Química Biológica – UNNOBA – 2023

Seminario Nro. 8

Glucólisis y Gluconeogénesis

1. Si se considera la fosforilación directa de la glucosa por el fosfato inorgánico:

glucosa + fosfato ↔ glucosa-6-fosfato + H2O ΔGº´ = + 3,3 kcal/mol

❖ ¿Cuál es la constante de equilibrio de esta reacción?.

❖ En el hepatocito de rata las concentraciones fisiológicas de glucosa y fosfato se

mantienen aproximadamente iguales a 4,8 mM. ¿Cuál es la concentración de glucosa-
6-fosfato que se encontraría en el equilibrio?.¿Representa esta vía una ruta metabólica
razonable para el catabolismo de la glucosa?

.
❖ En principio, al menos, uno de los caminos para incrementar la concentración de
glucosa-6-fosfato es desplazar el equilibrio de la reacción hacia la derecha, aumentando
las concentraciones intracelulares de glucosa y fosfato. Suponiendo una concentración
fija de fosfato de 4,5 mM ¿en qué valor debería incrementarse la concentración de
glucosa intracelular para que la concentración de glucosa-6-fosfato sea 250 µM
(concentración fisiológica normal) en el equilibrio?. ¿Constituiría esta ruta un método
razonable desde el punto de vista fisiológico, si la solubilidad de la glucosa en agua es
inferior a 1 M?.

b) En la ruta glicolítica, sin embargo, la fosforilación de la glucosa ocurre acoplada a la

hidrólisis del ATP.
❖ Escribir la ecuación química correspondiente a esta reacción.
❖ Sabiendo que la hidrólisis de ATP (ΔGº´ = - 7,3 kcal/mol), calcular ΔGº´ y Keq de la
reacción completa.
❖ ¿Qué concentración de glucosa se necesita para conseguir una concentración
intracelular de glucosa-6-fosfato de 250 uM, si las concentraciones de ATP y ADP son
3,38 y 1,32 mM respectivamente?.¿Proporciona este proceso una ruta factible, al menos
en principio, para la fosforilación de la glucosa?.

c) La velocidad de la reacción anterior, in vitro, puede determinarse colorimétricamente

por el método de Somogyi-Nelson, con el cual se determina concentación de glucosa
remanente no fosforilada. En un ensayo se midió la actividad de una preparación de
hexoquinasa IV (de hepatocitos) en una mezcla de reacción de 1 ml que contenía: 0.4
ml de glucosa 0.01M, 0.05 mg de enzima, suficiente Mg+2, ATP en exceso, todo en buffer
pH 7.0.
❖ Si a los 3 minutos quedaron 3.91 µmoles de glucosa por ml de mezcla de reacción,
calcular la velocidad inicial de la reacción expresada en µmoles de glucosa transformada
por minuto.
❖ Calcular la Vmáx, sabiendo que kM = 0.8x10-2 M.

2. ¿Cuántas de las 10 etapas de la glicólisis transcurren con un ΔG < 0?

 Química Biológica – UNNOBA – 2023

3. ¿Cuáles son las etapas catalizadas por quinasas? ¿Son etapas reversibles o
irreversibles? ¿Por qué a las quinasas se las clasifica dentro de la clase de enzimas
transferasas?

4. La fosforilación de la glucosa a glucosa-6-fosfato puede explicarse en términos de

evitar su transporte/difusión hacia el exterior celular. Pero, entonces, ¿por qué luego la
fructosa vuelve a ser fosforilada?

5. ¿Todos los intermediarios de la glicólisis se encuentran fosforilados? ¿Todos son

ésteres fosfato?

6. ¿En cuál/les etapas de la glicólisis se produce una oxidación neta de un metabolito?

7. Indique en cuál/cuáles de las etapas de la glicólisis el metabolito sustrato sufre una

reacción de: deshidratación; isomerización; oxidación.

8. La glucosa puede comprarse con cualquiera de sus carbonos marcados con 14C.
Suponga que Ud. dispone de glucosa marcada en el C1, y que la incuba con las enzimas
glucolíticas y los cofactores necesarios. Prediga cuál será la distribución del 14C en el
piruvato formado (suponga que la interconversión de gliceraldheído 3-P y
dihidroxiacetona-3-P es muy rápida comparada con los pasos siguientes).

9. En mamíferos, existen diferentes isozimas de la hexoquinasa.

En hepatocitos se encuentra dos isoenzimas: la hexoquinasa I , que posee un
Km = 0,1 mM, y la hexoquinasa IV (glucoquinasa), con un Km = 1,5 mM.
La concentración de glucosa sanguínea es 4-5 mM; en el caso de hiperglucemias, el
nivel de glucosa sanguinea puede aumentar a 30 mM.
En el caso de una hiperglucemia ¿aumentará la velocidad de degradación de glucosa
en hepatocitos por la hexoquinasa I y la hexoquinasa IV?

10. ¿Cuáles de las etapas de la glicólisis están bajo control cinético? ¿Cuál es el rol de
los nucleótidos de adenina en la regulación de la ruta?

11. Suponga que descubre una levadura mutante cuya ruta glucolítica es más corta
debido a la presencia de una nueva enzima que cataliza la reacción:
gliceraldehído-3-P + H2O → 3-fosfoglicerato. Si bien esta enzima mutante acorta la
glucólisis en un paso, ¿de que modo afectará la producción anaeróbica de ATP? ¿Y la
producción aeróbica de ATP?

12. Prediga el efecto de cada una de las siguientes mutaciones sobre la velocidad de la
glucólisis en células hepáticas:
a- Pérdida del sitio alostérico para el ATP en la PFK-1
b- Pérdida del sitio de unión para el citrato en la PFK-1
c- Pérdida del dominio fosfatasa en la enzima bifuncional que controla los
niveles de fructosa 2,6-bifosfato
d- Pérdida del sitio de unión de ATP en la piruvato quinasa.

13. Respecto a la gluconeogénesis, responda:

a- ¿En qué órganos tiene lugar y bajo qué condiciones fisiológicas?
b- ¿Cuál es la localización celular de las enzimas involucradas en este proceso?
 Química Biológica – UNNOBA – 2023

c- ¿Qué compuestos pueden ser utilizados como precursores para la síntesis de

glucosa?

14. Explique el motivo de la utilización de la lanzadera de malato durante la

gluconeogénesis cuando el precursor de la vía es el piruvato

15. Indique el estado de la gluconeogénesis (activa/inactiva) hepática en las siguientes

condiciones:
- Niveles elevados de Acetil-CoA
- Bajos niveles de AMP
- Presencia de Glucagón
- Concentración elevada de NAD+
- Niveles elevados de citrato
- Niveles elevados de fructosa 2,6-bisfosfato