Organización del laboratorio de Microbiología

ÍNDICE

1. Normas del laboratorio.

2. Equipos y material del laboratorio.
3. Limpieza, desinfección y esterilización del material.
4. Medios de cultivo.
5. Toma de muestras.
1. Normas del laboratorio

1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio (Sólo uso en el laboratorio).

2. Cada estudiante debe tener un cuaderno de laboratorio, unipersonal e
intransferible. El alumnado debe anotar todas las prácticas realizadas, lo más
detalladas posible.

3. Queda totalmente prohibido comer o beber en el laboratorio. Como se trabaja con

microorganismos, hay que evitar llevarse las manos o el materias de escritura a la Cuaderno
boca (prohibido pipetear con la boca). de
laboratorio
4. Cada alumno/a tiene un lugar de trabajo y será encargado de la limpieza en todo
momento del mismo.

5. Es obligatorio el uso de guantes para manipular microorganismos. Se deben asegurar

las mejores condiciones de higiene y asepsia para trabajar (lavado de manos).
Procurar tener desinfectante cerca (etanol).
1. Normas del laboratorio

6. Queda totalmente prohibido sacar alguna muestra biológica del laboratorio.

7. Si ocurre un accidente de laboratorio hay que avisar al profesor/a que se encuentre
en el laboratorio.

8. Para la eliminación de residuos se utilizarán los bidones debidamente señalizados.

9. Precaución al utilizar el mechero Bunsen con guantes o material combustible cerca.
10. Utilización de guantes específicos cuando se utilice material o equipos a altas
temperaturas.
2. Equipos y material de laboratorio

2.1. Para medir:

Probetas

Vaso de
Pipetas precipitados

Balanza
Micropipetas
2. Equipos y material de laboratorio

2.2. Para mezclar: 2.3. Para siembra:

Agitador Vortex Placas de Petri

Tubos
Eppendorf
Tubo de ensayo

Matraz
Erlenmeyer Asa de Digralsky

Asas siembra
2. Equipos y material de laboratorio

2.4. Funciones varias:

Mechero Bunsen

Microscopio Portaobjetos y
cubreobjetos

Autoclave
Incubadora

Campana de flujo
laminar
2. Equipos y material de laboratorio

Mechero Bunsen
❖ Es un instrumento utilizado con el
fin de calentar, esterilizar o realizar
la combustión de muestras o
reactivos químicos.
❖ La llama que produce es
regulable, ajustan la mezcla de gas y
oxígeno.

❖ Podemos distinguir dos tipos de

llama: Luminosa, de color
anaranjado, producida por
combustión incompleta; y no
luminosa, de color azulado,
producida por combustión completa.
Partes ❖ Usos: Medios de cultivo, asas de
siembra, fijación, ambiente estéril, Tipos de
etc. llama
❖ Precauciones: Trabajo con
guantes, gas abierto.
2. Equipos y material de laboratorio

Campana de flujo laminar ❖ Es un instrumento utilizado con el fin de obtener

un ambiente de trabajo óptimo, libre de
contaminación.
❖ Filtros HEPA: Partículas < 0.3 micras, eficacia
99.97%.
❖ Bioseguridad: 4 niveles.

❖ Requiere esterilización (superficial) del área de

trabajo con luz UV y trabajar con material
esterilizado o más desinfectado posible.

Horizontal Vertical
3. Limpieza, desinfección y esterilización del material

Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado donde

se puede trabajar con microorganismos. Por lo tanto, el
ambiente de trabajo debe ser idóneo, en las mejores
condiciones de asepsia. Se requiere una zona de trabajo
limpia y ordenada.

Limpiar ≠ Desinfectar ≠ Esterilizar

❖ Limpiar: Proceso para eliminar la materia orgánica, los microorganismos u otras sustancias que queden adheridas a
los materiales de trabajo. Se realiza con agua y jabón (u otro detergente).

❖ Desinfectar: Eliminación parcial de microorganismos de superficies. Puede realizarse con diferentes productos:
cloruro diluido (lejía), alcohol, compuestos de amonios cuaternarios, etc.

❖ Esterilización: Proceso complejo que garantiza la eliminación total de microorganismos, células vegetales y esporas.
3. Limpieza, desinfección y esterilización del material

❖ Importante diferenciar si el material es de vidrio o de plástico (no se puede esterilizar).

