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CASO 3 –“La historia de

Martín: secuencias”
Docente: Alejandra Valentín

Autores:

Lucía Rodríguez 6.305.395-1

Santiago Duque 5.060.421-8
Valentina Villegas 5.326.913-6
Tadeo Sánchez 5.348.186-1
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Introducción:
El caso que desarrollaremos a continuación, trata sobre un paciente sobre el que se sospecha una
mutación en la hemoglobina. Por esta razón, se procede a estudiar la secuencia y la estructura de la
proteína aislada obtenida de la muestra de sangre.
Para establecer las consecuencias que dicha alteración en la secuencia de la proteína, podría tener en la
hemoglobina del paciente, se propone analizar el efecto que pueden generar algunas sustituciones de
aminoácidos. Este análisis fue realizado por estudiantes, quienes eligieron sustituir la siguiente
composición de aminoácidos: VHLTPEEKSAVTALWGKVNV... reemplazando A por G o H, K por R o D, S por
T o P, V por L o K. Decidieron utilizar una solución amortiguadora para estudiar la interacción de esos
aminoácidos con una zona cargada negativamente de otra parte de la molécula. La laboratorista, les
añadió la tarea de indicar si ocurriría lo mismo con otra solución amortiguadora.

Presentación y objetivos.
En el presente informe, procederemos a definir los conceptos de aminoácidos y proteínas, con
una breve descripción de su estructura y nomenclatura.
Así mismo, pretenderemos abordar las consecuencias del resultado de sustitución de un
aminoácido por otro, y la exposición a un pH concreto.
Utilizaremos los conocimientos adquiridos para explicar dichas reacciones físico químicas como
el pKa, y plasmarlas en la curva de titulación.

Marco teórico:
Para la adecuada interpretación de lo desarrollado en este caso, cabe destacar la importancia de
algunos conceptos básicos que permitirán la correcta comprensión para llevar adelante la
discusión.
Se procede a mencionar la definición de aminoácidos, entendiendo por ellos que son las
unidades constituyentes de las proteínas (biomoléculas), estas últimas son de interés en las
organizaciones estructurales y funcionales de células y tejidos. Téngase en cuenta que todas las
enzimas, fundamentales para las reacciones bioquímicas, y todos los anticuerpos, esenciales en
los procesos de inmunidad, son proteínas y se encuentran por tanto constituidas por
aminoácidos.
Desde el punto de vista químico son ácidos orgánicos (RCOOH), portadores de un grupo amino
(NH2) y un radical variable R. Según la naturaleza del grupo R los aminoácidos pueden ser
clasificados en grupos: Grupo R polar no cargado, Grupo R polar cargado negativamente, Grupo
R polar cargado positivamente, Grupo R no polar alifático, Grupo R aromático.
La gran cantidad de proteínas que se conocen están formadas únicamente por 20 AA diferentes.
Se conocen otros 150 que no forman parte de las proteínas.
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Generalmente, el número de AA que forman una proteína oscila entre 100 y 300. Los enlaces
que participan en la estructura primaria de una proteína son covalentes: son los enlaces
peptídicos.

