Vicerrectoría Ciencias de la Salud

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Dirección Nacional de Tecnologías

Educativas en Salud

Manual de prácticas
Institucionales de la
Escuela de Ciencias de la
Salud
— 2018 —

1
Formato Institucional de Prácticas Explícitas de
Formación Clínica y Profesional

-----BIOTECNOLOGÍA-----

2
Presentación

Escuela de Ciencias de la Salud Lic. en QFBT

ASIGNATURA: BIOTECNOLOGIA

CLAVE: 80L735 CRÉDITOS 7.5 HORAS TOTALES 6

TOTALES:

TIPO DE SEMESTRAL CICLO: SEPTIMO HORAS CON 4

CICLO: SEMESTRE DOCENTE

ÁREA CURRICULAR: Formación Clínica y Profesional HORAS DE 2

PRÁCTICA

Observaciones: HORAS DE 2
APRENDIZAJE
INDEPENDIENTE

Aspectos Curriculares
OBJETIVO GENERAL DE LA ASIGNATURA:

El estudiante comprenderá la importancia de la aplicación de técnicas avanzadas en biología molecular

como un medio para la transformación industrial de productos biológicos con un alto valor agregado.
Comprenderá los alcances de la modificación genética de microorganismos, plantas, animales y
humanos con fines tecnológicos; así como sus limitaciones y consecuencias éticas y legales.

Contenido:
Extracción de DNA genómico de suelo .............................................................................. 4
Elaboración de células competentes de E. coli con CaCl2 ................................................ 7
Preparación de soluciones nutritivas utilizadas en biotecnología vegetal ........................... 9
Biotecnología Microbiana: Selección primaria de microorganismos productores de
enzimas ........................................................................................................................... 12
Biotecnología Microbiana: Selección de microrganismos productores de sideroforos ...... 15

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Práctica Número: 1 Duración (mins/horas): 3 sesiones de 2 h

Nombre de la Asignatura Biotecnología

Unidad de Contenido Introducción a la biotecnología

Nombre de la Práctica Extracción de DNA genómico de suelo

Competencia asociada a la Que el alumno sea capaz de:

práctica. Conocer los fundamentos básicos de extracción de DNA en suelo.
Dar opciones de extracción dependiendo el tipo de suelo que requiera analizar

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo

Micropipetas de 1, 20 y 200 microlitros
Puntas para micropipeta de 1, 20 y 200 microlitros Equipo de seguridad (mascarilla,
Tubos de plástico de 5 ml estériles googles, guantes, bata, pantalón y
Tubos de centrifuga de propileno de 15 ml zapato cerrado)
Tubos para microcentrifuga eppendorf de 2 ml
300 a 400 gramos de suelo (suelo agrícola) Investigación previa
Guantes

Equipo:
Microcentrífuga
Espectrofotómetro
Celdas de cuarzo
Cámara de electroforesis
Campana de extracción

Sustancias:
Buffer de extracción CTAB
Cloroformo octanol (24:1)
Fenol cloroformo (1:1)
Isopropanol frio
Cloruro de sodio 5 M pH 5.2
Etanol
Solución de lavado 1: 76% de etanol, 0.2 M de acetato de sodio
Solución de lavado 2: 76% de etanol, 10 mM de acetato de amonio
Buffer TE (10mM de Tris-Hcl, 1mM de Na-EDTA pH8)
Buffer de corrimiento TAE 50X ( Tris Base, Ácido acético glacial y Na-EDTA
pH8)
Buffer de carga (Tris, azul de bromofenol y glicerol)
RNAsa
Bromuro de etidio
Marcador de peso molecular

Actividades

Para el docente/ Facilitador: Para el Alumno(s):

