Bioquímica – Inmunología y Nutrición Normal

IUCS – Fundación H. A. Barceló

Carrera: Medina

2023

Biomarcadores-
Enzimas séricas
BIOQUÍMICA – INMUNOLOGÍA Y NUTRICIÓN NORMAL

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Carrera: Medina
Biomarcadores
Enzimología Clínica
 Introducción
Biomarcador es una prueba clínica de laboratorio que es útil para detectar disfunción de un órgano. Son
cambios medibles y pueden ser bioquímicos, fisiológicos o morfológicos.
En la práctica clínica el estudio de las enzimas séricas es muy importante para el diagnóstico, control
y comprensión de una gran variedad de patologías. Por ejemplo, la detección de altos niveles de amilasa
sérica contribuye al diagnóstico de pancreatitis o parotiditis.
Las enzimas séricas, presentes en el plasma, pueden tener o no función en ese medio. En este sentido,
se las clasifica como funcionales o no funcionales.
Algunas enzimas tienen amplia distribución tisular, mientras que otras son específicas de un determinado
tejido. Esta mayor o menor especificidad es importante para el diagnóstico. Una vez en el plasma cada
enzima sufre un proceso de depuración que le es característico y por lo tanto resulta de gran utilidad
conocer cuál es su vida media.

 Clasificación
Las enzimas que se encuentran en el plasma pueden dividirse para su estudio en dos grupos: enzimas
funcionales y enzimas no funcionales.
Las enzimas funcionales tienen una función definida y específica en este medio, por lo que el plasma
constituye su sitio normal de acción, y su concentración plasmática es equivalente o mayor que la del
tejido donde se producen. A este grupo pertenecen la seudocolinesterasa, ceruloplasmina,
lipoproteinlipasa, así como las enzimas que intervienen en la coagulación. La determinación de la
actividad de estas enzimas tiene interés clínico en la evaluación tanto de la función propia de la enzima
en el estudio como de la función del tejido que la produce.
Las enzimas no funcionales del plasma no tienen una actividad conocida en este medio, ya sea porque
no dispone de la cantidad necesaria de sustratos, cofactores o activadores a nivel plasmático, o porque
su concentración plasmática es considerablemente menor que los niveles titulares. Sin embargo,
normalmente existen niveles circulantes detectables de la mayoría de las enzimas no funcionales
debido a la renovación celular natural o pequeños traumatismos espontáneos. Su presencia en plasma en
niveles más altos de lo normal sugiere un aumento en la velocidad de destrucción celular y tisular. La
determinación de estos niveles de enzimas plasmáticas puede proveer información valiosa para
diagnóstico y pronóstico. Sin embargo, niveles elevados de enzimas en plasma no sólo pueden ser
interpretados como evidencia de necrosis celular, ya que existen ejemplos donde dicho aumento puede
deberse a un cambio en la permeabilidad de la membrana celular, como ocurre en músculo ante la
realización de ejercicio vigoroso.
Un aumento en la permeabilidad de la membrana plasmática de diferentes tejidos puede conducir a la
liberación de enzimas a la circulación general. Algunas de las enzimas que corresponden a este grupo
son: aspartato aminotransferasa (ASAT) o glutámico-oxalacético transaminasa (GOT), alanina amino
transferasa (ALAT) o glutámico pirúvico transaminasa (GPT), lactato deshidrogenada (LDH),
creatínquinasa (CK), amilasa, y-glutamiltranspeptidasa (y-GT), 5'nucleotidasa y aldolasa (ALS).

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 Enzimas séricas de uso clínico más frecuente

ENZIMA ORGANO O ENFERMEDAD DE INTERES

Fosfatasa ácida Carcinoma de próstata

Fosfatasa alcalina Enfermedades hepáticas y óseas
Amilasa Enfermedades pancreáticas
Transaminasa glutámico-pirúvico (GPT o Enfermedades hepáticas
ALAT)
Transaminasa glutámico-oxalacético (GOT o Hepatopatías y cardiopatías
ASAT)
Lactato deshidrogenasa (LDH) Hígado, corazón y eritrocito
Creatina quinasa (CK) Corazón, músculo y cerebro
5'nucleotidasa y aldolasa (ALS) hepatopatías
Gama-glutamiltranspeptidasa (γ-GT), hepatopatías
Aldolasa Músculo, corazón
Arginasa hepatopatías
Elastasa Enfermedades del colágeno
Seudocolinesterasa Hígado (intoxicaciones)
Plasmina coagulopatías
Lipasa Páncreas

Fundamentos clínicos para la evaluación de las enzimas:

Enzimas Plasmoespecíficas: Este grupo de enzimas son sintetizadas fundamentalmente por el hepatocito
y son muy activas en el plasma (a diferencia de otras que si están aumentadas indican daño). Entonces de
este grupo de enzimas nos interesa saber sus valores inferiores; porque una disminución de su actividad
(normalmente alta en suero) indica una alteración en la síntesis, y como la mayoría son producidas en el
hígado esto nos estaría indicando una alteración de la funcionalidad hepática.

