estar regido por el sistema de reaccin especfico y el tipo de microorganismos que se
emplee.
Los factores que pueden afectar los resultados del proceso son:
Las caractersticas del efluente que se alimenta (porcentaje de slidos, presencia
de cloro, etc.).
La cintica de crecimiento bacteriano y de transformacin de los lodos.
La composicin de la poblacin bacteriana en el biorreactor.
La calidad de la materia orgnica que se aade al proceso.
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Dado que uno de los aspectos formativos de los alumnos de la carrera de Ingeniera
Ambiental se relaciona con el diseo, construccin, implementacin, operacin y
mantenimiento de biorreactores, en la presente prctica se proponen los siguientes objetivos.
2. OBJETIVOS
El alumno describir los diferentes tipos de biorreactores y sus partes, al igual que la forma
como se operan, controlan, esterilizan, cargan y descargan.
Los alumnos debern desarrollar la prctica, bajo la gua del profesor, conforme a los
siguientes puntos:
Especificacin terica de la configuracin geomtrica del biorreactor
Especificacin del volumen del biorreactor
Especificacin del material de construccin del biorreactor
Armado del biorreactor
Pruebas hidrulicas en el biorreactor para verificacin de fugas, establecimiento de
tiempos de mezcla, tiempos de retencin, etc.
Especificacin de las condiciones de la biorreaccin (Concentracin de la materia
orgnica en el influente, temperatura, flujo de aire, pH, nivel de oxigenacin, etc.)
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4, RESULTADOS Y DISCUSIN
Tipo de biorreactor.
Capacidad.
Caractersticas geomtricas (incluyendo el esquema del biorreactor).
Sistema de carga y descarga.
Sistema de agitacin del lquido de reaccin.
Patrones de flujo. Sistema de aireacin.
Sistemas de control (incluyendo el sistema de enfriamiento).
Mtodo o forma de esterilizacin de los medios de cultivo, reactor (incluyendo su
limpieza), aire, aditivos de fermentacin (cidos, lcalis, antiespumante, etctera).
Mtodos de Cultivo (lote, lote alimentado o cultivo continuo) que se lleva a cabo en
el biorreactor.
Produccin.
Dispositivo de toma de muestra y de inoculacin.
5. BIBLIOGRAFA
1. Bull, D. N., R. W. Thoma and T. E. Stinnett. 1983. Bioreactors for Submerged Culture.
Adv. Biotech. Process. 1: 1-30.
2. Schuegerl, K. 1982. New Biorreactors for Aerobic Processes. Int. Chem. Engng. 22: 591-
610.
3. Schuegerl, K. 1985. Nonmechanical Agitated Biorreactor Systems. En: Comprehensive
Biotechnology, 2: 99-118. Ed. M. Moo-Young, Pergamon Press.
5. Tapobrata Panda. 2011. Bioreactors. Analyses and Design. McGraw_Hill. New Delhi.
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PRCTICA 2
Agitacin, aireacin
y mezclado
1. INTRODUCCIN
En los biorreactores de tanque agitado, la agitacin se lleva a cabo mediante las dos formas
siguientes:
a).- Por el movimiento de dispositivos mecnicos tales como impulsores de tipo turbina o de
propelas u otros.
b).- Por el movimiento ascendente de burbujas de aire en el caso de aquellos procesos que
requieran suministro de oxgeno.
Por lo tanto, la intensidad de agitacin depende de la velocidad de movimiento de los
impulsores y de la velocidad de aireacin.
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Un mezclado insuficiente puede causar regiones en las que haya altas concentraciones de
inhibidores de crecimiento, deficiencia de oxgeno o de algn otro nutriente, gradientes
importantes de temperatura y pH, que se pueden reflejar en la obtencin de bajas
productividades y bajos rendimientos. Por ello, es importante estudiar el efecto de las
variables de operacin sobre el grado de mezclado que se pueda alcanzar en el biorreactor.