4
BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1.- Ponerse guantes (esto con el fin de evitar
1. Presentación e ingreso al laboratorio contaminación y degradación del DNA que se va a extraer
2. Diagrama de bloques 2.- pesar de 300 a 400 mg de suelo en un tubo de
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o centrifuga de propileno de 15 ml
examen rápido 3.-Agregar 9 ml de CTAB precalentado (65 grados
Celsius) al suelo y mezclar suavemente por inversión 10
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) veces
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio 4.- Incubar de 60- 90 minutos a 65 grados con agitaciones
con 1 semana de anticipación sus materiales continuas
2. El docente verifica que el alumno ingresó su 5.- Sacar los tubos de la incubadora y esperar a que estos
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio estén a temperatura ambiente. Inmediatamente colocar
con mínimo 24 h de anticipación 4.5 ml de solución de cloroformo octanol (24:1) y mezclar
3. El docente verifica que los auxiliares de por 5 minutos.
laboratorio entreguen el material a los alumnos contra 6.- Centrifugar por 15 minutos a 3200 rpm (temperatura
vale de solicitud y credencial del responsable del equipo, ambiente)
posterior al briefing 7.- Transferir la fase acuosa a un nuevo tubo de 15 ml.
4. El docente verifica que el alumno revise que Agregar nuevamente 4.5 ml de cloroformo-octanol y
cuenta con el 100% de los materiales solicitados mezclar suavemente de 10 minutos.
5. El docente verifica que el alumno tenga el área 8.- Centrifugar por 10 minutos a 3200 rpm
de trabajo limpia y despejada 9.- Transferir la fase acuosa de nuevo un tubo de 15 ml
que contenga 30 microlitros de RNASA (10mg/ml)
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA precalentada (60 grados Celsius). Mezclar por inversión e
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar incubar 30 minutos a temperatura ambiente
la cronología. 10.- adicionar 10 ml de isopropanol y mezclar suavemente
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. 10 veces por inversión.
3. Resuelve dudas durante la ejecución. 11.- Remover el DNA precipitado con una varilla de vidrio
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo en forma de gancho o bien centrifugar para obtener una
durante la ejecución de la práctica pastilla de DNA.
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. 12.- Colocar el DNA en un microtubos eppendorf que
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO contenga previamente 1 ml de TE y dejar toda la noche
INSTRUCCIONAL. para que el DNA se Re suspenda en la solución de TE.
7. Llenado de bitácora electrónica: 13.- Añadir un volumen de fenol-cloroformo en relación
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 1:1 y centrifugar los tubos a 3200 rpm por 10 minutos.
14.- Transferir la fase acuosa a un tubo eppendorf nuevo
DEBRIEFING (10 MINUTOS) estéril de 2 ml. Agregar un volumen de solución de
1. Recapitula con los alumnos los hechos cloroformo-octanol y centrifugar 10 minutos a 3200 rpm.
ocurridos. 15.- Transferir la fase acuosa a un nuevo tubo eppendorf
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de de 2 ml
dudas. 16.- Precipitar el DNA adicionando 50 microlitros dela
3. Verifica si se cumplió el propósito de solución de Cloruro de sodio 5M y después 1 ml de etanol
aprendizaje. absoluto. Mezclar suavemente por inversión.
17.- Centrifugar a 12000 rpm y recuperar la pastilla de
DNA
18.-Anadir 2 ml de la solución de lavado 1 y dejar las
pastilla agitando suavemente por 20 minutos
19.- Centrifugar la pastillas 12000 rpm y decantar el
sobrenadamente
20.- Adicionar 2 ml de la solución de lavado 2 y enjuagar
la pastilla de DNA. Centrifugar con las mismas
condiciones del lavado 1 y decantar el sobrenadamente y
dejar secar la pastilla
21.- Adicionar 300 microlitros de TE hasta que se disuelva
la pastilla y almacenar el DNA a 4 grados centígrados
22.- Correr un gel de agarosa al 1% para verificar la
presencia del DNA

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 Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
1.- Descargar, leer y el artículo “PROTOCOLO PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN METAGENÓMICO BACTERIANO
DEL LANGOSTINO Macrobrachium carcinus L” de la liga: www.scielo.org.mx/pdf/tsa/v14n3/v14n3a15.pdf
La lectura realizada, será evaluada en la comprensión de los contenidos según rúbrica que se anexa.

2.- Explique
A. Lisis celular
B. Eliminación de proteínas
C. Precipitación y limpieza del ADN

3.- ¿Cuál es la diferencia en la extracción de DNA genómico de suelo y DNA de plantas?

Lectura en casa:
1. Después de la práctica:
2. ¿Qué aplicación ambiental tendría el ADN extraído de bacterias del suelo? 3. ¿Qué carga posee el ADN y a
que se debe?
3. ¿Para qué se usa el buffer de corrimiento TAE?
4. ¿Cuáles son las características del buffer de carga (componentes)?
5. ¿Cómo funciona el Bromuro de etidio?
6. ¿Existen otros colorantes además del Bromuro de etidio para hacer visible el ADN en el gel de agarosa?
7. ¿Por qué́ se utilizan celdas de cuarzo y no de plástico para leer ADN en el espectrofotómetro?
8. ¿Por qué́ se lee el ADN a una absorbancia de 280 para valorar su pureza? 10. ¿Qué es un marcador de
peso molecular?

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 10% Examen rápido sobre la investigación previa

Trabajo en el laboratorio 40%
Reporte de práctica 50% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada

BÁSICA:

- Perera J, Tormo A y García JL. 2002. Ingeniería Genética (Vol.1): Preparación, análisis, manipulación y clonaje de
ADN. Ed. Síntesis, S.A. Madrid, España.

- Hoisington D, Khairallah M. y González de León D. 1994. Laboratory Protocols CIMMYT Applied Molecular Genetics
Laboratory. Second edition. México, D.F.:CIMMYT

Manual de prácticas de biotecnología ambiental. UPIBI IPN.

