HEMOGLOBINA

MÉTODO DE LA CIANMETAHEMOGLOBINA
Para la determinación “in vitro” de hemoglobina en sangre total

PRINCIPIO P
El Fe (II) de la hemoglobina, oxihemoglobina y carboxi-hemoglobina es oxidado a Fe (III) por el ión ferricianuro, dando lugar a la metahemoglobina que, en presencia de ión cianuro, origina F
la cianmetahemoglobina, compuesto de color rojo y estable, que se puede determinar fotométricamente. c

HbFe(ΙΙ) + Fe(ΙΙΙ)(CN)63- HbFe(ΙΙΙ) + Fe(ΙΙ)(CN)64-

HbFe(ΙΙΙ) + CN- HbFe(ΙΙΙ)CN

UTILIDAD DIAGNÓSTICA PROCEDIMINENTO D

La hemoglobina es una proteína de la sangre de estructura cuaternaria y de color rojo que H
posee un grupo hemo con hierro en su interior. Su función principal es el transporte de
Técnica BL mL PR mL
a
oxígeno desde los órganos respiratorios hasta los tejidos y el dióxido de carbono desde los Muestra - 0,010 t
tejidos hasta los pulmones. También participa en la regulación del pH de la sangre. t
Una concentración de hemoglobina por debajo de los valores normales puede ser debida Reactivo 2,5 2,5
A
a anemia, cáncer, enfermedades renales, hemorragias, hemólisis o daño en la medula b
ósea. Mezclar bien e incubar 10 min a Temperatura ambiente (20-25ºC). Leer los resultados. H
Unos valores de hemoglobina elevados pueden ser indicativos de deshidratación, t
enfermedad renal, enfermedad pulmonar crónica, tumores o cardiopatías. Lectura S
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de Longitud de onda: 546 nm; 540 nm. a
laboratorio. Blanco: el contenido del tubo BL.
Estabilidad del color: 8 horas. R
REACTIVOS 1
1 x 100 mL. (Ref. 99 60 23). Contiene: CÁLCULOS 1
1 x 100 mL Reactivo Drabkin concentrado (1:10) Ref. 99 03 11 Con factor:
Abs muestra x 37 = g Hemoglobina / dL K
Kit 3 x 100 mL. (Ref. 99 60 30). Contiene: 3
El valor del factor de cálculo se obtiene al aplicar la relación:
3 x 100 mL Reactivo Drabkin concentrado (1:10) Ref. 99 03 11
20 g/dL / 0,545 540nm
W
PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO El valor de Abs. de 0,545 es el resultado que se obtendría después de procesar una
T
El reactivo de trabajo se prepara haciendo una dilución 1:10 del reactivo de Drabkin (100 muestra, en las condiciones indicadas en la metódica, con una concentración de 20 g/dL
w
mL de reactivo Drabkin + 900 mL de agua desionizada) de Hemoglobina.
A

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO Unidades SI:

W
Las concentraciones en la disolución reactiva son: (g/dL) x 0,155 = mmol/L
C
Ferricianuro potásico 0,5 mM P
Cianuro potásico 0,8 mM VALORES DE REFERENCIA
P
Conservantes y estabilizantes Hombres: 13 - 18 g/dL
P
Mujeres: 11 - 16 g/dL
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Estos valores son a título orientativo. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
S
El reactivo, mantenido a temperatura ambiente (≤ 25ºC), es estable hasta la fecha de propios valores de referencia.
T
caducidad indicada en la etiqueta. e
CONVERSIÓN DE VALORES DE HEMOGLOBINA
Indicaciones de alteración de los reactivos: 100 % Hemoglobina = 16 g/dL
S
Presencia de partículas o turbidez. Blanco del reactivo de trabajo > 0,1. g/dL Hb % Hemoglobina g/dL Hb % Hemoglobina P

MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO 18,0 112,5 12,8 80,0 A

Material común de laboratorio. 17,6 110,0 12,4 77,5 G
Espectrofotómetro, analizador automático o fotómetro termostatizado a 37ºC. Cubeta de 1 17,2 107,5 12,0 75,0 S
cm de paso de luz. 16,8 105,0 11,6 72,5 L
16,4 102,5 11,2 70,0
MUESTRA 16,0 100,0 10,8 67,5
S
Sangre total heparinizada o con EDTA 15,6 97,5 10,4 65,0
W
La hemoglobina es estable 1 semana a 2-8ºC. 15,2 95,0 10,0 62,5
H
14,8 92,5 9,6 60,0
PRECAUCIONES 14,4 90,0 9,2 57,5
C
El reactivo contiene Cianuro que es venenoso. Utilizar pipetas de seguridad y manipular 14,0 87,5 8,8 55,0
T
con precaución. 13,6 85,0 8,4 52,5
w
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. 13,2 82,5 8,0 50,0
T
Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación del reactivo. t
La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa legal vigente. PRESTACIONES. CARACTERISTICAS DE FUNCIONAMIENTO T
Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del reactivo como del
CONTROL DE CALIDAD sistema de lectura manual o automático empleados. Q
Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control de calidad y los Los siguientes datos se han obtenido de forma manual: E
procedimientos de corrección de las desviaciones en las medidas. f
Sensibilidad, como límite de detección. 2,0 g/dL
Linealidad: Hasta 25 g de hemoblobina/dL
AUTOANALIZADORES
Exactitud, como % de recuperación: 95,2% A
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos, disponibles bajo demanda.
Precisión en la serie, como CV%: 2,74% A
Precisión entre series, como CV%: 2,98%
Veracidad. Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias significativas
al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están disponibles bajo
demanda.

INTERFERENCIAS
No se conocen interferencias destacables.
Se recomienda el uso de material desechable para evitar contaminaciones indeseables.

BIBLIOGRAFIA
van Kampen, E.J., Zijlstra, W.G.(1961). Clin. Chim. Acta, 6, 538-544.
International Committee for Standarization in Haematology (1978), J.Clin. Path., 31, 139-143.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: 03.2017 PRO4_REG9_HBC_7
HEMOGLOBIN
CYANMETHAEMOGLOBIN METHOD
For “in vitro” determination of Hemoglobin in whole blood
PRINCIPLE
Ferricyanide oxidizes the Fe(II) present in hemoglobin, oxyhemoglobin and carboxyhemoglobin, into Fe(III), giving rise to methaemoglobin which, in the presence of cyanide ion, produces
cyanmethaemoglobin, a stable red compound that is photometrically determined.

HbFe(ΙΙ) + Fe(ΙΙΙ)(CN)63- HbFe(ΙΙΙ) + Fe(ΙΙ)(CN)64-

HbFe(ΙΙΙ) + CN- HbFe(ΙΙΙ)CN

DIAGNOSTIC USE PROCEDURE

Hemoglobin is a blood protein with quaternary structure, red-colored and has a heme group
and iron inside. Its main function is to transport oxygen from the respiratory organs to the
tissues, carbon dioxide from the tissues to the lungs to remove it and also participates in
Technique BL mL SA mL
the regulation of blood pH. Sample - 0.010
A hemoglobin level below normal values may be due to anemia, cancer, kidney disease,
bleeding, hemolysis or bone marrow damage. Reagent 2.5 2.5
High hemoglobin values may be indicative of dehydration, renal and lung chronic disease, Mix and allow to stand 10 min at room temperature (20-25ºC). Read the absorbance.
tumors or cardiopathies.
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should integrate clinical Reading
and laboratory data. Wavelength:546 nm; 540 nm
Blank: the contents of BL
REAGENTS Colour stability: a minimum of 8 hours
1 x 100 mL. (Ref. 99 60 23). Contents:
1 x 100 mL Concentrated (1:10) Drabkin’s reagent Ref. 99 03 11 CALCULATIONS
With factor
Kit 3 x 100 mL. (Ref. 99 60 30). Contents: Abs sample x 37 = g Haemoglobin / dL
3 x 100 mL Concentrated (1:10) Drabkin’s reagent Ref. 99 03 11
The value of the Calculation Factor is obtained by:
WORKING REAGENT PREPARATION 20g/dL / 0,545 540nm
To prepare working reagent is necessary to dilute 1:10 the concentrated Drabkin’s reagent
with deionized water. The value of Abs. 0.545 is the result that you could obtain after processing a hemoglobin
Add 900 mL of deionized water to 100 mL of concentrated reagent. sample, under the conditions indicated in the procedure, with a concentration of 20 g/dL
hemoglobin.
WORKING REAGENT COMPOSITION
Concentrations in the reagent solution are: S.I. Units
Potassium ferricyanide 0.5 mM (g/dL) x 0.155 = mmol/L
Potassium cyanide 0.8 mM
Preservatives and stabilizers REFERENCES VALUES
Men: 13-18 g/dL
STORAGE AND STABILITY Women:11-16g/dL
The components of the kit, stored at room temperature (≤ 25ºC), will remain stable until the The stated values are for guidance. It is advisable that each laboratory determines its own
expiration date stated on the label. reference values.

