PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

BIOQUÍMICA BASICA
LABORATORIO Titulación de aminoácidos
Objetivos
1. Conocer el fundamento teórico de una titulación potenciométrica
2. Identificar las propiedades iónicas de los aminoácidos

Introducción
El grupo amino (NH2 ) y el grupo carboxilo (COOH) de todos los aminoácidos, al
igual que algunos de sus radicales (R), tienen la capacidad de ionizarse y adquirir
cargas positivas o negativas. De acuerdo con el pH en el que se encuentren, los
aminoácidos pueden estar en alguna de las tres formas iónicas: catiónica, en donde
la carga neta del aminoácido es positiva (+); aniónica, en donde la carga neta del
aminoácido es negativa (-); zwiterionica, en donde la carga neta del aminoácido es
cero (0). Esto se relaciona directamente con el valor del punto isoeléctrico del
aminoácido (pI). La posibilidad de cambiar la carga del aminoácido de acuerdo con
el pH del medio, permite que puedan ser separados utilizando técnicas como la
electroforesis y la cromatografía.
Las curvas de titulación permiten evidenciar el cambio en el pH de una solución, en
este caso, de una solución de aminoácido, en función de la adición de equivalentes
de una base (como el NaOH) o de un ácido (como el HCl). De esta forma, es posible
conocer los valores de pK para cada una de las especies iónicas, al igual que el
valor aproximado de pI.
En esta práctica, cada grupo realizará la curva de titulación de un aminoácido y
determinará a qué tipo de aminoácido corresponde.

Desarrollo experimental
Materiales:
1 pipeta graduada de 5 ml 1 probeta graduada de 20 ml

1 vaso de precipitados de 50 ml 1 micropipeta de 1000 microlitros

10 puntas azules para micropipeta 1 plancha de agitación

1 potenciometro 1 agitador magnético

Protocolo:
1. Preparación de la solución del aminoácido
- Seleccione uno de los aminoácidos disponibles, según orientación del
profesor.
- En una probeta de 20 ml, mida 5 ml de una solución de aminoácido 0.04M y
adicione 15 ml de agua.
- Transfiera los 20 ml de la solución del aminoácido a un vaso de precipitados.
- Utilizando un potenciómetro, mida y registre el pH inicial de la solución.
- Adicione alícuotas de HCl (0.2 M), hasta ajustar el pH de la solución a 1.6.

2. Titulación
- Tome los 20 ml de la solución del aminoácido de pH 1.6. Confirme y registre
el valor inicial de pH.
- Con ayuda de una micropipeta, adicione una alícuota de 0.5 ml de NaOH
(0.1M) y mida en el potenciómetro el nuevo valor de pH.
- Adicione una nueva alícuota de 0.5 ml de NaOH y registre el nuevo valor de
pH.
- Repita el proceso de adición de alícuotas hasta que el pH sea
aproximadamente 11.7
- Haga una nueva titulación (partiendo desde el punto 1), para tener una réplica
del experimento.
- Elabore una tabla de resultados con la siguiente información:

ml NaOH adicionados Réplica1 pH 1 ml NaOH adicionados Réplica2 pH 2

Análisis de los resultados

a. Elabore una gráfica utilizando los datos de la tabla elaborada. En el eje X
ubique los ml de NaOH agregados en cada adición y en el eje Y ubique el
valor de pH correspondiente.
b. En la gráfica, identifique los valores de pK, para el aminoácido titulado.
c. Identifique el valor de pI del aminoácido titulado.
d. De acuerdo con los resultados obtenidos y la literatura reportada, indague
cuál es el aminoácido que tituló.
e. Dibuje las diferentes especies iónicas del aminoácido titulado.
f. Explique la importancia de la capacidad ácido-base de los aminoácidos.
g. Indague sobre cómo utilizar las técnicas de electroforesis y cromatografía,
para separar aminoácidos.
Referencias
Nigan Arti, Ayyagari Archana, Lab Manual in Biochemstry, Inmunology and Biotechnology,
Tata McGraw-Hill Publishing Company Limited, 2007, pp. 190-191