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Práctica Número: 2 Duración (mins/horas): 2 sesiones de 2 h

Nombre de la Asignatura Biotecnología

Unidad de Contenido La utilización industrial de microbios recombinantes

Nombre de la Práctica Elaboración de células competentes de E. coli con CaCl2

Competencia asociada a la Que el alumno sea capaz de:

a) Capacidad de análisis y síntesis.
práctica.
b) Capacidad de organización y planificación.
c) Resolución de problemas.
d) Trabajo en equipo.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo

Micropipetas de 1, 20 y 200 microlitros
Puntas para micropipeta de 1, 20 y 200 microlitros Equipo de seguridad (mascarilla,
Tubos de plástico de 5 ml estériles googles, guantes, bata, pantalón y
Tubos de centrifuga de propileno de 15 ml zapato cerrado)
Tubos para microcentrifuga eppendorf de 2 ml
Gradillas para tubos Investigación previa
Guantes
Cepa de E.coli 5-alfa

Equipo:
Microcentrífuga
Cámara de electroforesis
Campana de extracción
Termobloques

Sustancias:
Medio LB (Luria-Bertani)
50 ml Cloruro de calcio 0.1 M

Actividades

Para el docente/ Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS)
1. Presentación e ingreso al laboratorio
2. Diagrama de bloques
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o
examen rápido
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS)
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio
con 1 semana de anticipación sus materiales
2. El docente verifica que el alumno ingresó su
solicitud de materiales con los auxiliares de
laboratorio con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de
laboratorio entreguen el material a los alumnos
contra vale de solicitud y credencial del
responsable del equipo, posterior al briefing
4. El docente verifica que el alumno revise que
1.- Incubar células de E.coli por 16 h en placas de agar LB.
2.- Transferir una colonia de E.coli a 5 ml de medio LB e
incubar a 37 grados centígrados con agitación a 200 rpm
durante toda la noche
3.- Transferir 0.5 ml de cultivo a 50 ml de medio LB e
incubar a 37 grados centígrados con agitación hasta que la
densidad óptica a 590 nm sea de 0.3 a 0.4 (esto es más o
menos entre 3 y 4 horas de incubación).
4.- Transferir 50 ml de células a un tubo de propileno frio y
estéril y mantenerlo pro 10 minutos a 4 grados centígrados.
5.- Centrifugar a 6000 rpm por 10 minutos
6.- Decantar el sobrenadante
7.- Resuspender el paquete celular en 25 ml de CaCl2 0.1
M estéril y frio.
8.- Colocar el tubo en hielo durante 10 minutos a 4 grados
centígrados.
9.- Centrifugar a 6000 rpm por 10 minutos a 4 grados

7
 cuenta con el 100% de los materiales solicitados
5. El docente verifica que el alumno tenga el área
de trabajo limpia y despejada
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar
la cronología.
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo
durante la ejecución de la práctica
5. Verifica la Entrega de material limpio y
completo.
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO
INSTRUCCIONAL.
7. Llenado de bitácora electrónica:
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3
centígrados
10.- Decantar el sobrenadante
11.- Con la ayuda de una pipeta pero con extremo cuidado
resuspender el paquete celular en 2 ml de CaCl2 0.1 M
estéril y frio.
12.- Las células competentes pueden ser usadas
inmediatamente o almacenadas por 24 a 48 h a 4 grados.
13.-Para periodos de almacenamiento más largos, guardar
en alícuotas de 100 μL en tubos estériles de 1.5 mL.
14.-Guardar la células competentes a -70oC. Las células se
mantienen viables por aproximadamente 3 meses.

DEBRIEFING (10 MINUTOS)

1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de
dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de
aprendizaje.

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
1. ¿Qué es una molécula de ADN recombinante?,
2. ¿Qué es un plásmido bacteriano?
3. Explica con qué finalidad se introduce una molécula de ADN recombinante fabricada “in vitro” dentro de un
organismo huésped
4. Indica los pasos necesarios para construir “in vitro” una molécula de ADN recombinante.
5. Referente a la Ingeniería Genética:
a. Explique qué es un ADN recombinante y cuál es la función de las enzimas de restricción
Después de la práctica:
1. Realizar el reporte de la práctica
2. Indicar ¿Para qué sirven las células competentes?, y
3. Mencione que otras sustancias pueden ser utilizadas para crear células competentes

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 10% Examen rápido sobre la investigación previa

Trabajo en el laboratorio 40%
Reporte de práctica 50% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada

BÁSICA:

Sambrook, J. y Russell, D. W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3a ed. Ed Cold Spring Harbor Laboratories.
Nueva York. USA 2001. 2344 págs.

Manual de prácticas de biotecnología ambiental UPIBI-IPN

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Práctica Número: 3 Duración (mins/horas): 2 sesión de 4 h

Nombre de la Asignatura Biotecnología

Unidad de Contenido Biotecnología vegetal

Nombre de la Práctica Preparación de soluciones nutritivas utilizadas en biotecnología

vegetal

Competencia asociada a la Que el alumno sea capaz de:

a) Capacidad de análisis y síntesis.
práctica.
b) Capacidad de organización y planificación.
c) Resolución de problemas.
d) Trabajo en equipo.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo

3 Frascos gerber estériles
Tubos de propileno de 15 ml estériles Equipo de seguridad (mascarilla,
Semillas de alfalfa googles, guantes, bata, pantalón y
zapato cerrado)

