FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUÍMICAS - UMSS

LABORATORIO DE HABILIDADES

Guía Práctica:
HEMOGRAMA
Elaborado por: Aux. Quiñones Cossio Noelia
Aux. Solano Torrico Ana Valeria
Aux. Vargas Arce Claudia Ana
Aux. Zeballos López Andrea Denisse

INTRODUCCIÓN

La hematología es la rama médica que se dedica al estudio de la sangre

(células sanguíneas y demás componentes) y sus trastornos o alteraciones.

La sangre es un sistema complejo (sistema sanguíneo), ya que cumple diversas

funciones.

Básicamente el órgano principal es la médula ósea donde se producen las

células de la sangre , las cuales maduran en la médula ósea y de allí salen al
torrente sanguíneo. Las células de la sangre fundamentales son los glóbulos
rojos que contienen la hemoglobina que transporta el oxígeno, los glóbulos
blancos encargados de la inmunidad para la defensa contra las infecciones y
las plaquetas (que realmente son fragmentos de células) y entre las diferentes
funciones que tienen , la fundamental es el inicio de la coagulación.

El hemograma y las pruebas básicas de hemostasia son estudios sencillos,

aportan una gran cantidad de información sobre el estado de salud del
paciente. Los actuales analizadores automáticos permiten determinar con un
grado elevado de fiabilidad, rapidez y un bajo coste los principales
parámetros hematológicos en sangre periférica, aportando una valiosa
información acerca de las tres series hemáticas. Por esta razón este análisis
forma parte del área de bioquímica y farmacia, por lo que es necesario que
los estudiantes aprendan el procedimiento de la técnica.
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OBJETIVOS

● Desarrollar destreza en los procedimientos propios de un hemograma.

● Identificar el flujograma de actividades al realizar los análisis que
conforman un hemograma.
● identificar los distintos tipos celulares sanguíneos.
● Realizar interpretaciones intuitivas a partir de los resultados obtenidos.

MARCO TEÓRICO

El hemograma se define como un examen de laboratorio realizado para

evaluar el estado de salud general del paciente.

Entre las numerosas enfermedades de que se ocupa la hematología cabe

destacar las siguientes:

● Enfermedades oncológicas:
- Leucemia.
- Linfomas.
- Mielomas.
● Trombosis.
● Enfermedades hemorrágicas, como la hemofilia.
● Síndrome mielodisplásico.
● Anemia.
● Neutropenia.
● Trombocitopenia.

Se debe realizar utilizando una muestra de sangre obtenida por punción

venosa, punción capilar en un dedo o en el talón en los recién nacidos. Para la
realización de este examen no es necesario ayuno previo, por lo que se puede
realizar en cualquier momento del día

Se trata de un examen relativamente simple que nos ayudará en la evaluación

diagnóstica. Este examen entrega datos sobre hematocrito (Hto),
concentración de la hemoglobina (Hb), concentración de hemoglobina
corpuscular media (CHCM), volumen corpuscular medio (VCM), recuento de
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eritrocitos, leucocitos y plaquetas, velocidad de sedimentación eritrocitaria

(VES) y diferencial leucocitario.

En la actualidad se cita toda una generación de hemogramas, que incluye

desde los más simples, constituidos por unos pocos parámetros obtenidos de
forma manual, hasta los más complejos y sofisticados, formados por decenas
de parámetros obtenidos de forma automatizada

De acuerdo con la metodología (manual o automatizada) que se utilice en la

realización de la biometría hemática y el número de parámetros que la
conforman, la Sociedad Colombiana de Patología Clínica define seis tipos de
hemogramas que se reconocen por el Colegio Americano de Patólogos y la
Asociación Médica Americana.

En esta práctica nos enfocaremos en la de tipo III, que compre las siguientes
pruebas:

● Hematocrito (Hto)
● Concentración de la hemoglobina (Hb)

Niveles de hemoglobina por debajo de lo normal, puede deberse a

anemia con diferentes causas, debido a insuficiencia de hierro,
insuficiencia de vitamina B, insuficiencia de folato, sangrado, leucemia,
enfermedad renal, enfermedad hepática, entre otros.

Niveles de hemoglobina por encima de los valores normales, puede

deberse a Policitemia vera, enfermedad pulmonar, deshidratación, entre
otros.

● Indices hematimetricos:

Los índices hematimétricos se definen como parámetros que relacionan

los valores de hematocrito, hemoglobina y el número de eritrocitos.

- Volumen Corpuscular Medio (VCM): Es una expresión del volumen

promedio de los eritrocitos. Los valores de referencia son 82 – 95
fl. Se trata de una determinación bastante útil para la
clasificación de las anemias en microcíticas, macrocíticas y
normocíticas.
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- Hemoglobina Corpuscular Media (HCM): Se trata del valor

promedio de la hemoglobina contenida en un eritrocito. Su valor
de referencia es de 28 a 32 picogramos. Valores menores a 27 pg
se observan en anemias microcíticas, mientras que valores
mayores a 35 pg se observan en anemias macrocíticas.

- Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media (CHCM): Mide

la concentración de hemoglobina promedio por ml de eritrocitos.
Los valores de referencia son 32 – 36 %. Sobre la base de valores
de MCHC, la sangre puede ser definida como normocrómica,
hipocrómica o hipercrómica.

● Recuento de eritrocitos

Consiste en determinar el número de hematíes presentes en un volumen

determinado de sangre diluida (1:200). La muestra de sangre se diluye lo
suficiente para que los hematíes estén separados unos de otros y así
poder contarlos. El recuento se realiza en una cámara de Neubauer o
similar de dimensiones conocidas.

Un recuento de glóbulos rojos elevado puede deberse a niveles de

oxígeno bajos, enfermedad renal, aumento de la concentración de
glóbulos rojos. Por lo contrario un recuento de glóbulos rojos por
debajo de los normal se puede deber a anemia, sangrado, insuficiencia
de la médula ósea, deficiencia de la hormona eritropoyetina (causada
por enfermedad renal), destrucción de glóbulos rojos (hemólisis), debido
a transfusión, lesión vascular, leucemia y entre otras.

● Recuento de leucocitos

El recuento total de leucocitos consiste en hacer el recuento de una

dilución de sangre entera anticoagulada (Dilución 1:20). Este recuento
puede variar según la edad, género y raza, Define algunos de los
conceptos claves en el análisis del hemograma, permitiendo definir los
conceptos de leucocitosis y leucopenia.

Leucocitosis: Indica el aumento, con relación al valor máximo esperado

para la edad, el estado fisiológico y el origen étnico, del recuento
leucocitario. Generalmente ocurre debido al aumento de los
polimorfonucleares neutrófilos (neutrofilia), también se puede presentar
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por aumento de linfocitos (linfocitosis), polimorfonucleares eosinófilos

(eosinofilia) o monocitos (monocitosis).

Leucopenia: Indica la disminución, con relación al valor mínimo

esperado para la edad, el estado fisiológico y el origen étnico, en el
recuento total de leucocitos. Ocurre debido a la disminución de los
polimorfonucleares neutrófilos (neutropenia), aunque también se puede
presentar por disminución de linfocitos (linfocitopenia) o la
combinación de ambos.

● Recuento de plaquetas

El recuento de plaquetas se trata de una prueba utilizada para

determinar el número de plaquetas en la sangre. Con esta prueba
podemos detectar, diagnosticar o monitorear afecciones que afectan al
número de plaquetas, como trastornos por sangrado, enfermedades de
la médula ósea u otras enfermedades.

● Velocidad de sedimentación eritrocitaria (VES)

Consiste en determinar la velocidad en que se sedimentan (se asientan)

las hematíes, al colocar la sangre en una pipeta Westergreen durante
hora, esta medida nos indica de manera indirecta el grado de
inflamación presente en el cuerpo como también se altera cuando hay
un desequilibrio humoral o condiciones patológicas, sobre todo
infecciosas, la V.E.S se expresan como los milímetros que las células han
descendido en una hora.

● Diferencial leucocitario

Esta prueba consiste en determinar la cantidad de cada tipo de

leucocitos presente en la sangre, expresándose en porcentaje (%). Los
leucocitos, también conocidos como glóbulos blancos, son un
componente importante de la sangre y una pieza clave en el sistema
inmunológico del cuerpo, los cuales se dividen en dos tipos principales:
los granulocitos (Eosinófilos, basófilos, neutrófilos) y agranulocitos.
(Linfocitos B, linfocitos T, monocitos).

Desviación a la derecha Desviación a la izquierda

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MATERIALES

Material biológico

● Sangre venosa anticoagulada

Materiales

● Tubo de hemólisis
● Tubo con EDTA
● Jeringa
● Torniquete
● Torundas de algodón
● Curita
● Papel higiénico
● 2 tubos capilares
● Marcador de vidrio
● Lápiz

Instrumentos

● Micropipeta
● Puntas para micropipetas
● Placa de sellado con plastilina
● Lector de Hematocrito (Ábaco)
● Contador hematológico manual
● Pipeta Westergren
● Soporte de V.E.S

Equipos

● Microscopio óptico
● Microcentrífuga
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Reactivos

● Líquido de TURK
● Agua destilada
● Alcohol al 70%
● Aceite de inmersión
● Tinción panóptica

