MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN

DE MICROORGANISMOS
Gabriela Méndez
 Componentes de un análisis
microbiológico

Muestreo: Se debe realizar Método analítico: Se

de forma adecuada pueden emplear diversos Interpretación de
siguiendo protocolos métodos analíticos, resultados: Para ello se
establecidos. Obteniendo eligiendo el más sensible debe saber el significado
muestras estadísticamente para detectar lo que se de los microorganismos.
significativas. quiere.

IDENTIFICACIÓN
Principales características aplicadas en
identificación bacteriana
Morfológicas
-Fácil de estudiar y
analizar.
-Características
estructuras.
-Microscopio de
transmisión y de barrido.

1) Clásicas
2) Moleculares
Seis “Is”
Muestra en medio
Inoculación sólido o líquido. Asa,
hisopo, jeringa.

Ambiente
Incubación controlado

Aislamiento Colonias aisladas

(Isolation) puras: estriación.

Macroscópicas y
Inspección microscópicas

Test adicionales:
Recopilación bioquímicas,
de información inmunológicas,
genéticas.

Nombre o identidad
microorganismo.
Identificación Claves, algoritmos,
tablas.
Estudio morfológico

Circular form.
Staphylococcus
aureus cultivated
on trypticase soy
agar

Examen microscópico de
células vivas y de frotis
teñidas por tinción gram.
 Recopilación de información No significan de ninguna
Métodos basados en pruebas manera un estudio profundo del
bioquímicas metabolismo bacteriano.
Pruebas simples que evidencian en forma rápida:
◦ Una determinada actividad enzimática.
◦ Grupo de enzimas o determinada vía
metabólica.
◦ Crecimiento en presencia de inhibidores, etc.
DETERMINACIÓN DE REALIZACIÓN DE REALIZACIÓN DE
CARACTERÍSTICAS PRUEBAS PRIMARIAS PRUEBAS
NUTRICIONALES: (FAMILIA, GÉNERO): SECUNDARIAS Y
AUTÓTROFO, CATALASA, TERCIARIAS
HETERÓTROFO, ETC. OXIDASA, (ESPECIE):
FERMENTACIÓN DE COAGULASA,
LA GLUCOSA, PRODUCCIÓN DE
PRESENCIA DE ENZIMAS.
ENDOSPORAS,
MOVILIDAD,
AEROBIOSIS,
ANAEROBIOSIS.

Nota: Aún bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en

dos especies diferentes en base a pruebas bioquímicas.
 Pruebas bioquímicas según tipo de ensayo

https://www.youtube.com/watch?v=L8Tfvzs0KjI
 Catalasa

Micrococos/Estafilococos Estreptococos/Enterococos

Micrococcus Estafilococos 𝛽 𝖺 𝛾
Medio
Oxidasa (-) Bacitracina Optoquina
Oxidasa (+) NaCl
Bacitracina (S) Bacitracina (R)
Furazolidona (R) Furazolidona (S) R S R S R S

Grupo B Grupo A S. S. Bilis

pneumoniae No Esculina
Coagulasa viridans Enterococos
S. S.
agalactiae pyogenes Enterococos

Fermentación de Manitol
Grupo D

Novobiocina E.
S. aureus
faecalis
R E.
S
faecium
S. saprophyticus S. epidermidis Tusa, 2022
 Test de la catalasa
Enzimas capaces de reaccionar con el
oxígeno.
Oxidación flavoproteinas por oxígeno =
peróxido de hidrógeno y acumulación
radicales libres tóxicos de O2
(superóxido).
Acumulación de superóxidos se
previenen por: enzima superóxido
dismutasa .
Acumulación de peróxido de hidrógeno
se previene por: enzima catalasa.
Test de la coagulasa
- Permite determinar la capacidad de coagular el plasma por la
acción de la enzima coagulasa.
- Coagulasa reacciona con el fibrinógeno del plasma.
- Se utiliza para diferenciar S.aureus (coagulasa positivo) de otras
especies de Staphylococcus.
- La prueba de la coagulasa en tubo se puede leer tras incubación
de 4h, pero si es negativa debe incubarse hasta 24h.
 Bacilos Gram Negativo

MacConkey MacConkey

Lactosa (+) Lactosa (-)

Pruebas Bioquímicas Pruebas Bioquímicas

Urea (+) Urea (+)