Investigación previa

Equipo:
Autoclave
Campana microbiológica

Sustancias:
Medio de Murashige Skoog
Phytagel o Agar bacteriológico 17 g/l
macronutrientes
• (NH4NO3) 1,650 mg/l
• (CaCl2 · 2H2O) 440 mg/l
• (MgSO4 · 7H2O) 370 mg/l
• (KH2PO4) 170 mg/l
• (KNO3) 1,900 mg/l
Micronutrientes
• H3BO3) 6.2 mg/l
• (CoCl2 · 6H2O) 0.025 mg/l
• (CuSO4 · 5H2O) 0.025 mg/l
• (FeSO4 · 7H2O) 27.8 mg/l
• (MnSO4 · 4H2O) 22.3 mg/l
• (KI) 0.83 mg/l
• (Na2MoO4 · 2H2O) 0.25 mg/l
• (ZnSO4·7H2O) 8.6 mg/l
• (NaFe-EDTA) constituido en 5 mL/L de una solución madre que contenga
5.57 g FeSO4.7H2O y 7.45 g Na2-EDTA por litro.

Actividades

Para el docente/ Facilitador: Para el Alumno(s):

9
BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) 1. Se preparan soluciones madre (Stock) de las
1. Presentación e ingreso al laboratorio soluciones de micronutrientes y macronutrientes
2. Diagrama de bloques con el fin de que el alumno se familiarice con la
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o practicidad a concentración 10X y se someterá al
examen rápido proceso de autoclave (121 grados/15 min 15 lb/).

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS)

1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio
con 1 semana de anticipación sus materiales
2. El docente verifica que el alumno ingresó su 2. Una vez teniendo la solución madre se prepararán
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio los medios de Murashige (soluciones nutritvas mas
con mínimo 24 h de anticipación el agar fundido) a concentraciones de 1X ,5X y
3. El docente verifica que los auxiliares de 10X y se colocarán 25 ml en los frascos de gerber
laboratorio entreguen el material a los alumnos contra y se colocara la tapa del frasco teniendo cuidado
vale de solicitud y credencial del responsable del de no sellarlo completamente. Se procederá a
equipo, posterior al briefing autoclavar el medio (121 grados/15 min 15 lb/). y
4. El docente verifica que el alumno revise que se dejara enfriar.
cuenta con el 100% de los materiales solicitados
5. El docente verifica que el alumno tenga el área
de trabajo limpia y despejada
Prueba de germinación de semillas
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar Se lavaran semillas de alfalfa con hipoclorito al 3 %
la cronología. sumergiéndolas por 2 minutos y lavándolas con agua
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. destilada.
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo Una vez desinfectadas las semillas se colocaran 5 semillas
durante la ejecución de la práctica de alfalfa en cada uno de los frascos que contengan las
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. diferentes concentraciones de sales y se dejaran incubar en
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO un espacio con luz por un periodo de una semana.
INSTRUCCIONAL.
7. Llenado de bitácora electrónica:
Se tomara en cuenta el % de germinación que se evalúa de
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 la siguiente manera:
DEBRIEFING (10 MINUTOS)
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. Numero de semillas inoculadas/Numero de semillas
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de germinadas x 100
dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje. Anotar el % de germinación de los tres frascos

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
1. Investigar que es la biotecnología vegetal
2. Que contienen las soluciones nutritivas para plantas

Después de la práctica:
En relación a la preparación de soluciones nutritivas, explique:
1. Importancia de la temperatura de la solución nutritiva

10
 2. Investigar el método universal de preparación de soluciones nutritivas
3. Cuáles sin las Unidades de concentración de la solución nutritiva, y por qué?
4. Cuál es la Calidad del agua para la solución nutritiva
Influencia del Contenido de sales disueltas en la preparación de la solución nutritiva
5. ¿Para qué sirven el medio de Murasghige skoog?

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 10% Examen rápido sobre la investigación previa

Trabajo en el laboratorio 40%
Reporte de práctica 50% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada

BÁSICA:

MURASHIGE, T. ; SKOOG, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures.
Physiol. Plant, 15: 473-497.

11
Práctica Número: 4 Duración (mins/horas): 5 sesiones de 2 h

Nombre de la Asignatura Biotecnología

Unidad de Contenido La utilización industrial de microbios recombinantes

Nombre de la Práctica Biotecnología Microbiana: Selección primaria de microorganismos

productores de enzimas
Competencia asociada a la Que el alumno sea capaz de:
a) Capacidad de análisis y síntesis.
práctica.
b) Capacidad de organización y planificación.
c) Resolución de problemas.
d) Trabajo en equipo.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material:
Micropipetas de 1, 20 y 200 microlitros
Puntas para micropipeta de 1, 20 y 200 microlitros
Tubos de plástico de 5 ml estériles
Varillas acodadas
Tubos de 15 ml con solución salina (0.85%NaCl)
Cajas Petri
Morteros y pistilos estériles
Sustratos (suelo erosionado, suelo agrícola, suelo de bosque)
Tween 80
Carboximetilcelulosa
Almidon
KH2PO4
Citrato de amonio dibásico
Extracto de levadura
Carbonato de sodio
Cloruro de sodio
Sulfato de magnesio
100 ml de agar papa dextrosa
100 ml de agar soya tripticaseina
100 ml de agar saboraud

Equipo:
Microcentrífuga
Cámara de electroforesis
Campana de extracción
Termobloques