PROCEDIMIENTO

1. Obtención de muestra sanguínea venosa

2. Microhematocrito (volumen globular)
● Homogeneizar la muestra (sangre entera contenida en un tubo
con anticoagulante)
● Sumergir uno de los extremos del capilar en la muestra, debe
llenarse aproximadamente 70% - 80% del capilar.
● Ocluir (tapar) un extremo del capilar con plastilina.
● Colocar el capilar en una centrífuga de microhematocrito, con el
extremo ocluido en contacto al borde externo de la plataforma.
● Centrifugar por 8 minutos entre 10 000 - 12 000 rpm.
● Realizar la lectura con escalímetro
3. Recuento de Glóbulos Blancos
● Homogeneizar la muestra (sangre entera contenida en un tubo
con anticoagulante)
● Realizar la dilución 1:20. Con una micropipeta, colocar 380 ul de
Solución de Turk en un tubo de ensayo y 20 ul de sangre entera
(cuidar que la pared externa del tip de la micropipeta esté libre de
sangre, se puede usar un papel absorbente), mezclar varias veces la
sangre con la misma micropipeta aspirando y dispensando varias
veces (al menos 10) dentro el tubo con líquido de Turk. Dejar el tip
dentro del tubo de ensayo.
● Dejar reposar la mezcla por 10 min
● Montar la laminilla de vidrio (cubre cámara) en la cámara de
Neubauer, la cual debe estar limpia y seca.
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● Homogeneizar la mezcla y reinsertar el tip en la micropipeta,

colocar 10ul de esta solución en la cámara (se coloca entre el
límite formado por el cubre cámara y la propia cámara).
● Dejar reposar por espacio de 3 minutos para que las células se
sedimenten.
● Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrantes externos (los
16 cuadraditos) con movimientos en greca.

4X 10X

4. Frotis sanguineo

La realización de este análisis es útil para la evaluación de los

siguientes parámetros:

● Eritrocitos (tamaño, forma, color)

● Diferencial leucocitario (porcentaje de tipos de leucocitos)
● Plaquetas (se observan varias plaquetas y grupos ocasionales
por campo, con un aumento de 100x debe haber por lo menos 1
plaqueta pcm).
● Posible presencia de elementos extraños (por ejemplo,
hemoparásitos)
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4.1. Realización y tinción del frotis sanguíneo

Seleccionar dos portaobjetos, ambos limpios y secos, de

preferencia nuevos, cuyos bordes estén intactos, uno será el
portaobjetos móvil, y el otro portaobjetos fijo.
Identificar el portaobjetos en el cual se realizará el extendido
(portaobjetos fijo).
Colocar una gota de sangre en el extremo donde se codificó el
portaobjetos.
Se coloca el borde del otro portaobjetos (móvil) por delante de la
gota de sangre con un ángulo de 45º y se pone en contacto con
la misma, de esta manera, por capilaridad, la sangre se
dispersará por el borde con el que esté en contacto (caso
contrario, hacer movimientos leves siguiendo la dirección del
borde del portaobjetos móvil).
Arrastrar de manera continua el portaobjetos móvil a lo largo del
portaobjetos fijo.
Una vez obtenido el frotis sanguíneo, dejarlo secar entre 15 y 20
minutos.
Teñir el extendido obtenido con Tinción Panóptica

4.2. Tinción panóptica

Colocar las cubetas de tinción y la cubeta con agua en el

siguiente orden:

● Solución fijadora.
● Colorante ácido (Solución A).
● Colorante básico.(Solución B)
● Agua destilada.

Sumergir el portaobjetos, con las extensiones sanguíneas 5 veces

en cada cubeta de tinción, antes de pasar a la siguiente
cubeta se deberá escurrir en un papel absorbente. Cada
inmersión debe durar un segundo.
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Finalmente limpiar los restos de colorante de cada extensión con

agua destilada y secar las placas teñidas al aire y en vertical.

4.3. Observación al microscopio

Se observa en la zona entre el cuerpo y la cola, podemos

identificar esta área visualizando al microscopio si los elementos
celulares están bien distribuidos.

Observar con el objetivo de inmersión con movimientos en greca

recorrer la lámina hasta contar 100 leucocitos

A medida que se va contando, se va anotando el número de cada

una de las clases de glóbulos blancos observados.

Se determina luego los porcentajes de cada uno de ellos para

luego comparar con los porcentajes normales.

También se registra anormalidades en la morfología de los

eritrocitos, en la observación de plaquetas o si encontramos
algún hemoparásito como (T. cruzi o Plasmodium sp.)

5. V.E.S.
● Homogeneizar muestra.
● Cargar las pipetas hasta la marca de O con la muestra.
● Colocar la pipeta de forma vertical en el soporte para V.E.S.
● Leer al cabo de 1 hora cuánto ha descendido la sangre desde el 0
● Leer segunda hora.
● Calcular las V.E.S.
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6. Resultados

7. Conclusiones
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8. BIBLIOGRAFÍA
● Huerta Aragonés J, Cela de Julián E. Hematología práctica:
interpretación del hemograma y de las pruebas de coagulación.
En: AEPap (ed.). Curso de Actualización
● Pediatría 2018. Madrid: Lúa Ediciones 3.0; 2018. Madrid: Lúa
Ediciones 3.0; 2018. p. 507-526. Disponible en:
https://www.aepap.org/sites/default/files/507-526_hematologia_pr
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● Torrens, D. M. (2015). Interpretación clínica del hemograma. REV.
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● Campuzano-Maya, G. Utilidad clínica del extendido de sangre
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Disponible
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● Moreno, S. (2018). HEMATOLOGIA GUÍA DE PRÁCTICAS.