Enzimas NO plasmoespecíficas:
Enzimas secretadas o exocitoenzimas Son enzimas secretadas por glándulas ó tejidos muy especializados,
su lugar de acción está alejado, es el caso de las enzimas digestivas segregadas por el páncreas y que van al
duodeno a ejercer su acción, como por ejemplo la amilasa, lipasa, tripsina, etc. Clínicamente, estas enzimas
en sangre están en baja actividad. Aumentarían sus niveles en la patología aguda como la pancreatitis y en
casos de patología crónica, donde la glándula está hipofuncionante, por lo que su actividad estaría disminuida
en su lugar de acción; en este caso en duodeno.

Enzimas celulares o endocitoenzimas Son todas las enzimas que tienen su lugar de acción dentro de la misma
célula que las sintetiza, no tienen acción en plasma por falta de sustrato y de coenzima.
Se dividen es 2 grupos:
Ubicuas: Son todas las que intervienen en el metabolismo general como por ejemplo LDH, ALT o Alanina-
aminotransferasa, AST o Aspartato-aminotransferasa. A estas enzimas se las denomina comúnmente transaminasas
y su otra sinonimia es GPT y GOT.
Organoespecíficas: Enzimas específicas de determinados órganos ó tejidos que actúan en procesos metabólicos
específicos de ciertos tejidos. Por ejemplo la GLDH,

Características generales de algunas biomarcadores y enzimas séricas frecuentementeutilizados:

Mioglobina (Mb)
La Mioglobina es una hemoproteína que se encuentra en el citoplasma de músculo esquelético y cuya
función es almacenar oxígeno. Ante un daño en miocardio o musculo esquelético se elevan sus niveles
en plasma.
En el infarto agudo de miocardio se produce una elevación precoz a las 2-3 hs de comenzado el evento,
se observa un valor máximo entre las 6 y 12 hs, regresando a los valores de referencia a las 24-32 hs.
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Troponinas cardíacas
Actualmente se acepta a las troponinas como marcadores tempranos confiables para la detección de
episodios isquémicos de miocardio y el posterior monitoreo del paciente.
Existen tres tipos de Troponinas (Tn); TnC: une calcio, Tn I: inhibidor de la actividad de ATPasa de la
miosina y TnT: fija a complejo proteico de troponinas a la tropomiosina.
La TnI presenta tres isoformas, una de ellas es específica de miocardio, aumenta en sangre en las
primeras 4 hs luego de establecida la isquemia, realiza un pico máximo entre las 14-24 hs y permanece
elevada 3 a 5 días posteriores al infarto.
La TnT presenta 3 isoformas, la TnT tipo 2 es un marcador cardíaco específico, aumenta dentro de las
primeras 4 hs de producido el infarto, alcanza un pico máximo a las 72 hs y permanece elevada durante
7 a 14 días. La medición de TnI y TnT es un biomarcador sensible y específico.

Péptido Natriurético
La familia de péptidos natriuréticos consiste en 3 péptidos:
ANP péptido natriurético atrial
BNP péptido natriurético cerebral, se encuentra en SNC pero más en ventrículos cardíacos.
CNP péptido natriurético tipo C
Ante un estiramiento excesivo de las fibras cardíacas aumenta en sangre el BNP, para disminuir la
retención de agua y sal. Los pacientes con alteraciones cardíacas congestivas tienen concentraciones
plasmáticas elevadas de ANP y BNP. Elevados valores de BNP indican baja supervivencia a largo plazo.
Los pacientes con EPOC que presentan valores elevados de BNP tienen un peor pronóstico.