Sustancias:
Frasco de 50 ml que contengan:
KOH al 40%
100 ml de medio rojo Congo para microorganismo celuloticos
100 ml de medio Castañeda con almidón para microrganismos amiloliticos
100 ml de medio Castañeda con Tween 80 para microrganismos productores
de esterasas

Actividades

12
Para el docente/ Favilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) Primera sesión:

1. Presentación e ingreso al laboratorio 1. Se prepararán los medios utilizando el siguiente
2. Diagrama de bloques protocolo:
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o 2. Para la observación actividades enzimáticas
examen rápido como amilasas y esterasas se utilizará el medio
de Castañeda (1956) el cual tiene la siguiente
PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS) composición (g L-1): citrato de amonio dibásico,
1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio 0.625; KH2PO4, 0.375; extracto de lavadura, 1.0;
con 1 semana de anticipación sus materiales Na2CO3, 0.375; NaCl, 0.250; MgSO4·7H2O,
2. El docente verifica que el alumno ingresó su 0.275; agar, 22.0. La cantidad del sustrato es 20
solicitud de materiales con los auxiliares de laboratorio g L-1 de almidón o 10 ml L-1 de tween 80. Una
con mínimo 24 h de anticipación vez mezclados los componentes se llevará a la
3. El docente verifica que los auxiliares de laboratorio autoclave a 121 grados centígrados a 15 libras
entreguen el material a los alumnos contra vale de por 15 minutos. Una vez estéril vaciar el medio
solicitud y credencial del responsable del equipo, en cajas Petri de plástico estériles.
posterior al briefing 3. En el caso de la degradación de almidón se
4. El docente verifica que el alumno revise que cuenta agregará una solución reveladora a base de
con el 100% de los materiales solicitados lugol. La prueba positiva se evidenciará por la
5. El docente verifica que el alumno tenga el área de formación de un halo translucido alrededor de la
trabajo limpia y despejada colonia. En el caso de la producción de
esterasas se observará un precipitado alrededor
de la colonia
EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA 4. Para la observación de microorganismos
1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a llevar la degradadores de celulosa se utilizara el medio
cronología. de Agar con rojo Congo que consta de la
2. Provee Feedback descriptivo durante la práctica. siguiente composición (g L-1): KH2PO4, 0.375;
3. Resuelve dudas durante la ejecución. rojo Congo 0.02; MgSO4·7H2O, 0.275; Gelatina
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo bacteriológica, 5; CMC, 5; Agar noble, 15. Una
durante la ejecución de la práctica vez mezclando los componentes se llevara a la
5. Verifica la Entrega de material limpio y completo. autoclave a 121 grados centígrados a 15 libras
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO por 15 minutos. Una vez estéril vaciar el medio
INSTRUCCIONAL. en cajas Petri de plástico estériles.
7. Llenado de bitácora electrónica: 5. La producción de celulasas se observará con la
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 aparición de un halo transparente alrededor de la
colonia
DEBRIEFING (10 MINUTOS)
1. Recapitula con los alumnos los hechos ocurridos. Segunda sesión
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución de
dudas. 6. Se prepararán diluciones seriadas con solución
3. Verifica si se cumplió el propósito de aprendizaje salina hasta la dilución 10-3 de los sustratos que
el profesor haya pedido y se sembrarán en los
medios de rojo congo y Castañeda con almidón y
tween 80 por estapulación con una varilla
acodada. Se incubarán a 28 grados centígrados
por una semana y se observarán las colonias
que den positivas a las distintas pruebas.

Tercera sesión

7. Se seleccionarán los microorganismos

(Bacterias, hongos y levaduras) y se cultivarán
en medios específicos para su desarrollo (Agar
papa dextrosa para hongos y agar soya
tripticaseina para bacterias). Las placas se
incubarán a 28 grados centígrados por 5 días

Cuarta sesión

8. Se identificarán los microorganismos utilizando

13
 claves taxonómicas:
Bacterias: morfología colonial y gram
Levaduras: morfología colonial, observación en
KOH al 40%
Hongos filamentosos: observación de estructuras
en KOH al 40%

9. De ser necesario puede utilizarse la técnica del

microcultivo

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
Respecto a la utilización industrial de microbios recombinantes
1-Defina recombinante
2-¿Cómo puede obtenerse un cultivo puro?
3-¿Cómo puedo obtener un microbio genéticamente estable?
4-¿Existen microrganismos que NO sean susceptibles de manipulación genética?. Justifique su respuesta.

Respecto a la utilización industrial de los microbios:

5.- ¿Cuál es el interés industrial de los microbios recombinantes?
6.- ¿Cuáles son los productos industriales obtenidos por microbios recombiantes?