Estos enlaces, son enlaces amida que se forma entre el grupo carboxilo de una AA con el grupo
amino de otro, con eliminación de una molécula de agua. Independientemente de la longitud de
la cadena polipeptídica, siempre hay un extremo amino terminal y un extremo carboxilo
terminal que permanecen intactos. Los aminoácidos pueden tener otros grupos sustituyentes en
las cadenas laterales o radicales (R), que van a determinar sus características físico-químicas, es
decir su carácter hidrófobo o hidrófilo, polar o apolar, y ácido o básico. La R puede ser desde un
solo H hasta una cadena carbonada compleja con grupos funcionales.
Dada la naturaleza del caso, se considera esencial desarrollar también el concepto de proteína y
qué ocurre cuando se produce una “mutación”.
Todas las proteínas poseen una misma estructura química central, que consiste en una cadena
lineal de aminoácidos. Lo que hace distinta a una proteína de otra es la secuencia de
aminoácidos de que está hecha, para ello es importante comprender las fases de la estructura.
La estructura primaria: está determinada por lo aminoácidos presentes y la forma en que están
enlazados, a nivel primario, las posibilidades de estructuración son prácticamente ilimitadas. En
esta fase primaria, es donde se forma el “esqueleto” del cual se prolongan las cadenas laterales
de aminoácidos. El ordenamiento de los aminoácidos en la cadena polipeptídica no es arbitraria,
sino que responde a un plan determinado de ADN. Esta primer estructura definirá la
especificidad de la proteína.
La estructura secundaria: Es la fase de plegamiento y giros que la cadena polipeptídica adopta
por la formación de puentes de hidrógeno entre los átomos que forman el enlace peptídico. Las
formas que puede adoptar son: espiral (configuración alfa-helicoidal y las hélices de colágeno),
plegadas (configuración beta o de hoja plegada), en ocasiones algunas no alcanzan una
estructura bien definida y se le denomina a su forma “enroscamientos aleatorios”.
La estructura terciaria: esta estructura es la responsable directa de sus propiedades biológicas y
sus funciones, ya que en esta etapa se dan superplegamientos y enrollamientos de la
estructura secundaria que dan lugar a que los grupos funcionales tengan posibilidad de
interacción. Para las proteínas que constan de una sola cadena polipeptídica (carecen de
estructura cuaternaria), la estructura terciaria es la máxima información estructural que se
puede obtener. A propósito de ésto, no todas las proteínas llegan a formar estructuras
terciarias. En estos casos mantienen su estructura secundaria alargada dando lugar a las
llamadas proteínas filamentosas, que son insolubles en agua y disoluciones salinas siendo por
ello ideales para las funciones de esqueleto.
La estructura cuaternaria: La representa el acoplamiento de varias cadenas polipeptídicas,
iguales o distintas que asociadas conforman un multímero, con propiedades distintas a las de
sus monómeros iniciales. En esta fase se modula la actividad biológica y la separación de
subunidades puede conducir a la pérdida de funcionalidad. En general las fuerzas que
mantienen estas cadenas son interacciones débiles, aunque en algunos casos la estructura
cuaternaria se mantiene unida por puentes disulfuro.

La secuencia de una proteína se determina con el ADN del gen que la codifica (o que codifica una
parte en el caso de una proteína con varias subunidades). Un cambio en la secuencia de ADN del
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gen puede modificar la secuencia de aminoácidos de la proteína. Incluso, cambiar tan solo un
aminoácido en la secuencia de una proteína puede afectar la estructura y la función generales
de la misma, cuando esto ocurre hablamos de MUTACIÓN.
Un ejemplo de ello es la mutación que desencadena la anemia falciforme. Una enfermedad
hereditaria que afecta los glóbulos rojos. En la anemia falciforme, una de las cadenas
polipeptídicas que conforman la hemoglobina, la proteína que transporta oxígeno en la sangre,
tiene un leve cambio en la secuencia. El ácido glutamico, que normalmente es el sexto
aminoácido de la cadena β de la hemoglobina (uno de dos tipos de cadenas de proteínas que
conforman la hemoglobina), es reemplazado por una valina.

Discusión:
En laboratorio, basándose en un sector particular de la hemoglobina del paciente que presenta
determinada composición de aminoácidos: VHLTPEEKSAVTALWGKVNV…
Se plantea reemplazarlos por otros aminoácidos para analizar los efectos que pudieran surgir.
Para la sustitución, se decidió: Sustituir A por G o H, sustituir K por R o D, sustituir S por T o P,
sustituir V por L o K.
Para la correcta interpretación de este análisis, debió primero clasificarse a los aminoácidos en
sus grupos y determinar sus cargas.

LETRA AA AMINOÁCIDO GRUPO

T TREONINA R POLAR SIN CARGA
P PROLINA R APOLAR ALIFÁTICO
E GLUTAMATO R CARGADO -
E GLUTAMATO R CARGADO -
K LISINA R CARGADO +
S SERINA R POLAR SIN CARGA
A ALANINA R APOLAR ALIFÁTICO
V VALINA R APOLAR ALIFÁTICO
T TREONINA R POLAR SIN CARGA
A ALANINA R APOLAR ALIFÁTICO
L LEUCINA R APOLAR ALIFÁTICO
W TRIPTÓFANO R AROMÁTICO
G GLICINA R APOLAR ALIFÁTICO
K LISINA R CARGADO +
V VALINA R APOLAR ALIFÁTICO
N ASPARGINA R POLAR SIN CARGA
V VALINA R APOLAR ALIFÁTICO
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En la sustitución, se pudieron observar algunas interacciones predominantes.