Signs of reagent deterioration: CONVERSION OF HEMOGLOBIN VALUES

Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank > 0.1 100 % Hemoglobin = 16 g/dL

ADDITIONAL EQUIPMENT g/dL Hb % Hemoglobin g/dL Hb % Hemoglobin

General laboratory equipment. 18.0 112.5 12.8 80.0
Spectrophotometer or photometer thermostatable at 37ºC. 17.6 110.0 12.4 77.5
Light path cuvette: 1 cm 17.2 107.5 12.0 75.0
16.8 105.0 11.6 72.5
SAMPLE 16.4 102.5 11.2 70.0
Whole blood with Heparin or EDTA. 16.0 100.0 10.8 67.5
Hemoglobin is stable1 week when stored at 2-8ºC. 15.6 97.5 10.4 65.0
15.2 95.0 10.0 62.5
CAUTION 14.8 92.5 9.6 60.0
The reagent contains cyanide, that is poisonous. Security pipettes shall be used. Handle 14.4 90.0 9.2 57.5
with care. 14.0 87.5 8.8 55.0
The safety statements are on the label. It is advisable to look at the MSDS before using 13.6 85.0 8.4 52.5
the reagent. 13.2 82.5 8.0 50.0
The disposal of the residues has to be made according to legal local regulations.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
QUALITY CONTROL Performance of the reagent depends on the reagent itself and also depends on method and
Each particular laboratory should establish its own quality control program and measures analyzer used.
for avoiding results deviations. The results indicated are obtained using a manual method.

AUTOANALYZERS Sensitivity, as detection limit: 2.0 g/dL

Adaptations to different autoanalyzers are available on request. Linearity: Up to 25 g of hemoglobin/dL
Accuracy: 95.2 %
Repetitivity as Variation Coefficient: 2.74%
Reproducibility, as Variation Coefficient: 2.98%
Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences when
compared with reference reagent.
Details of the performance studies are available on request

INTERFERENCES
No interferences are known.
The use of disposable equipment is recommended to prevent unwanted contamination.

REFERENCES
Van Kampen, E.J., Zijlstra, W.G.(1961). Clin. Chim. Acta, 6, 538-544.
International Committee for Standarization in Haematology (1978), J.Clin. Path., 31, 139-
143.

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Revision: 03.2017 PRO4_REG9_HBC_7
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HÉMOGLOBINE
MÉTHODE DE LA CYANMÉTHÉMOGLOBINE
Pour la détermination in vitro de l’hémoglobine dans le sang total

PRINCIPE
L’ion Fe (II) de l’hémoglobine, oxyhémoglobine et carboxyhémoglobine, est oxydé en l’ion Fe (III) par le ferricyanure pour former la méthémoglobine qui réagit en présence de l’ion cyanure
en formant la cyanméthémoglobine, un composé de couleur rouge et stable, qui peut être mesuré par une méthode photométrique.

HbFe(ΙΙ) + Fe(ΙΙΙ)(CN)63- HbFe(ΙΙΙ) + Fe(ΙΙ)(CN)64-

HbFe(ΙΙΙ) + CN- HbFe(ΙΙΙ)CN

UTILITÉ DE DIAGNOSTIC TECHNIQUE

L’hémoglobine est une protéine du sang avec la structure quaternaire, de couleur rouge et
a un groupe hème et du fer à l’intérieur. Technique BL mL ESSAI mL
Sa fonction principale est de transporter l’oxygène à partir de l’appareil respiratoire pour Échantillon - 0,010
les tissus et le dioxyde de carbone à partir des tissus vers les poumons. Elle participe
également à la régulation du pH sanguin. Réactif 2,5 2,5
Un taux d’hémoglobine en dessous des valeurs normales peut être due à l’anémie, le Bien mélanger puis incuber pendant 10 minutes à température ambiante (20 à 25 ºC). Lire
cancer, les maladies rénales, des hemorragies, hémolyse ou lésion de la moelle osseuse. l’absorbance.
Des valeurs élevées de l’hémoglobine sont indicatives de déshydratation, maladie rénale,
maladie pulmonaire chronique, de tumeurs ou d’une maladie cardiovasculaire Lecture
Longueur d’onde: 546 nm; 540 nm.
Un test de laboratoire unique ne permet pas d’établir un diagnostic. Les résultats doivent Blanc: le contenu du tube BL.
être évalués dans le contexte de toutes les données cliniques et de laboratoire obtenues. Stabilité de la coloration: 8 heures.

