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Infiltración:
La infiltración es el proceso en el que las muestras aclareadas son impregnadas con un medio
de inclusión, generalmente parafina fundida. Esta etapa permite que los tejidos se endurezcan
y se preparen para el corte en secciones histológicas delgadas.
• Importancia de la Infiltración: La infiltración asegura que los tejidos sean lo
suficientemente duros como para soportar el corte en secciones delgadas. También
ayuda a preservar la estructura tisular y a facilitar la manipulación de las muestras
durante el corte.
• Proceso de Infiltración: Las muestras aclareadas se sumergen en parafina fundida. La
parafina penetra en los espacios intercelulares y reemplaza gradualmente el medio
aclarante. Una vez que las muestras están completamente infiltradas, se enfrían y
solidifican en bloques de parafina, lo que permite el corte en secciones delgadas en el
microtomo.
Insumos
Xilol:
El xileno es un solvente orgánico aromático
transparente, incoloro e inflamable que se utiliza
ampliamente en laboratorios y en diversas
aplicaciones industriales y médicas. En el contexto del
procesamiento de muestras en el laboratorio de
anatomía patológica, el xileno se utiliza como agente
de aclaramiento en el paso de aclaramiento, que es
parte del proceso de preparación de tejidos para
análisis microscópico.
Propiedades del Xileno:
1. Alta Solubilidad: El xileno es altamente soluble tanto en alcohol como en parafina, lo
que lo hace un agente ideal para eliminar el alcohol de las muestras deshidratadas y
permitir la penetración efectiva de la parafina durante la infiltración.
2. Compatibilidad con Parafina: El xileno es compatible con la parafina utilizada en el
proceso de infiltración. Esto significa que no interfiere con la capacidad de la parafina
para impregnar los tejidos, lo que es esencial para lograr una buena preservación de
la estructura tisular.
3. Baja Viscosidad: El xileno tiene una baja viscosidad, lo que facilita la penetración en
los tejidos y la eliminación del alcohol.
4. Buena Transparencia: El xileno tiene propiedades aclarantes que ayudan a mejorar la
transparencia de los tejidos. Esta propiedad es especialmente útil para facilitar la
observación microscópica y la tinción posterior de las muestras.
Utilización como Aclarante:
En el proceso de aclaramiento, las muestras tisulares deshidratadas se sumergen en xileno
después de pasar por etapas de deshidratación. El xileno reemplaza gradualmente el alcohol
en los tejidos, permitiendo que las muestras se aclaren y se vuelvan más transparentes. Esto
es fundamental para que las muestras sean adecuadas para el corte en secciones histológicas
delgadas y para la observación microscópica detallada.
El uso del xileno como aclarante ayuda a eliminar los residuos de alcohol de las muestras, lo
que evitaría interferencias en etapas posteriores del procesamiento. Además, la transparencia
mejorada facilita la penetración uniforme del medio de inclusión, como la parafina, lo que
resulta en secciones histológicas de alta calidad y morfología preservada.
Parafina:
La parafina es una sustancia cerosa y translúcida que
se utiliza en el procesamiento de muestras
histológicas en el laboratorio de anatomía
patológica. En este contexto, la parafina se
utiliza como un medio de inclusión o infiltrante
para preparar tejidos biológicos para el corte en
secciones histológicas delgadas, que luego se
tiñen y se analizan bajo el microscopio.
Propiedades de la Parafina:
La parafina utilizada en el laboratorio es una forma refinada de cera de petróleo, que se
caracteriza por ser sólida a temperatura ambiente y tener un punto de fusión relativamente
bajo. Esto significa que la parafina puede fundirse fácilmente y penetrar en los espacios
intercelulares de los tejidos, permitiendo que se impregnen de manera uniforme. La parafina
utilizada en histología se adapta específicamente para ser compatible con los tejidos
biológicos y para fundirse a una temperatura que no dañe las estructuras celulares.
Función como Infiltrante:
La función principal de la parafina como infiltrante es preparar los tejidos biológicos para el
corte en secciones histológicas delgadas. Aquí se describen las etapas principales de la
infiltración y su importancia:
1. Penetración Uniforme: Después del proceso de aclaramiento en el que las muestras
son tratadas con agentes aclarantes como el xileno, las muestras se sumergen en
parafina fundida. La parafina penetra en los espacios intercelulares y reemplaza el
agente aclarante, asegurando una infiltración uniforme en todo el tejido.