Lactato deshidrogenasa (LDH)

La enzima LDH cumple su función en el metabolismo anaeróbico de la glucosa en una gran cantidad
de tejidos. Está constituida por cuatro subunidades que se combinan dando cinco tipos distintos de
isoenzimas. Los niveles séricos aumentados de LDH son característico de: anemias megaloblásticas,
infarto de miocardio y pulmonar, anemias hemolíticas, leucemias, carcinomas, etc. El gran número de
situaciones donde se observa aumento de la actividad de LDH, hace relativa su utilidad diagnóstica.
Un aumento de los niveles plasmáticos de LDH se observa a partir de las 6-12hs del comienzo de infarto
de miocardio, observándose un pico a los 4 días. Sin embargo, es importante destacar que porsí sola,
la determinación de LDH no es determinante de lesión de ningún órgano en particular. Sin embargo, es
muy útil en el seguimiento de pacientes en tratamiento del cáncer con quimioterapia, puesto que la
respuesta a la terapéutica se acompaña por una disminución del nivel sérico de esta enzima.
Hay que tener en cuenta que es necesario evitar la hemólisis de la muestra de sangre para evitar falsos
positivos, debido a la gran cantidad de LDH presente en los eritrocitos (110 veces mayor que en plasma).

Transaminasas
Las enzimas transaminasas intervienen en el metabolismo de los aminoácidos, están ampliamente
distribuidas en los distintos tejidos, pero abundan fundamentalmente en músculo e hígado.
La Glutámico Oxalacético Transaminasa (GOT o ASAT) es una transaminasa bilocular, utilizada como
marcador de hepatitis y neoplasias hepáticas. También aumenta en isquemia miocárdica, aumentando
después de las 24 hs de ocurrido el infarto, con un pico a los 2 días.
La Glutámico Pirúvico Transaminasa (GPT o ALAT) es una transaminasa de actividad citosólica.
Valores séricos muy elevados se observan en hepatitis aguda de origen viral o tóxica, siendo losvalores
de GPT mayores a los de GOT. Los niveles de GPT pueden dar aumentados incluso antes de que se
observen signos clínicos de hepatitis. En enfermedades crónicas hepáticas como hepatitis C y Cirrosis,
se observan aumentos moderados.

Fosfatasas
Fosfatasa alcalina: es una enzima no específica cuyo pH óptimo de actividad enzimática se encuentra
entre 9 a 10. Presenta isoenzimas que se caracterizan por distinta localización tisular y diferentes
temperaturas de actividad óptima.
La fosfatasa alcalina de origen óseo constituye el 50% de la actividad normal total plasmática, por tal
motivo los valores de referencia en niños son mayores que en los adultos. Aumenta drásticamente (10
a 25 veces el valor de referencia de Fosfatasa Alcalina Total) en enfermedades óseas en las que aumenta
la actividad de los osteoblastos, es termolábil (se destruye a 56ºC en 10 minutos).
La isoenzima de células epiteliales de canalículos biliares representa el 10% de la actividad enzimática
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total normal en plasma, en ictericias obstructivas por litiasis o cáncer de cabeza de páncreas, aumentan
de 10 a 12 veces los valores de referencia.
La isoforma de origen hepático representa un 25% de la actividad total normal en plasma. Un aumento
moderado de 2 a 3 veces los valores de referencia se observa en las enfermedades hepáticas como
hepatitis viral, alcohólica o carcinoma hepatocelular.
La FAL sérica tiene varios orígenes (hígado, riñón, placenta, intestino, huesos, leucocitos), aunque
las fuentes más importantes son el hígado, los huesos y el intestino. Durante el crecimiento, los niveles
séricos son altos debido al aumento de la fracción ósea, que traduce la actividad osteoblástica en el hueso.
Lo mismo ocurre durante el embarazo, sobre todo en el tercer trimestre, en el que las elevaciones se deben
a fosfatasa alcalina de origen placentario.
Fosfatasa ácida: se denomina así por presentar valores de actividad óptima en un rango de pH entre 4
y 6. Se encuentra en células prostáticas, glóbulos rojos, plaquetas y glóbulos blancos. Aumenta en cáncer
de próstata dando valores muy elevados en caso de metástasis ósea. Debido a que las células sanguíneas
presentan la enzima, es importante que no se produzca la hemólisis de la muestra.

Creatina quinasa (CK o CPK)

Es una enzima bilocular de células musculares y nerviosas, interviene en los procesos de obtención de
energía. Presenta tres tipos de isoenzimas. Los valores séricos de referencia son mayores en hombres
que en mujeres por presentar mayor masa muscular. Un aumento de los niveles totales séricos se observa
en infarto de miocardio, miopatía, distrofia muscular y ACV. Para el diagnóstico diferencial es
importante la medición de las isoenzimas.

 Distribución tisular de las enzimas.