Después de la práctica:
1. Realizar el reporte de la práctica
En el reporte::
2. Mencione cuáles son los fundamentos de los medios utilizados para la observación de amilasas, celulasas y
esterasas
3. Mencione que es selección primaria y secundaria de microrganismos de interés biotecnológico

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 10% Examen rápido sobre la investigación previa

Trabajo en el laboratorio 40%
Reporte de práctica 50% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada

BÁSICA:
Castañeda-Agullo, M., 1956. Studies on the biosynthesis of extracellular proteases by bacteria. I.
Serratiamarcescens, synthetic and gelatin media [online]. J. Gen. Physiol. 39:369–375 doi:
10.1085/jgp.39.3.369

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Práctica Número: 5 Duración (mins/horas): 4 sesiones de 2 h

Nombre de la Asignatura Biotecnología

Unidad de Contenido La utilización industrial de microbios recombinantes

Nombre de la Práctica Biotecnología Microbiana: Selección de microrganismos

Competencia asociada a la
práctica.
productores de sideroforos
Que el alumno sea capaz de:
a) Capacidad de análisis y síntesis.
b) Capacidad de organización y planificación.
c) Resolución de problemas.
d) Trabajo en equipo.

Materiales

De la Institución/Docente: Para el Alumno(s):

Material: Bitácora de trabajo

Micropipetas de 1, 20 y 200 microlitros
Puntas para micropipeta de 1, 20 y 200 microlitros Equipo de seguridad (mascarilla,
Tubos de plástico de 5 ml estériles googles, guantes, bata, pantalón y
Varillas acodadas zapato cerrado)
Tubos de 15 ml con solución salina (0.85%)
Cajas Petri con medio de cultivo Investigación previa
Suelo
Morteros y pistilos estériles

Equipo:

Sustancias:
Medio CAS (cromoazurol)

Actividades

Para el docente/ Facilitador: Para el Alumno(s):

BRIEFING INICIAL (20 MINUTOS) Primera sesión:

1. Presentación e ingreso al laboratorio Para la producción de sideróforos se utilizara el Medio
2. Diagrama de bloques CAS (Schwyn y Neilands, 1987) el cual utiliza de base
3. Socialización del propósito de Aprendizaje y/o el medio LB (Luria Bertani) y se le adicionará una
examen rápido solución de FeCl ·HCl y Cromoazurol con CTAB con el
3

PREPARACIÓN INICIAL (15 MINUTOS)

1. El docente solicita a los auxiliares de laboratorio
con 1 semana de anticipación sus materiales
2. El docente verifica que el alumno ingresó su
solicitud de materiales con los auxiliares
laboratorio con mínimo 24 h de anticipación
3. El docente verifica que los auxiliares de
laboratorio entreguen el material a los alumnos contra
vale de solicitud y credencial del responsable del
equipo, posterior al briefing
4. El docente verifica que el alumno revise que
cuenta con el 100% de los materiales solicitados
5. El docente verifica que el alumno tenga el área
fin de mantener el fierro no disponible en el medio.
La solución de cromoazurol se forma de la siguiente:
de
Segunda sesión
Se preparan diluciones seriadas en tubos de solución salina
hasta la dilución 10-3 de los sustratos que el profesor haya
pedido y se sembraran en el medio CAS por estapulación con
una varilla acodada. Se incubarán a 28 grados centígrados
por una semana y se observarán las colonias que den
positivas a las distintas pruebas.

15
 de trabajo limpia y despejada
Tercera sesión

EJECUCIÓN DE LA PRÁCTICA Se seleccionarán los microorganismos (Bacterias, hongos y

1. Lleva los tiempos y ayuda a los alumnos a levaduras) y se cultivarán en medios específicos para su
llevar la cronología. desarrollo (Agar papa dextrosa para hongos y agar soya
2. Provee Feedback descriptivo durante la tripticaseina para bacterias). Las placas se incubarán a 28
práctica. grados centígrados por 5 días
3. Resuelve dudas durante la ejecución.
4. Promueve el buen Comportamiento del equipo
durante la ejecución de la práctica Cuarta sesión
5. Verifica la Entrega de material limpio y Se identificarán los microorganismos utilizando claves
completo. taxonómicas:
6. Utiliza un Modelo de FACILITADOR NO
INSTRUCCIONAL. Bacterias: morfología colonial y gram
7. Llenado de bitácora electrónica: Levaduras: morfología colonial, Observación en KOH al 40%
https://goo.gl/forms/Ep16K5pZtsuutiRE3 Hongos filamentosos: observación de estructuras en KOH al
40%
DEBRIEFING (10 MINUTOS)
1. Recapitula con los alumnos los hechos De ser necesario puede utilizarse la técnica del microcultivo
ocurridos.
2. Promueve la reflexión, discusión y resolución
de dudas.
3. Verifica si se cumplió el propósito de
aprendizaje

Aprendizaje Auto-dirigido (Independiente):

Antes de la práctica:
1. ¿Qué son los sideroforos?
2. ¿Cómo se prepara el medio de CAS para la producción de sideroforos) para esta pregunta revisar el articulo
proporcionado en la bibliografía
3. ¿Cuál es la importancia de que los microrganismos produzcan sideroforos?
4. Mencione 10 aplicaciones industriales de los microorganismos recombinantes
5. ¿Cuáles son los tres tipos de sustancias producidas por las células de los microorganismos recombinantes?