1.2 Columna
El elemento estructural a travs del cual tiene lugar la dispersin del gas se llama dispositivo
de dispersin primaria. El gas dispersado inicialmente puede ser redispersado, esto se lleva
a cabo por dispositivos de dispersin secundaria. En las columnas de burbujas de una etapa
y en las columnas de burbujas multietapa, el aire se introduce a travs de dispositivo de
dispersin primaria, tal como un tubo perforado, un plato perforado o un plato sinterizado,
en donde es dispersado finamente. Tambin, las burbujas de aire que aumentan de tamao
debido a la coalescencia pueden ser redispersadas al pasar a travs de dispositivos de
dispersin secundaria, tales como mallas o bandejas perforadas colocados a lo largo de la
columna. En los biorreactores de columna de burbujas multietapa, la dispersin de aire se
lleva a cabo predominantemente en los dispositivos de dispersin primaria
1.3 Airlift
Los biorreactores airlift tienen forma de columna o torre, en su interior tienen al menos dos
zonas, una de flujo ascendente y otra de flujo descendente. El movimiento del lquido se debe
a que en dichas zonas la densidad de la dispersin gas-lquido es diferente porque hay mayor
cantidad de aire en la zona de flujo ascendente que en la de flujo descendente. La diferencia
de las fracciones de gas retenido, es una medida de la diferencia de densidades entre las
dispersiones gas-lquido en dichas zonas, la cual es la fuerza motriz para la circulacin del
lquido en el biorreactor.
Debido al movimiento del lquido, las burbujas de gas en la zona de flujo ascendente subirn
ms rpido, disminuyendo la fraccin de gas retenido y la diferencia de presin hidrosttica.
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En la sesin de introduccin, los alumnos presentarn las ecuaciones para calcular la potencia
de agitacin sin aireacin, la potencia de agitacin con aireacin y la potencia de aireacin.
2. OBJETIVO
2.2 Columna
Determinar el tiempo de mezclado y la fraccin de gas retenido global en un biorreactor de
columna de burbujas, bajo diferentes condiciones de aireacin.
2.3 Airlift
Determinar el tiempo de circulacin, el tiempo de mezclado y las fracciones de gas retenido
global bajo diferentes condiciones de aireacin.
3.1 Biorreactores
Biorreactor de tanque agitado.
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Biorreactor de columna
Biorreactor airlift
3.2 Instrumentacion
Cronmetros.
Rotmetros.
Medidor de pH con adquisicin de datos en lnea.
Computadora y software para la adquisicin de datos en lnea.
3.3 Reactivos
Solucin de NaOH 6N.
Solucin de HCl 6N.
Soluciones reguladoras de pH, de 4 y 9.
3.4 Determinacin del tiempo de mezclado en los biorreactores de tanque agitado, columna
de burbujeo y airlift.
Por el mtodo de expansin, midiendo el volumen del lquido aireado y el volumen del
lquido sin airear.
4. DESARROLLO EXPERIMENTAL
Columna de burbujeo
a.- Velocidades de aireacin: 0.3, 0.6, 1.0, 1.3, 1.6 vvm.
Airlift
a.- Velocidades de aireacin: 0.3, 0.6, 1.0, 1.3, 1.6 vvm.
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5. RESULTADOS Y DISCUSIN
5.2 Columna
a.- Calcule el tiempo de mezclado.
b.- Construya grficas del tiempo de mezclado en funcin de la velocidad de aireacin
(expresada como vvm y vs).
c.- Calcule la potencia de aireacin.
d.- Obtenga las correlaciones matemticas de las relaciones del tiempo de mezclado con la
velocidad de aireacin (expresada como vvm y vs).
5.3 Airlift
a.- Elabore grficas de pH en funcin del tiempo.
b.- Calcule el tiempo de circulacin (diferencia de tiempo entre cada cresta valle) y el
tiempo de mezclado (tiempo de estabilizacin de la lectura de pH)
c.- Construya grficas del tiempo de circulacin en funcin de la velocidad de aireacin
(expresada como vvm y vs).
d.- Construya grficas del tiempo de mezclado en funcin de la velocidad de aireacin
(expresada como vvm y vs).
e.- Calcule la fraccin de gas retenido global.
f.- Calcule la potencia de aireacin.
g.- Obtenga las correlaciones matemticas de las relaciones del tiempo de mezclado con la
velocidad de aireacin (expresada como vvm y vs).
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6. BIBLIOGRAFA
1. Ahamed A., Vermette P. 2010. Effect of mechanical agitation on the production of
cellulases by Trichoderma reesei RUT-C30 in a draft-tube airlift bioreactor. Biochemical
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4. Hu-Ping L., Al-Dahhan M.H. 2008. Local characteristics of hydrodynamics in draft tube
airlift bioreactor. Chemical Engineering Science 63: 3057 3068.