RÉACTIFS CALCULS
1 x 100 mL. (Réf. 99 60 23). Contenu: Calculer en utilisant le facteur.
1 x 100 mL Réactif de Drabkin concentré (1:10) Réf. 99 03 11 Abs. échantillon x 37 = g d’hémoglobine/dL

Kit 3 x 100 mL. (Réf. 99 60 30). Contenu: La valeur du facteur de calcul est obtenue en appliquant la relation:
3 x 100 mL Réactif de Drabkin concentré (1:10) Réf. 99 03 11 20g/dL / 0,545 540nm

PRÉPARATION DU RÉACTIF DE TRAVAIL La valeur d’absorbance de 0,545 serait le résultat obtenu après l’analyse d’un échantillon
Diluer le réactif Drabkin concentré de 1:10 avec de l’eau désionisée. Ajouter 900 mL d’eau dans les conditions indiquées dans la méthode avec une concentration de 20 g/dL
déionisée à 100 mL réactif de Drabkin. d’hémoglobine.

COMPOSITION DU RÉACTIF DE TRAVAIL Unités SI

Le concentration dans la solution réactive est le suivant: (g/dL) x 0,155 = mmol/L
Ferricyanure de potassium 0,5 mM
Cyanure de potassium 0,8 mM VALEURS DE RÉFÉRENCE
Conservateurs et stabilisants Hommes: 13 à 18 g/dL
Femmes: 11 à 16 g/dL
CONSERVATION ET STABILITÉ Il est recommandé que chaque laboratoire établisse ses propres valeurs de référence.
Conservé à température ambiante (≤ 25ºC), le réactif est stable jusqu’à la date de
péremption indiquée sur l’étiquette. CONVERSIÓN DES VALEURS DE L’HÉMOGLOBINE
100 % Hémoglobine = 16 g/dL
Indications d’alteration du réactif:
La présence de particules dans le réactif. Blanc du réactif de travail > 0,1.
g % Hb 100 % Hb = 16 g % g % Hb 100 % Hb = 16 g %
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI
18,0 112,5 12,8 80,0
Matériel courant de laboratoire.
17,6 110,0 12,4 77,5
Spectrophotomètre, analyseur automatique ou photomètre thermostaté à 37°C.
17,2 107,5 12,0 75,0
Cuvette de 1 cm de trajet optique.
16,8 105,0 11,6 72,5
16,4 102,5 11,2 70,0
ÉCHANTILLON 16,0 100,0 10,8 67,5
Sang total hépariné ou sur EDTA. Conservé entre 2-8ºC, l’hémoglobine est stable pendant 15,6 97,5 10,4 65,0
1 semaine. 15,2 95,0 10,0 62,5
14,8 92,5 9,6 60,0
PRÉCAUTIONS 14,4 90,0 9,2 57,5
Le réactif contient du cyanure qui est vénéneux. Utiliser des pipettes de sécurité et 14,0 87,5 8,8 55,0
manipuler avec précaution. 13,6 85,0 8,4 52,5
Les indications de sécurité sont sur l’étiquette des produits. On conseillé de consulter la 13,2 82,5 8,0 50,0
fiche des données de sécurité avant de manipuler le réactif.
L’élimination des déchets doit être effectuée conformément aux normes en vigueur.
PERFORMANCE. CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
CONTRÔLE DE QUALITÉ Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de lecture manuel ou
Nous suggérons que chaque laboratoire d’établir son propre programme et les procédures automatique utilisé. Les résultats suivants ant été obtenues avec une technique manuelle.
de correction des écarts dans les mesures de contrôle qualité.
La sensibilité, en tant que la limite de détection: 2,0g/L
AUTO-ANALYSEURS Linéarité: jusqu’à 25 g/dL d’hémoglobine.
Exactitude: le pourcentage de récupération est de 95,2%.
Adaptations aux différents analyseurs automatiques sont disponibles sur demande.
Coefficient de variation dans la série: 2,74%
Coefficient de variation entre les séries: 2,98%
Justesse. Les résultats obtenus avec le réactif ne sont pas significativement différents par
rapport au réactif de référence considéré.

L’étude détaillée de la performance du réactif est disponible sur demande.

INTERFÉRENCE
Aucunes interférences remarquables.
L’utilisation de matériel à usage unique est recommandé pour prévenir la contamination
non désirée.

BIBLIOGRAPHIE
Van Kampen, E.J., Zijlstra, W.G.(1961). Clin. Chim. Acta, 6, 538-544.
International Committee for Standarization in Haematology (1978), J.Clin. Path., 31, 139-
143.

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