❖ Importante saber si el material contiene o no microorganismos (medios de cultivo, portaobjetos, etc.)

3. Limpieza, desinfección y esterilización del material

Calor seco vs. Calor húmedo

❖ 170 °C durante 2h. ❖ 121 °C durante 15 min.

❖ Desnaturalización de ❖ Penetra más rápido en las

proteínas. vs. células, por la conducción del
calor en el agua.
❖ Rotura de puentes de
hidrógeno. ❖ Mayor presión, mayor
velocidad de las partículas.

Flamear

Quemar
3. Limpieza, desinfección y esterilización del material

Factores que influyen en la velocidad de destrucción de microorganismos

1) Temperatura: Los microorganismos 2) Naturaleza: Célula vegetativa o

mueren rápidamente cuando se someten
a temperaturas elevadas.
esporas. Microorganismos extremófilos.
3) Medio ambiente: Las propiedades
físicas y químicas del medio interfieren:
pH, altas concentraciones de azúcares,
salinidad, etc.
3. Limpieza, desinfección y esterilización del material

Autoclave. Partes

❖ 121 °C y 1 atm durante 15

min.

❖ Penetra más rápido en las

células, por la conducción del
calor en el agua.

❖ Mayor presión, mayor

velocidad de las partículas.

2) Válvula de autorregulación: Permite

la salida de vapor manteniendo la
presión en el interior.

3) Purga de aire: Permite la salida de

aire de dentro del autoclave para bajar la
presión.
3. Limpieza, desinfección y esterilización del material

Autoclave. Protocolo
3. Limpieza, desinfección y esterilización del material

Resumen. Métodos de desinfección y esterilización

1) Métodos físicos: 2) Métodos químicos:

❖ Calor seco: Horno Pasteur, mechero ❖ Antisépticos: Alcohol.

Bunsen.
❖ Desinfectante: Cloro o lejía.
❖ Calor húmedo: Autoclave, ebullición,
pasteurización (60 °C, 30 min / UHT 92 °C, ❖ Gases: Óxido de etileno, aldehídos.
12 seg.)

❖ Filtración: Filtros (Millipore).

❖ Radiaciones: Ionizantes (gamma) para

esterilizar y no ionizantes (UV) para
desinfectar.
4. Medios de cultivo
4. Medios de cultivo

Componentes

❖ Fuente de carbono: Azúcares (glucosa,

sacarosa, etc).

❖ Fuente de nitrógeno: Peptonas (mezcla

de aminoácidos y péptidos).

❖ Otros componentes: Agua, agar,

minerales, vitaminas, etc.

❖ Amortiguadores del pH: solución

tampón o buffer que ayuda a mantener el
pH del medio (fosfatos monosódico o
disódico).
4. Medios de cultivo

Clasificación
❖ Nutritivos: Permiten el crecimiento de la mayoría
de microorganismos, son generales (PCA, TSA,
Sabouraud, Yeast).

❖ Enriquecimiento: Contienen componentes

adicionales para permitir el crecimiento de
microorganismos exigentes (agar sangre, agar
chocolate).

❖ Selectivos: Presentan algún componente que

impide el desarrollo de microorganismos no deseados
(MacConkey, MRS, Lisina).
* Lisina impide el crecimiento de Saccharomyces
cerevisiae.

❖ Diferenciales: Contienen sustancias que ponen de

manifiesto alguna característica de la especie o grupo
microbiano (Fermentadoras de lactosa).
4. Medios de cultivo

Preparación

1) Pesar.

2) Reconstituir en agua destilada

(Ajustar el pH en caso de que sea
necesario).

3) Esterilizar en autoclave.

4) Fraccionar en placas o tubos de

ensayo (45 – 50 °C y cerca del mechero
Bunsen).

5) Almacenar en refrigeración (4 °C) con

el medio en la parte de arriba.
5. Toma de muestras

❖ Representación de la muestra.

❖ Error de muestreo (homogeneizar).

❖ Debe reducirse al mínimo las posibilidades de

contaminación (recipientes estériles, muestreo).

❖ Debe de realizarse por duplicado (250 mL en mosto o vino).

❖ Se debe de tomar una muestra representativa del original.

❖ Agilizar el procesado de las muestras o almacenarlo en

condiciones que no permitan su deterioro.