Al reemplazar la Alanina por la Glicina, ambas pertenecientes al grupo R apolar alifático, no hubo
cambios significativos. Al ser sustituida por Histidina, se encontró que puede presentar cambios
en su estructura debido a que esta última está cargada positivamente.
Cuando se sustituyó la Lisina por la Arginina, dos aminoácidos pertenecientes al grupo R con
carga positiva, no hubo alteraciones. Asimismo, cuando se reemplazó por Aspartato, se observó
que, debido a la carga negativa de este último, sus cargas se repelen; obstaculizando su enlace.
Se observó que es incompatible la interacción entre la Serina (polar sin carga) y la Prolina (del
grupo R alifático apolar) dada la composición estructural de la última mencionada. Se trata de
una molécula cíclica que no puede desprotonarse, dificultando su interacción con otros
aminoácidos de la secuencia.

Cada aminoácido tiene un grupo carboxilo, que es un ácido débil, y por lo tanto puede estar
protonado o desprotonado dependiendo del pH. Al ser un ácido débil, su pKa es a pH bajo. Por
otro lado, tenemos el grupo amino que es una base débil y también estará protonada o
desprotonada según el pH en que se encuentre. Al ser una base débil tendrá un pKa a pH alto.
En tanto se observó que si realizamos una curva de titulación de un aminoácido, tendremos dos
zonas de amortiguación, y dos pKa, correspondientes al grupo carboxilo, y otro a la del grupo
amino. Si presenta 3 zonas de amortiguación, es porque tenemos un grupo carboxilo o amino en
el grupo R.
Se estudió que el orden de reacción en la curva de titulación, será primero el grupo carboxilo y
luego el grupo amino, esto se debe a que reacciona siempre primero el que tiene el pKa más
bajo, que será quien se desprotone primero.
A modo de ejemplo, se utilizó el aminoácido GLICINA, perteneciente al grupo R apolar alifático,
para representar en la curva de titulación los fenómenos observables al exponerlos a un pH
ácido.
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A pH ácido la Glicina se encuentra como un ácido diprótico, ya que tanto el grupo amino
como el carboxilo se encuentran protonados, es decir, a pH = 1, el 100% de las moléculas de
aminoácido se encuentran en forma de catión. Al añadir equivalentes de base, el grupo carboxilo
(-COOH) se disocia, cediendo protones al medio y transformándose en un grupo carboxilato;
este equilibrio viene descrito por el pKa1. Cuando pH = pKa, la glicina se encuentra como 50%
catión + 50% ion dipolar. Por lo tanto, el par -COOH/-COO- puede servir como un tampón
amortiguador en la región de pH cerca del valor pKa1. En el pI, el 100% del aminoácido se
encuentra como ion dipolar, de forma tal que el aminoácido presenta una carga neta nula (el
aminoácido es eléctricamente neutro).

En conclusión:
Consideramos haber incorporado los conceptos de aminoácido, proteína, sustitución, mutación,
comprendido así mismo la reacción de los aminoácidos a pH determinado y los puntos clave
para plasmar y leer adecuadamente la curva de titulación.

Bibliografía consultada:

1 Luque Guillen MV. Universitat de València [Internet]. Estructura y propiedades de las

proteínas;
[consultado el 22 de abril de 2023]. Disponible en:
https://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
2 Química Bio-Orgánica ITS Paysandú CD; 2020. Disponible en:
https://uruguayeduca.anep.edu.uy/sites/default/files/inlinefiles/4%20E
structura%20y%20funciones%20de%20las%20proteínas.pdf
3 Fiñana IT. 26. Aminoácidos [Internet]. Uco.es. [citado el 27 de abril de 2023]. Disponible en:
http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-mol/pdfs/26aminoacidos.pdf
4 Khan Academy. [citado el 27 de abril de 2023]. Disponible
en: https://es.khanacademy.org/science/biology/macromolecules/proteins-and-
aminoacids/a/orders-of-protein-structure
5 Studocu.com. [citado el 29 de abril de 2023]. Disponible en:
https://www.studocu.com/latam/document/instituto-politecnico-nacional/bioquimica/practica4-
curvas-de-titulacion-de-aminoacidos/12584689/download/practica-4-curvas-de-titulacion-
deaminoacidos.pdf
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ÍNDICE:

PÁGINA 1 PORTADA
PÁGINA 2 INTRODUCCIÓN
PÁGINA 2 PRESENTACIÓN Y OBJETIVOS
PÁGINA 4 MARCO TEÓRICO
PÁGINA 4 DISCUSIÓN
PÁGINA 6 CONCLUSIÓN
PÁGINA 6 BIBLIOGRAFÍA