2. Endurecimiento y Soporte: A medida que la parafina se enfría y solidifica, los tejidos
se vuelven más rígidos y resistentes. Esto permite que las muestras se corten en
secciones muy delgadas (generalmente de 4 a 7 micrómetros de grosor) en un
instrumento llamado microtomo. Las secciones histológicas delgadas son esenciales
para el análisis microscópico detallado.
3. Preservación de la Morfología: La parafina actúa como soporte para los tejidos
durante el corte, lo que ayuda a preservar la morfología y la estructura tisular. Sin una
adecuada infiltración con parafina, las muestras serían difíciles de manipular y
secciones histológicas de calidad serían difíciles de obtener.
4. Permitir la Tinción: Las secciones histológicas cortadas de manera adecuada pueden
ser teñidas con colorantes específicos para resaltar diferentes componentes celulares
y tisulares. Esto permite a los patólogos y científicos observar y analizar las muestras
en busca de anomalías, cambios patológicos o características específicas.
PROCEDIMIENTO
➢ Fijación
➢ Deshidratación
Debido a que la cera de parafina derretida es hidrófoba (inmiscible con agua), la mayor parte
del agua de una muestra debe eliminarse antes de que pueda infiltrarse con parafina. Este
proceso lo realizamos sumergiendo las muestras en una serie de soluciones de etanol
(alcohol) de concentración creciente hasta que se alcanza alcohol puro sin agua. El etanol es
miscible con agua en todas las proporciones, para que el agua de la muestra sea sustituida
progresivamente por el alcohol. Se utiliza una serie de concentraciones crecientes de alcohol
para evitar un deterioro excesivo del tejido.
Los tiempos que vamos a realizar son los siguientes:
1. Etanol al 70 % 20 min
2. Etanol al 80 % 20 min
3. Etanol al 90 % 20 min
4. Etanol al 96% 20 min
5. Etanol al 96 % 20 min
6. Etanol absoluto 20min
➢ Aclaramiento
Este disolvente desplazará el etanol en el tejido y, a continuación, este, a su vez, será
desplazado por cera de parafina fundida. Esta etapa del proceso se denomina
“aclarado” y el reactivo utilizado se denomina “agente aclarante”. Se acuñó el término
"aclaramiento" porque muchos (si bien no todos) agentes aclarantes dan claridad o
transparencia óptica al tejido debido a su índice de refracción relativamente elevado.
1. xileno 45 min
➢ Infiltración de parafina
El tejido ahora puede infiltrarse con una parafina histológica adecuada. Una parafina
típica es líquida a 60 °C y puede infiltrarse en el tejido a esta temperatura y luego
dejarse enfriar hasta 20 °C, temperatura a la que se solidifica hasta adoptar una
consistencia que permite cortar las secciones uniformemente. Debemos observar que
estas formulaciones de parafina tienen propiedades físicas muy particulares que
permiten que los tejidos infiltrados con la parafina se seccionen a un grosor de 2 μm o
menos para formar cintas a medida que las secciones se cortan en el micrótomo y para
conservar suficiente elasticidad para aplanarse completamente durante la flotación en
un baño de agua caliente.
