Práctica: determinación de

proteína y albúmina en suero

Mg Acela Inés Arnao Salas

2018
Determinación de proteínas totales
• Se realiza en diferentes líquidos biológicos.
• Las proteínas plasmáticas de acuerdo a su origen
pueden ser:
• A) plasma específicas
• B) plasma no específicas
• Las proteína plasmáticas de acuerdo a sus
funciones pueden ser:
• Transporte y asociadas a sistemas buffers
• Reactantes de fase aguda
• Defensa, sintetizadas por el sistema inmune
Brandan, N. (2008)
 Métodos para el estudio de las
proteínas
• Los procedimientos más utilizados actualmente
en el laboratorio clínico para el estudio de las
proteínas son los siguientes:
• 1. Turbidimetría y nefelometría
• 2. Inmunodifusión
• 3. Electroforesis
• 4. Inmunoelectroforesis
• 5. Inmunofijación
• 6. Cromatografía
Fraccionamiento de las
proteínas plasmáticas
mediante electroforesis en
papel de celulosa.
 Cuantificación de proteínas totales
• La cuantificación de proteínas se puede realizar
por diversos métodos: Biuret, Lowry, Bradford,
ácido Bicinconínico (BCA).
• Método de Biuret:
• En solución alcalina el Cu+2 reacciona con el
enlace peptídico de las proteínas dando un color
purpúreo que se cuantifica espectro-
fotométricamente (546 nm).
Proteína + Cu+2  Complejo Cu-Proteína (púrpura)
Reacción de Biuret
 Procedimiento
Tubos Blanco Estándar Muestra Problema
Estándar de proteínas (uL) --- 10 ----
Suero (uL) ---- ---- 10
Reactivo R (uL) 1000 1000 1000
Agua destilada (uL) 10 ---- ----
Mezclar e incubar a 37°C durante 10 minutos
Leer la Absorbancia a 546 nm llevando a cero con agua destilada
Absorbancia a 546 nm
 Resultados
Resultados
Para el cálculo de la concentración de proteínas se empleará la siguiente fórmula:

Proteínas g/dL = ConcST / AST x AMP

Donde:
AST = Absorbancia del estándar
AMP = Absorbancia de la muestra problema
ConcST = Concentración del estándar (6g/dL)
Factor de conversión: g/dL x 10 = g/L
 Determinación de albúmina en suero
• Se usará el método de unión a un colorante, el
verde de bromocresol.
• La albúmina reacciona específicamente (sin
separación previa) con la forma aniónica de la
3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftaleína
(BCF). El aumento de absorbancia a 620 nm
respecto del Blanco de reactivo, es
proporcional a la cantidad de albúmina
presente en la muestra.
 Verde de bromocresol

Su intervalo de transición de pH es aproximadamente

entre 3.8–5.4 , virando de amarillo a azul-verdoso.
 Procedimiento
Tubos Blanco Estándar Muestra
Problema
Estándar de albúmina (uL) --- 10 ----
Suero (uL) ---- ---- 10
Reactivo R (uL) 1 000 1 000 1000
Agua destilada (uL) 10 ---- ----
Mezclar e incubar los tubos a 37°C por 5 minutos
Leer en el espectrofotómetro a 620 nm llevando a cero con agua destilada
Absorbancia
 Resultados
Resultados
Para el cálculo de la concentración de proteínas se empleará la siguiente fórmula:

Albúmina g/dL = ConcST / AST x AMP

Donde:
AST = Absorbancia del estándar
AMP = Absorbancia de la muestra problema
ConcST = Concentración del estándar (5g/dL)

Factor de conversión: g/dL x 10 = g/L

 Resultados
• La relación albúmina / globulina (A/G) se
obtiene:
• A/G = Albúmina g/dL / (Proteína total g/dL –
albúmina g/dL)
• Los valores de referencia para la relación A/G
es de 1,2 a 2,2 y son específicos para cada
especie.
 Bioseguridad
• Usar guantes tipo quirúrgico.

• El reactivo R (Proteínas y albumina)puede ser corrosivo para los

metales y cañerías. Dejar correr el agua del caño después de
eliminado.

• El reactivo R (Proteínas y albumina) provoca irritación cutánea y

ocular. Lavarse con abundante agua en caso de contacto.

• El estándar contiene azida sódica que puede reaccionar con el

plomo de las cañerías. Dejar correr el agua del caño después de
eliminado.