Citrato (+) Glucosa (+)
Lisina (+)
Oxidasa
Rápido Lento

Pseudomonas Enterobacter
Klebsiella spp Vibrio
Citrobacter
Escherichia spp Campylobacter Shigella
Serriata
Enterobacter spp Salmonella
Proteus
Test de la oxidasa
Los citocromos son hemoproteínas que contienen hierro y que actúan
como último eslabón en la cadena de respiración aeróbica transfiriendo
electrones al oxígeno con la formación de agua.
El sistema de citocromos lo poseen los organismos aeróbicos facultativos
por lo que la prueba de la oxidasa es importante en la identificación de N,N-Dimetil-p-
aquellos organismos en los que falta la enzima, o son anaerobios. fenilendiamina: donante de
Evalúa habilidad de la bacteria de producir citocromo oxidasa, por medio electrones, enzima oxidasa.
de la adición de un sustrato que dona electrones y por tanto se oxida, en oxida (+), reduce (-).
la presencia de oxidasa y oxigeno libre.

Positivo Negativo
Pseudomonas aeuruginosa E. coli

Salmonella

Staphylococcus aureus

Streptococcus pneumoniae
Batería (conjunto de pruebas
bioquímicas)
◦ TEST DEL CITRATO
◦ TEST DEL TSI
◦ TEST DE LA UREASA
◦ TEST DE SIM
 Citrato test
◦ Agar Citrato de Simmons
◦ Uso de carbono como única fuente de carbono. Citrato
permeasa-piruvato.
◦ Azul de bromotimol , es verde a pH 6.9 y azul a pH 7.6.
◦ Fosfato de amonio a amonio (NH3) e hidróxido de
amonio = alcalinizan el agar.
 Esta actividad enzimática es característica
de todas las especies de Proteus.

Prueba de la ureasa Helicobacter pylori y Brucella spp. también

hidrolizan la urea.

- Producir y excretar la enzima ureasa.

- Hidroliza urea a amonio y dióxido de
carbono.
- Rojo fenol indicador de pH: medio rosado si
microorganismo produce ureasa.
 Test de indol, movilidad y
reducción de sulfuro
(SIM)
◦ Caseina-triptófano, hierro, azufre en forma de tiosulfato
de sodio.
+-+
◦ Producir indol, piruvato y amonio por la enzima SIM
triptofanasa.
◦ Reactivo de Kovacs (dimetilaminobenzaldehido y
acido clorhídrico disuelto en alcohol amílico): forma
una capa sobre el medio, reacciona con el indol y
forma un compuesto de quinona, que vuelve el
reactivo rojo.
PRUEBA DE TSI (THREE SUGAR
IRON)
Glucosa (0,1%), Lactosa (1%), Sacarosa
(1%).

1) Fermentación azúcares: ácidos.

Indicador rojo fenol: rojo a amarillo.

2) Uso de Peptona (parte inclinada):

residuos amoniacales = rojo.

3) Gas

4) Sulfuro de hierro (color negro medio): tiosulfato por

tiosulfato reductasa + sales de metales pesados Fe.
PRUEBA DE TSI (THREE SUGAR IRON) K/K NC/NC K/A A/A K/A + H2S

G
INTERPRETA
CIÓN
BATERIA
Pruebas bioquímicas
API Listeria
API NH (Neisseria - Haemophilus)
API 20 C (para levaduras del género Candida).
API 10S, versión miniaturizada del API 20E.
• SISTEMAS COMERCIALES/GALERIA MULTIPRUEBA

Utilizan modificaciones de las pruebas bioquímicas Emplean códigos numéricos para la interpretación
convencionales con medios listos para sembrar. de los resultados.

API 20E Las tiras se incuban a 37° C y

Analytical Profile Index
Identificación de bacterias Gram
negativas
por efecto del metabolismo
bacteriano se van a producir
cambios de color
espontáneamente o al añadir
los respectivos reactivos.

Limitación: cepas
Lectura de las reacciones: comparación con
mutantes
una tabla de lectura donde se indica si los
microorganismos deben considerarse (plásmidos) =
positivos o negativos para cada reacción características
según el color aparecido. diferentes.
+

-
https://www.youtube.com/watch?v=5pw
W-itDd7k
RESUMEN
rESUMEN
RESUMEN
 Laboratorio virtual pruebas
bioquímicas
◦ Ingresar al link: https://learn.chm.msu.edu/vibl/index.html
Laboratorio virtual pruebas
bioquímicas
Referencias
◦ D. Sandín, G. Algorta (2003). Métodos de estudio de bacterias y virus.
◦ Leboffe, M, Pierce, B (2011). A Photographic Atlas for the Microbiology Laboratory
(Inglés) 4th Edición.