5. Jin B., Lant P. 2004. Flow regime, hydrodynamics, floc size distribution and sludge
properties in activated sludge bubble column, air-lift and aerated stirred reactors.
Chemical Engineering Science. 59: 2379 2388.
6. Kilonzo P.M., Margaritis S., Bergougnou M.A., Yub J., Yeb Q. 2007. Effects of
geometrical design on hydrodynamic and mass transfer characteristics of a rectangular-
column airlift bioreactor. Biochemical Engineering Journal 34: 279288.
7. Schugerl, K. 1982. New bioreactors for aerobic processes. Int. Chem. Engng. 22. 4,
591-610.
8. Shariatia F.P., Bonakdarpour B., Mehrnia M.R. 2007. Hydrodynamics and oxygen
transfer behaviour of water in diesel microemulsions in a draft tube airlift bioreactor.
Chemical Engineering and Processing. 46: 334342.
9. Weiland, P. y V. Onken. 1981. Differences in the behaviour of bubble columns and airlift
loop reactors. Ger. Chem. Eng. 4 p. 174-181.
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PRCTICA 3
Determinacin de la
VTO (velocidad de transferencia de
oxgeno)
1. INTRODUCCIN
Las conversiones microbianas aerbicas son reacciones de oxidacin que requieren oxgeno
molecular disuelto. Una gran diferencia del oxgeno con respecto a otros nutrientes, es su
extremadamente baja solubilidad en agua. Consecuentemente, la transferencia de oxgeno
puede llegar a ser uno de los principales factores limitantes de la productividad celular y/o
de metabolitos, debido a la influencia de la concentracin del oxgeno disuelto sobre las
actividades metablicas de las clulas. La velocidad de transferencia de oxgeno de un
biorreactor depende de las condiciones de operacin (aireacin y/o agitacin) y de las
propiedades fsicas del lquido. La ecuacin que describe la velocidad de transferencia de
oxgeno (VTO) es:
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donde:
kLa : coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno (h-1).
C*: concentracin de oxgeno disuelto en equilibrio con la fase gaseosa (g/L).
C: concentracin de oxgeno disuelto (g/L).
El kLa es un parmetro que sirve para tener una idea de la rapidez con la que se transfiere
oxgeno del aire al lquido contenido en un biorreactor. Existen diferentes mtodos para
determinar la velocidad de transferencia de oxgeno. Dos de ellos son el mtodo del sulfito y
el mtodo dinmico.
El kLa es un parmetro que depende del grado de coalescencia del lquido. Por ejemplo, el
kLa empleando una solucin acuosa con una fuerza inica de I=0.4, es ms grande, por un
factor de seis, que el obtenido con agua. Esto es debido a un aumento del rea interfacial.
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2. OBJETIVO
3.1 Biorreactores
Biorreactor de tanque agitado.
Biorreactor de columna de burbujeo.
Biorreactor airlift.
Electrodo y medidor de oxgeno disuelto.
3.2 Reactivos
Sulfito de sodio
Sulfato de cobre pentahidratado
Solucin de Yodo 0.1 N.
Solucin de Tiosulfato de sodio 0.1 N.
Solucin de almidn soluble al 1%.
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2 Na2SO3 + O2 2 Na2SO4
dC
k L a (C * C ) (2)
dt
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C * C2
ln k L a t 2 t1 (3)
C * C1
Eliminacin
C * C2
de oxgeno ln
Inicio de C * C1
C
aireacin
Tiempo
Tiempo
(a) (b)
DESARROLLO EXPERIMENTAL
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4. RESULTADOS
a.- Elabore graficas del volumen de Tiosulfato de sodio (mL) gastado en las titulaciones vs
el tiempo (h).
b.- Calcule la velocidad de transferencia de oxgeno (VTO) de acuerdo a las ecuaciones (4).
c.- El cociente (V2-V1)/(t2-t1) es la pendiente de la grafica del volumen de Tiosulfato de sodio
(mL) gastado en la titulacin vs el tiempo (h).