Después de la práctica:
1, Realizar el reporte de la práctica

Método de Evaluación

De la Práctica Del Aprendizaje Independiente

Investigación previa 10% Examen rápido sobre la investigación previa

Trabajo en el laboratorio 40%
Reporte de práctica 50% (véase anexo 1)

Referencias y Bibliografía Recomendada

BÁSICA:
Schwyn, B., and Neilands, JB., 1987. Universal chemical assay for the detection and determination of
siderophores [online]. Anal. Biochem. 160:47–56. doi: 10.1016/0003-2697(87)90612-9

16
Elaboró Dr. Juan Ramos Garza Contacto: Ext. 08800

Cargo/Grado: Docente de asignatura Campus: Chapultepec

Revisó (validó): Jose D ‘Artagnan Villalba Fecha: Enero 2017

Magdaleno

Dr. Benjamín Gamiño Calvillo

17
 ANEXOS

ANEXO 1: RÚBRICA DE EVALUACIÓN

Parámetro Excelente Bueno Regular Deficiente

10 pts 8 pts 6 pts 0 pts
1.Formato tipo
artículo en Excelente Bueno Regular Deficiente
formato
electrónico -Cumple con el Hubo Hubo Hubo
5% formato que se incumplimiento en incumplimiento en incumplimiento en
anexa al final de uno de los tres dos de los tres los tres requisitos:
este manual requisitos: requisitos: -Cumple con el
-Se entregó en -Cumple con el -Cumple con el formato que se
tiempo formato que se formato que se anexa al final de
- Se entregó en anexa al final de anexa al final de este manual
formato este manual este manual -Se entregó en
electrónico -Se entregó en -Se entregó en tiempo
tiempo tiempo - Se entregó en
- Se entregó en - Se entregó en formato
formato formato electrónico
electrónico electrónico

2. Ortografía
5% Excelente Bueno Regular Deficiente
-No presenta Presenta entre 1 y Presenta entre 3 y El reporte incluye
errores de 3 errores 6 errores más de 6 errores
ortografía ortográficos ortográficos ortográficos
3. Resumen y
palabras clave Excelente Bueno Regular Deficiente
5% Hubo
-En el resumen incumplimiento en Hubo Hubo
describe con sus uno de los tres incumplimiento en incumplimiento en
propias palabras requisitos: dos de los tres los tres requisitos:
en máximo 1 -En el resumen requisitos: -En el resumen
cuartilla los describe con sus -En el resumen describe con sus
objetivos del propias palabras describe con sus propias palabras
trabajo, la en máximo 1 propias palabras en máximo 1
metodología cuartilla los en máximo 1 cuartilla los
general con los objetivos del cuartilla los objetivos del
resultados más trabajo, la objetivos del trabajo, la
relevantes. metodología trabajo, la metodología
-Redacta los general con los metodología general con los
verbos en pasado resultados más general con los resultados más
-Incluye las relevantes. resultados más relevantes.
palabras claves -Redacta los relevantes. -Redacta los
relacionadas a la verbos en pasado -Redacta los verbos en pasado
práctica -Incluye las verbos en pasado -Incluye las
palabras claves -Incluye las palabras claves
relacionadas a la palabras claves relacionadas a la
práctica relacionadas a la práctica
práctica
4. Introducción
15% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Realiza una -Realiza una -Realiza una - La revisión
revisión revisión revisión bibliográfica es
bibliográfica donde bibliográfica bibliográfica incongruente al
plantea completa donde incompleta tema y no se
ordenadamente el plantea - o no incluye las incluyen las

18
 tema de desordenadamente referencia referencias
investigación, su el tema de bibliográficas o bibliográficas o
importancia e investigación (no hemerográficas en hemerográficas en
implicaciones se cumple la regla el texto el texto
partiendo de lo de lo general a lo
general a lo particular),
particular. - o no incluye las
-Incluye las referencia
referencia bibliográficas o
bibliográficas o hemerográficas en
hemerográficas en el texto
el texto

5. Planteamiento El planteamiento El planteamiento El planteamiento No responde a la

del problema responde a la responde responde pregunta ¿qué voy
pregunta ¿qué voy parcialmente a la deficientemente a a investigar?
a investigar? pregunta ¿qué voy la pregunta ¿qué
a investigar? voy a investigar?
6. Justificación El planteamiento El planteamiento El planteamiento No responde a la
responde a la responde responde pregunta ¿por qué
pregunta ¿por qué parcialmente a la deficientemente a voy a investigar?
voy a investigar? pregunta ¿por qué la pregunta ¿por
voy a investigar? qué voy a
investigar?
7. Objetivos El planteamiento El planteamiento El planteamiento No responde a la
5% responde a la responde responde pregunta ¿para
pregunta ¿para parcialmente a la deficientemente a qué voy a
qué voy a pregunta ¿para la pregunta ¿para investigar?
investigar? qué voy a qué voy a
investigar? investigar?
8. Hipótesis La hipótesis La hipótesis La hipótesis La hipótesis no
constituye un constituye un constituye un constituye un
juicio de juicio de juicio de juicio de
posibilidad que posibilidad que posibilidad que posibilidad que
expresa la relación expresa la relación expresa la relación exprese la relación
causa efecto (si vs causa efecto (si vs causa efecto (si vs causa efecto (si vs
entonces) que se entonces) que se entonces) que se entonces) que se
pretende verificar. pretende verificar pretende verificar pretende verificar.
parcialmente de manera
correcto. deficiente.
9. Método
5% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Describe el -Describe el -No describe el
procedimiento -Describe el procedimiento procedimiento
experimental de procedimiento experimental de experimental
forma que experimental de forma que
responde a la forma que responde de forma
pregunta ¿Cómo lo responde deficiente a la
voy a investigar? parcialmente pregunta ¿Cómo lo
correcto a la voy a investigar?
pregunta ¿Cómo lo
voy a investigar?