1. parafina 45 min
RESULTADOS
Una vez hecho el procedimiento que cada grupo realizo, desde el proceso del alcohol, y como
grupo 3 nos toco hacer el alcohol de 90% , echando un porcentaje de 100 ml de agua destilada
al alcohol de 900ml para asi completar el litro para poder usar en nuestras muestras, también
ya se habia realizado el proceso de Fijación en la clase pasada por medio del Formol, ya que
este detiene el proceso metabólico de las células, e hizimos de manera artesanal por la poca
cantidad de muestras y no contar con el Procesador de Tejidos Automatizado se realizo la
Deshidratación que fue en alcohol de 70, 80, 90, 96 ( 2 veces ), alcohol absoluto, cada grupo
por 20’ , luego el Aclaramiento con el Xilol, pero en este caso se reemplazo este por el Neoclar
que se dio un aprox de 1 hora, donde los casset deben estar forrados con gasa y se mueve
suavemente tambaleando y tener cuidado con nuestras manos, por eso usar doble guantes y
gafas, luego sacar y que no quede nada de humedad, por último la Infiltración que se dio en
1 hora, dividiéndose los 4 grupos en 25’, que es una sustancia artificial cerosa, donde se puso
la Parafina a una temperatura de 60° removiendo suavemente, último se colo y se abrio
nuestras muestras y se llevo el representante cada muestra, salió como resultado:
Que este proceso nos sirve para alcanzar dureza a los tejidos para así obtener cortes uniformes
que se darán en la siguiente clase que se tenga, es importante seguir cada paso con mucho
cuidado, ya que son sustancias toxicas para nuestro organismo y no causarnos daño alguno.
CONCLUSIONES
• Número de historia clínica y resumen de la historia clínica con los datos analíticos más
relevantes como tratamientos que puedan modificar la imagen morfológica (radioterapia,
quimioterapia, antecedentes profesionales, etc)
• Tipo de muestra ñ
• Lateralidad y localización
• Líquidos de cavidades
Bernal Morera, Kelly Marcela y Yepes Henao, Vivian Marcela. Manual de procedimientos en
el laboratorio de técnica histológica: Procesamiento de Tejidos, Inclusión y Corte. [25 de
noviembre 2021] URL disponible en: https://repositorio.fucsalud.edu.co/handle/001/1942
Juan Fernando C., María Helena C., Ananías García, Lilian Chuaire, Cesar Payán, Victoria
Villegasy Calorina Sánchez. Manual de Histología. [2009]
URL disponible en:
https://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=ca2kuO4iwM0C&oi=fnd&pg=PA7&dq=histolog
icos+Procesamiento+de+Tejidos&ots=or23Ei742Z&sig=z75YyVX11PaoTzDLUa6wMzTbO0k#v
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ANEXOS
INTRODUCCIÓN
Los resultados nos dan que después de haber hecho la anterior práctica, ahora
se dará un poco más de tiempo a la parafina para que esta ingrese a los tejidos
y sea el tejido bien duro al momento que se haga el corte.
En esta práctica se realizo el procedimiento del bloque, donde tuvimos nuestras
2 muestras tanto de tejidos musculares como del hígado, este ya es el último
procedimiento para que fije bien las muestras y que ya se realice el corte, ya que
se formo el molde con parafina y las muestras, colocándole encima en la parte
final el casset y así retirar como último paso.
MATERIALES
Bernal Morera, Kelly Marcela y Yepes Henao, Vivian Marcela. Manual de procedimientos en el
laboratorio de técnica histológica: Procesamiento de Tejidos, Inclusión y Corte. [25 de noviembre
2021] https://repositorio.fucsalud.edu.co/handle/001/1942
Juan Fernando C., María Helena C., Ananías García, Lilian Chuaire, Cesar Payán, Victoria Villegasy
Calorina Sánchez. Manual de Histología. [2009]
https://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=ca2kuO4iwM0C&oi=fnd&pg=PA7&dq=histologicos+Pr
ocesamiento+de+Tejidos&ots=or23Ei742Z&sig=z75YyVX11PaoTzDLUa6wMzTbO0k#v=onepage&q=hi
stologicos%20Procesamiento%20de%20Tejidos&f=false
Mónica Gabriela Guerra Jordán, Determinación histológica del tejido cardíaco en la confirmación
diagnóstica post mortem del infarto agudo de miocardio. [20-07-2022]-
http://dspace.unach.edu.ec/bitstream/51000/9430/1/Guerra%20Jord%c3%a1n%2c%20M%282022%
29%20Determinaci%c3%b3n%20histol%c3%b3gica%20del%20tejido%20cardiaco%20en%20la%20co
nfirmaci%c3%b3n%20diagn%c3%b3stica%20post%20mortem%20del%20infarto%20agudo%20de%2
0miocardio%28Tesis%20de%20pregrado%29Universidad%20Nacional%20de%20Chimborazo%2c%20
Riobamba%2c%20Ecuador.pdf