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V2 V1 N A
VTO (4)
t 2 t1 V
Donde:
V1 y V2: volmenes de la solucin de Tiosulfato de sodio gastados (en mL), correspondientes
al tiempo t1 y t2 (en h), respectivamente.
N: normalidad de la solucin de Tiosulfato de sodio (meq/mL).
V: volumen de muestra (L).
A: equivalente estequiomtrico de oxgeno a Tiosulfato de sodio e igual a 0.25 mMoles
O2/meq de Tiosulfato de sodio.
a.- Tabule los valores de tiempo (s) y % de saturacin de oxgeno. Calcule el valor de C*
(g/L) usando la Ley de Henry; este valor es el 100% de saturacin. Calcule la C (g/L). Haga
una grafica de C (g/L) vs tiempo (h).
b.- Tabule los valores necesarios para que elabore una grafica que le permita obtener el kLa
(h-1)
c.- Calcule la VTO, el kLa y la fraccin de gas retenido global para cada condicin de
operacin.
d.- Obtenga la correlacin del kLa en funcin de la fraccin de gas retenido, velocidad de
agitacin, la velocidad de aireacin, la potencia de agitacin con aireacin y la potencia de
aireacin.
5. DISCUSIN
La discusin deber contener al menos la siguiente informacin:
a.- Comparacin de las diferentes condiciones de operacin y fracciones de gas retenido con
respecto a los valores del kLa.
b.- Comparacin de los valores de kLa que obtuvo para cada uno de los biorreactores
empleados y explique el porqu de las diferencias.
c.- Cul es el aspecto de la dispersin gas-lquido para cada condicin de operacin.
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d.- Explicacin de los valores de kLa de los lquidos coalescentes y de los lquidos no
coalescentes.
6. BIBLIOGRAFA
1. Vant Riet, K. 1991. Basic bioreactor design. Mercel Dekker, Inc. USA.
3. Aiba, S., Humphrey, A. E., Millis, N. F. 1973. Biochemical engineering. Academic Press.
6. Garcia-Ochoa F., Gomez E. 2009. Bioreactor scale-up and oxygen transfer rate in
microbial processes: An overview. Biotechnology Advances 27: 153176.
7. Martn M., Montes F.J., Galn M.A. 2010. Mass transfer rates from bubbles in stirred
tanks operating with viscous uids. Chemical Engineering Science 65: 38143824.
8. Martn M., Montes F.J., Galn M.A. 2008. Bubbling process in stirred tank reactors II:
Agitator effect on the mass transfer rates. Chemical Engineering Science 63: 3223 3234.
10. Kapic A., Heindel T.J. 2006. Correlating gasliquid mass transfer in a stirred-tank
reactor.
11. Trans IChemE, Part A, Chemical Engineering Research and Design. 84(A3): 239 245.
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PRCTICA 4
Prctica 4. Axenia y operacin axnica de biorreactores
1. INTRODUCCIN
Una condicin importante para iniciar una operacin axnica de biorreactores es que en ellos
exista una condicin asptica. La asepsia se considera como el conjunto de procedimientos
destinados a eliminar o retirar microorganismos de un biorreactor y de todas las tuberas
conectadas a l, con el propsito de asegurar que nicamente est presente el microorganismo
responsable de efectuar la bioconversin de materias primas a un producto especificado. En
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consecuencia, la asepsia del biorreactor y de las tuberas asociadas a l garantiza que los
procesos de bioconversin se lleven a cabo sin contaminaciones microbianas.
Para lograr la asepsia del biorreactor y de las tuberas asociadas a l, se deben proponer desde
la etapa de diseo, una geometra interna y arreglos de tuberas que eviten la acumulacin de
sustancias al llevar a cabo el vaciado de ellos. Las sustancias acumuladas pueden propiciar
una contaminacin. Tambin, la asepsia se facilita mediante una limpieza efectiva del
biorreactor y de las tuberas, lo que se alcanza al especificar materiales de construccin con
un acabado que evite el atrapamiento de partculas slidas con microorganismos. Las
partculas slidas eventualmente limitan la transferencia de calor, evitando el calentamiento
de los microorganismos a la temperatura de esterilizacin y por lo tanto, dejndolos viables
para generar una contaminacin.