10.Resultados
15% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Recopila y ordena -Recopila y ordena -Recopila y ordena -No presenta los
los datos los datos los datos resultados
obtenidos obtenidos obtenidos obtenidos
presentándolos en presentándolos en presentándolos en
párrafos, cuadros párrafos, cuadros párrafos, cuadros
o gráficos o gráficos pero no o gráficos pero no

19
 claramente los identifica los identifica
identificados. claramente claramente
-Incluye las -O no incluye las -No incluye las
fórmulas y fórmulas y fórmulas y
sustituciones sustituciones sustituciones
empleadas empleadas empleadas
11. Análisis de
resultados Excelente Bueno Regular Deficiente
20%
-Interpreta y -Interpreta y - Interpreta y -No Interpreta y
analiza los analiza los analiza los no analiza los
resultados resultados resultados resultados
obtenidos obtenidos pero no obtenidos pero no obtenidos
comparativamente comparativamente comparativamente -Ni tampoco indica
con la bibliografía con la bibliografía con la bibliografía las aplicaciones
consultada -Indica consultada consultada teóricas
las aplicaciones -O no indica las -No indica las
teóricas aplicaciones aplicaciones
teóricas teóricas
12.Conclusiones
20% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Redacta con sus -Redacta con sus -No redacta con -No redacta las
propias palabras si propias palabras si sus propias conclusiones o las
se cumplen o no se cumplen o no palabras si se copia de textos
los objetivos en los objetivos pero cumplen o no los
base al análisis de no considera objetivos
los resultados completamente el -o No considera el
análisis de los análisis de los
resultados resultados
13.Referencias
5% Excelente Bueno Regular Deficiente
-Presenta por lo -Presenta menos -Presenta menos -No presenta
menos 3 de 3 bibliografías de 3 bibliografía bibliografía
bibliografías consultadas consultada, sin
consultadas, en - o no las presenta orden alfabético ,
orden alfabético , en orden alfabético - o no sigue el
siguiendo el - o no sigue el formato APA
formato APA formato APA

20
ANEXO 2: REPORTE DE PRÁCTICA

21
22
23
24
25
26
27
28
ANEXO 3: SOLICTUD DE REACTIVOS Y MATERIALES

UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MEXICO

Región Ciudad de México
Campus:
Hoja de solicitud de reactivos y materiales de laboratorio
Titulo de la práctica
Fecha de la práctica
Fecha de entrega de solicitud
Numero de equipos Materia
Semestre Carrera
Horario Laboratorio
Profesor
REACTIVOS
Cantidad
Descripción del Reactivo Observaciones
por grupo

29
ANEXO 4: RÚBRICA DE COMPRENSIÓN LECTORA
Identifica
4 Reconoce el contenido del texto, a través de los personajes principales y secundarios, escenario y hechos.
3 Reconoce el contenido del texto, a través de los personajes principales y escenarios
4 Reconoce todos los personajes principales y hechos del texto
1 Tiene dificultades para reconocer el contenido del texto

Interpreta
4 Atribuye significación a hechos, espacios y personajes principales y secundarios en función a contextos
externos
3 Atribuye significación a hechos y espacios y en función a contextos externos que presenta el texto
2 Atribuye significación de lo que representan los personajes en el texto
1 Atribuye con dificultad la totalidad del significado del texto propuesto.

Resume
4 Expresa y sintetiza lo importante y resaltante del texto para poderlo trasmitir
3 Expresa las ideas principales del texto y lo trasmite a través de un cuadro sinóptico utilizando sus propias
palabras
2 Expresa fragmentos del texto copiándolos literalmente.
1 Muestra dificultad para sintetizar el texto dado y expresarlo con sus palabras.

Análisis
4 Disgrega el contenido del texto explicando la relación entre sus componentes y sucesos para emitir un
juicio propio.
3 Disgrega el contenido de un texto explicando la relación entre sus componentes y emite un juicio propio.
2 Disgrega el contenido de un texto explicando la relación entre sus componentes sin emitir juicio propio.
1 Disgrega con dificultad el contenido del texto, así como la relación de componentes entre sí y no emite
juicio propio.

Infiere
4 Emite conclusiones que no están expresados literalmente en el contenido del texto.
3 Emite conclusiones.
2 Emite conclusiones del texto copiándolas literalmente del texto propuesto
1 Emite con dificultad las conclusiones del texto propuesto copiando literalmente partes del texto propuesto.

30