VALOR DE HEMOGLOBINA

INTRODUCCIÓN
La hemoglobina es una proteína conjugada, la cual proporciona el color rojo de la
sangre. Se encarga de llevar el oxígeno a los tejidos y participa en el transporte
del CO2 para el equilibrio ácido-base. La porción porfirínica de la hemoglobina es
una protoporfirina IX, la cual combinado con Fe(II) constituye el grupo heme; este
más la parte proteica (globina) constituye la hemoglobina.
Existe una amplia variedad de técnicas para cuantificar a la hemoglobina, entre las
que destacan: determinación de su contenido de Fe, espectrofotometría,
refractometría, gasometría, etc.
El método de cianometahemoglobina es el método recomendado por el Comité
Internacional para la Estandarización en Hematología y las ventajas que ofrece
este método son:
Existen soluciones estándar certificadas de cianometahemoglobina (HbCN) con
una estabilidad mayor de un año.
El espectro de absorción de (HbCN) permite efectuar lecturas en la región del
visible en cualquier tipo de fotómetro ya que representa un máximo de 540 nm y
las soluciones de (HbCN) siguen la ley de Beer a esta longitud de onda.
FUNDAMENTO
El Fe (II) es oxidado a Fe(III) por acción del ferricianuro y por lo tanto la
hemoglobina se convierte en metahemoglobina, la cual se combina con cianuro
para producir la cianometahemoglobina (CNHb) que es estable y se puede medir
en la región de 530-550 nm. La hemoglobina, oxihemoglobina, metahemoglobina y
carboxihemoglovina es decir todas las formas de hemoglobina y presentes son
transformadas en cianometahemoglobina excepto la sulfohemoglobina.
OBJETIVOS:
● Realizar una curva de calibración de cianometahemoglobina.
● Valorar las concentraciones de hemoglobina en sangre total.
● Distinguir valores normales de patológicos.
PROCEDIMIENTO
Material:
Tubos de ensayo de 13x100 mm
Pipetas de 1.0 mL
Pipetas de 5.0 mL
Pipetas de Sahli (0.02 mL)
Boquilla
Gradilla
Celdas de 1 cm de diámetro
 Material biológico:
Sangre capilar o venosa con anticoagulante.

Equipo:
Espectrofotómetro o fotómetro

Reactivos:
Solución de EDTA al 10%
Reactivo de Drabkin
Solución estándar de cianometahemoglobina 80 mg/gl
Etanol al 70%

Toxicidad de sustancias:
El reactivo de Drabkin y la solución estándar de (HbCN) contiene derivados de
cianuro los cuales son tóxicos; sin embargo; las concentraciones de estos están
por debajo de la dosis letal referida a un litro de solución. Se recomienda utilizar
perillas de seguridad para pipetear estas soluciones y no ingerir alimentos durante
la práctica; al finalizar la determinación es necesario lavarse las manos.

Técnica
Curva Estándar
B 1 2 3 4 5
Solución
estándar de
(HbCN)(mL) 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
Reactivo de
Drabkin
mL 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0
Concentración
g/dl
Moles/L

Agitar cuidadosamente después de la adición de cada reactivo, dejar reposar 10

minutos, leer la absorción o el % de transmitancia contra el blanco de reactivos a
540 nm.
Trazar la gráfica en papel milimétrico o semilogarítmico según sea el caso;
colocando en el eje de las abscisas la concentración en g/dl y en el eje de las
ordenadas las lecturas de la absorbancia o porcentaje de transmitancia.
Muestra Problema:
1) Colocar en el tubo de 13x100 mm, 5 mL de reactivo de Drabkin.
2) Homogenizar perfectamente la muestra.
 3) Empleando una boquilla, tomar con la pipeta de Sahli 0.02 mL de sangre,
aforar cuidadosamente y limpiar la sangre adherida en el exterior de la
pipeta.
4) Transmitir el volumen de muestra al tubo que contiene el reactivo de
Drabkin y mezclar cuidadosamente. Enjuagar 3 veces la pipeta en la
dilución.
5) Dejar reposar durante 10 minutos y leer contra un blanco de reactivos
(reactivo Drabkin). Interpolar las lecturas en la curva de calibración. La
reacción es estable un mínimo de 2 horas.
Cálculos
Es necesario aplicar la siguiente fórmula para calcular la concentración de cada
uno de los tubos de la curva de calibración.
(𝑚𝐿 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 )(𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 )
g/dl de Hb = ∗ 251
𝑚𝐿 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠

Valores de referencia.
Hombres 15.4-17.6 g/dl
Mujeres 13.6-15.6 g/dl
Equipos y reactivos
RYE © 2011, Reactivos y Equipo S.A. de C.V.
Tel. 01800.7777.RYE (793)
info@reactivosyequipos.com.mx

Espectrofotómetro:

http://www.reactivosyequipos.com.mx/producto/23253-espectrofotometro-genesys-
30-vis-100-240v
Centrifuga:

http://www.reactivosyequipos.com.mx/producto/16372-centrifuga-refrigerada-st-
40r-120-v

Reactivo Drabkin:
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d5941?lang=es&region=MX&g
clid=Cj0KEQjw4rbABRD_gfPA2-
uQqroBEiQA58MNdBA18LCQSdnVaLnWzJJeqQdcymvwpMfWbxks8E_G4mkaAjB
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