Una vez lavado el biorreactor y las tuberas, el biorreactor se llena con medio de cultivo para
proceder a la esterilizacin. Despus de la esterilizacin el biorreactor debe operar
aspticamente. Para lograrlo, es necesario el buen funcionamiento del sello mecnico para
mantener una presin positiva que evite la entrada de microorganismos. Tambin se requiere
el ms alto aseguramiento posible de la integridad y eficiencia de remocin del filtro para la
esterilizacin del aire.
Existen diferentes mtodos para probar la integridad de filtros, uno de ellos es la prueba de
la intrusin del agua. Es una prueba prctica y validada que se puede considerar para probar
la integridad in situ de los filtros hidrofbicos para la esterilizacin del aire. Otra prueba es
la de mantenimiento de la presin.
2. OBJETIVO
3. MATERIALES Y MTODOS
3.1 Biorreactor
Biorreactor agitado de 14 L equipado con prefiltros y filtros hidrofbicos para la
esterilizacin de aire.
3.2 Instrumentacin
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Cronmetro.
Rotmetro.
Manmetro.
Termmetro.
3.3 Reactivos
Agua desionizada
Isopropanol
4. RESULTADOS
1. Elaborar el isomtrico de tuberas que muestre la instalacin del filtro.
2. Dibujar un diagrama de bloques de los procedimientos experimentales realizados en esta
prctica.
3. Realizar una grfica de la presin en funcin del tiempo.
5. DISCUSIN Y CONCLUSIONES
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6. BIBLIOGRAFA
1. Davila-Vazquez G., Len-Rodrguez A., Alatriste-Mondragn F., Elas Razo-Flores E.
2011. The buffer composition impacts the hydrogen production and the microbial
community composition in non-axenic cultures. Biomass and Bioenergy. 35: 3174-3181.
4. Virtanen V., Nyyssol A., Leisol M., Seiskari P. 2008. An aseptically operatable static
solid state bioreactor consisting of two units. Biochemical Engineering Journal 39: 594
597.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
PRCTICA 5
1. INTRODUCCIN
Un proceso en lote se caracteriza porque una vez que a un biorreactor se introduce agua
residual y un inoculo, no hay entrada ni salida de esos materiales hasta que el proceso de
transformacin biolgica termina. Un proceso es continuo cuando los flujos de entrada y
salida son iguales, mantenindose constante el volumen de operacin en el biorreactor. Un
proceso en lote alimentado es cuando hay alimentacin al biorreactor sin que haya una
corriente de salida, por lo que el volumen de lquido aumenta hasta que el proceso termina.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
iniciar la aclimatacin de los microorganismos al tipo de agua residual que tratarn; despus
el proceso permanece en operacin continua. Los procesos por lote alimentado nicamente
se usan en casos excepcionales; por ejemplo, cuando los contaminantes en alta concentracin
inhiben el metabolismo de los microorganismos.
Fase
No. de estacionaria
micro-
organismos
Fase log
Fase log de muerte
de crecimiento
Fase lag
tiempo
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
En esta prctica la cepa mencionada en el prrafo anterior, se usa como si fueran lodos
activados y el agua residual es un medio de cultivo formulado para conseguir los objetivos
de esta prctica.
2. OBJETIVOS
El alumno conocer y realizar un cultivo por lote con alimentacin constante y comparar
la tasa volumtrica de degradacin de materia orgnica y rendimiento con los de una
operacin por lote.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
3.1 Equipo
3.2 Materiales
3.3 Microorganismos
La tabla 1 muestra la composicin de las soluciones que se utilizarn como agua residual
en los diferentes tipos de cultivos.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
3.5 Mtodos
Entonces, para conocer la concentracin celular durante el cultivo, tome una muestra y
mdale la absorbancia, la cual interpolar en la curva tipo para obtener la concentracin
celular. Si la absorbancia de la muestra es mayor que la ms alta de la curva tipo, entonces
deber hacer diluciones de su muestra para que el valor de absorbancia est dentro del
intervalo de la curva tipo.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
Curva tipo de glucosa: Elaborar una curva tipo de glucosa con volmenes de 0.1 a 1 mL de
solucin patrn de 1.0 g/L de glucosa. El volumen de la solucin de glucosa se completa a 1
mL con agua destilada y se trata como si fuera una muestra.
