1.

¿Cuál es la utilidad clínica del Examen en fresco y la coloración simple, que

limitaciones presentan estos métodos de observación microscópica?

• Examen en fresco: Su utilidad clínica es que se emplea para el estudio de

algunas características de los microorganismos, como por ejemplo movilidad,
aglutinación, yemación, entre otras.
® La limitación es que dura muy poco y no permite el aumento del
contraste.
• Coloración simple: Su utilidad clínica es que permite teñir el interior celular,
microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen
si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se
tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.
® La limitación es que colorea solamente una cosa, por lo general la pared
bacteriana.

2. Esquematice el procedimiento de preparación en fresco “Entre porta y cubre”.

3. Describa el procedimiento para la realización de la coloración diferencial de Gram.

• Tinción inicial: El extendido de células se tiñe con cristal violeta (colorante

primario). En este paso todas las células se tiñen de violeta
• Mordente: Se aplica lugol (Yodo en yoduro de potasio) que reacciona con el
cristal violeta y se forma el complejo cristal violeta- yoduro
• Decoloración: Se agrega un solvente no polar (alcohol acetona)
 • Tinción de contraste: Se aplica safranina de manera que las bacterias Gram
negativas que se han decolorado se tiñan de fucsia o rosa.

4. Además de la coloración diferencial de Gram, mencione otras 5 coloración

diferenciales y su respectiva utilidad en el laboratorio clínico.

• Tinción de Wright: teñir compuestos ácidos o básicos presentes en una

célula.
• Tinción diferencial método de Wirtz: para revelar estructuras bacterianas.
• Tinción diferencial Método acido resistente: observar bacterias acido
resistentes.
• Tinción simple: permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere
parcialmente los componentes proteicos.
• Tinción de Ziehl-Neelsen: técnica comúnmente usada en el diagnóstico
rutinario de tuberculosis

5. ComparelacomposicióndelaparedcelularentreBacteriasGramPositivasy Gram
Negativas.

• Las bacterias Gram positivas poseen una gruesa capa de peptidoglucano y

carecen de membrana externa.
• Las bacterias Gram negativas tienen una capa delgada de peptidoglucano y
poseen membrana externa.

6. Observeelsiguientevideo,en este link https://youtu.be/exQWLh53KR8?t=13 y

responda.

• ¿Cuál es la función del aceite de inmersión durante el proceso de observación

microscópica?

Se utiliza en las observaciones microscópicas, ya que otorga la propiedad de

concentrar la luz cuando esta pasa a través del objetivo de 100x del microscopio, lo
que aumenta su poder de resolución

• Describa la morfología celular (forma, agrupación y reacción al Gram) de las

bacterias Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis y
Shigella spp observado en el video.

Þ Staphylococcus aureus: son bacterias esféricas de casi 1 μm de diámetro

dispuestas en racimos irregulares, cocos Gram positivos dispuestos en pares,
tétradas y racimos.
Þ Escherichia coli: bacilos Gram negativos, no esporulante; consta de tres
elementos: la membrana citoplasmática, la membrana externa y, entre ambas,
un espacio periplásmico constituido por péptido-glucano.
 Þ Enterococcus faecalis: son cocos Gram positivos que se agrupan en pares o
cadenas cortas. Pertenecían al grupo D de la clasificación de Lancefield junto
con los no enterococos, que permanecen en el género Streptococcus.
Þ Shigella spp: bacterias con forma de bacilo perteneciente a la familia
Enterobacteriaceae. Son Gram negativas, inmóviles, no formadoras de
esporas

7. ¿Qué son los medios de cultivos bacterianos?

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se

multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar
diferentes especies bacterianas, para así poder identificarlas y realizar estudios
complementarios.

8. ¿Cuál es la utilidad en el laboratorio clínico de los medios de cultivo, enriquecidos,

selectivos y diferenciales?, brinde ejemplos de cada uno de ellos.

® Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de

un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias
inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se
quieren cultivar.

Ejemplos:

• Agar McConkey.
• Agar chocolate.
• Agar Sabouraud.

® Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser

medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos
específicos.
Ejemplos:

• Agar EMB
• Caldo tetrationato.
• Agar SS.

® Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos

derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen
ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos.

Ejemplos:

• Agar TSI: Triple sugar iron (hierro tres azúcares)

 • Caldo peptonado: para prueba de indol.
• Agar citrato.
• SLU: Sacarosa, lactosa y urea.
• Agar urea.
• Caldo MR-VP: para prueba rojo metilo y Voges Proskauer.

9. ¿Cuánto tiempo se requiere para el crecimiento bacteriano en un medio de cultivo?,

justifique su respuesta.

Los tiempos de generación varían ampliamente entre los microorganismos, algunos

crecen rápidamente y presentan tiempos de generación de unos 30 minutos y otros
tienen tiempos de generación de varias horas o incluso días. Cuando se inocula una
bacteria en un medio y ha transcurrido el tiempo de generación de este
microorganismo, se forman dos células, después de otra generación cuatro células
después de la tercera generación ocho células. Es decir, en cada generación sucesiva
se duplica la población. La relación que existe entre el número de células y las
generaciones de un cultivo creciendo en forma exponencial.

10. Además de los requerimientos nutricionales esenciales, ¿Que otras condiciones se

les debe brindar a las bacterias que han sido inoculadas en un medio de cultivo,
para asegurarnos de su crecimiento óptimo?

• Cada microorganismo tiene una temperatura óptima en la cual su crecimiento es

más rápido.
• Microorganismos halofílicos o halófilos estrictos requieren iones Na+ para
crecer.
• Para la mayoría de las bacterias el pH óptimo de crecimiento está entre 6,5 y
7,5.
• Es necesario que se encuentre agua disponible en el medio de cultivo para que
los microorganismos la puedan utilizar para su crecimiento.
 Bibliografía

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