4. DESARROLLO EXPERIMENTAL
En esta prctica se realizarn los siguientes procesos: a).- Un lote y al trmino de l inicia un
lote alimentado. B).- Un lote y al trmino de l inicia un continuo. El lote durar
aproximadamente 12 h, el lote alimentado 5 h y el continuo 36 h. Los cultivos se llevarn a
cabo en un biorreactor agitado mecnicamente. La figura 2 muestra el procedimiento para la
realizacin de los cultivos en operacin por lote y continua, mientras que la figura 3 muestra
el procedimiento para la realizacin de los cultivos en operacin por lote y lote alimentado.
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4.1 Actividades previas al 4.3 Preparacin de 300 mL de agua residual, llenado del
proceso en lote biorreactor y esterilizacin
4.7 Procesamiento de
4.2 Preparacin de 4.4 Inoculacin del muestras
inculo biorreactor
4.13 Limpieza de
4.10 Proceso continuo biorreactores
4.8 Actividades
previas al proceso 4.12 Procesamiento de
continuo 4.11 Toma de muestras muestras
4.21 Actividades
previas al proceso
lote alimentado 4.25 Procesamiento de
4.24 Toma de muestras muestras
Figura 3. Procedimiento experimental para cultivo en operacin por lote y lote alimentado.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
4.3 Preparacin de agua residual para el proceso en lote, llenado del biorreactor y
esterilizacin
Preparar 300 mL de agua residual para el proceso por lote y ajustar el pH a 6.5. El agua
residual se carga en el reactor, previamente preparado, y se esteriliza en el autoclave a 15
lb/in2, 15 min.
4.4 inoculacin
Una vez alcanzadas las condiciones de operacin dadas en el punto 4.5, el biorreactor se
inocula en condiciones aspticas con los dos matraces del inculo.
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Sobrenadante A tratamiento
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Una vez que termine el proceso por lote, iniciar el proceso continuo alimentando agua
residual para el proceso continuo, usando la bomba peristltica a un flujo tal que se consiga
la velocidad de dilucin mencionada en el prrafo anterior. En caso que no tenga dicha
velocidad de dilucin, use un flujo de 40 mL/h.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
4.16 Preparacin de agua residual para el proceso en lote, llenado del biorreactor y
esterilizacin
Preparar 900 mL de agua residual para el proceso por lote y ajustar el pH a 6.5. El agua
residual se carga en el reactor, previamente preparado, y se esteriliza en el autoclave a 15
lb/in2, 15 min.
4.17 inoculacin
Una vez alcanzadas las condiciones de operacin dadas en el punto 4.18, el biorreactor se
inocula en condiciones aspticas con los dos matraces del inculo.
4.22 Preparacin y esterilizacin de 0.8 L de agua residual para el proceso por lote
alimentado
Preparar 0.8 litros de agua residual para el proceso continuo. Con el agua residual
preparada, llenar recipientes que tengan mangueras y conexiones para la alimentacin del
proceso continuo, ajustar el pH a 6.5. Esterilizar a 15 lb/in2 durante 15 min. Conectar la
manguera de alimentacin al biorreactor.
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45
Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
5. RESULTADOS Y DISCUSIN
46
Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
6. BIBLIOGRAFA
1. Abdollahi J., Dubljevic S. 2012. Lipid production optimization and optimal control of
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
PRCTICA 6
1. INTRODUCCIN
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
La destruccin de microorganismos se puede llevar a cabo por varios mtodos, como son:
trmicos, mediante calor seco o hmedo; fsicos, mediante radiaciones o vibraciones snicas;
y qumicos.
dN
- kN (1)
dt
N
exp( kt ) (3)
No
E
k A exp (8)
RT
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E
t
No
TOTAL ln A exp dt (9)
N 0
RT
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(Hiperblica ) s
b
M
Calentamiento con vapor T T 1 be at
(intercambiador de calor)
H a
Ua
MC
( exponencial )
To TH
b
TH
Enfriamiento
T T 1 be at a
WC
1 e
Ua
WC
MC
(Intercambiador de calor)
To T
b
T
2. OBJETIVO
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3. DESARROLLO EXPERIMENTAL
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4. RESULTADOS Y DISCUSIN
NOMENCLATURA.
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Manual del Laboratorio de Ingeniera de Reactores y Biorreactores
5. BIBLIOGRAFA
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