En términos muy generales, las diferencias en el contenido enzimático son puramente cuantitativas, es
decir, las mismas enzimas están presentes en su mayoría en diversos tejidos, pero sus actividades
relativas muestran grandes diferencias de órgano a órgano.
Por lo tanto, el mapa enzimático es la descripción de un órgano en términos de su contenidoenzimático.
El mapa enzimático tisular está constituido, por la cantidad de cada una de las distintas enzimas que
contienen todas las células de un determinado órgano. Tanto en condiciones normales como patológicas,
esto se ve reflejado en un mapa enzimático sérico (presencia en el suero de las enzimas presentes en
un órgano). Su determinación es de vital importancia en la clínica, ya que facilita el diagnóstico y es de
fácil accesibilidad.
La medida de los diversos mapas enzimáticos séricos, por su parte, constituye el intento de lograr la
especificidad bioquímica de los diferentes órganos. Cuanto mayor sea la cantidad de enzimas que se
determinen, más completo será el mapa y mejor podrá determinarse el cuadro patológico.
Aunque desde el punto de vista biológico son muchas las enzimas objeto de atención, el interés clínico
se centra en el estudio de aquellas cuyas variaciones son patognomónicas, es decir, indicadoras de
enfermedad o, por lo menos, de determinadas alteraciones funcionales.
Existen enzimas llamadas isoenzimas que son proteínas que difieren en la secuencia de aminoácidos
pero que catalizan la misma reacción, estando presentes en la misma especie. Estas enzimas poseen
diferentes propiedades físicas y químicas (punto isoeléctrico, especificidad de sustrato y cofactor, etc.),
suelen mostrar diferentes parámetros cinéticos (i.e. diferentes valores de KM), o propiedades de
regulación diferentes. La existencia de las isoenzimas permite el ajuste del metabolismo para satisfacer
las necesidades particulares de un determinado tejido o etapa del desarrollo, por lo tanto, su
diferenciación es importante a la hora de realizar un mapa enzimático para diagnóstico.
Por ejemplo, la creatina quinasa (CK) presente en el cerebro difiere fisicoquímicamente de sus
isoenzimas específicas de músculo cardíaco y esquelético. Asimismo, las isoenzimas pueden tener
distinta localización subcelular como por ejemplo la glutámico oxalacético transaminasa (GOT)
presente en mitocondria difiere de la citosólica. En cambio, las diferentes isoenzimas de la láctico
deshidrogenada (LDH) están presentes en compartimientos citosólicos.
Es adecuado determinar más de una enzima en el suero, por el hecho de no existir enzimas que
sean simultáneamente órgano específicas y lo suficientemente sensibles.
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 Características clínicas
La alteración del mapa enzimático sérico se correlaciona con distintas causas, entre ellas:
- Procesos inflamatorios: aparecen en plasma en primer término enzimas de bajo e intermedio
peso molecular (por ej.: en las hepatitis, encima de entre 40.000 a 140.000 Da).
- Lesión de la membrana celular: el nivel de enzimas en suero que se observa en una lesión es
generalmente proporcional a la magnitud de membrana celular afectada.
- Daños celulares: ante daños mínimos pasan a la sangre las enzimas citoplasmáticas y en caso
de daño extenso o más intenso, lo hacen las enzimas localizadas en las membranas de la
organelas (por ej.: glutámico deshidrogenasa (GLDH) mitocondrial).
- Factores que alteran la permeabilidad selectiva de la membrana celular: provocan la salida al
espacio extracelular de enzimas intracelulares. Los más conocidos son:
• Baja concentración de oxígeno (hipoxia).
• Alteraciones en la osmolaridad del medio.
• Agentes químicos (iodoacetato, cianuro, tetracloruro de carbono).
• Agentes físicos (pH, temperatura).
• Algunos virus.
Para los fines diagnósticos, una elevación de las enzimas celulares en el plasma es equiparable a una
lesión celular. Es importante tener en cuenta que las enzimas cuyos niveles aumentan en suero raramente
derivan de una necrosis celular, sino que lo hacen por un grado sucesivo de liberación debido a que la
biosíntesis enzimática se conserva mientras la célula vive. En los casos extremos de necrosis, después
de un breve lapso, las actividades en el suero disminuyen por falta de nuevos aportes debido a una
biosíntesis proteica considerablemente disminuida o nula.

 Depuración de enzimas plasmáticas no funcionales

Una vez en el plasma, la actividad de las diversas enzimas decrece con una velocidad característica para
cada una de ellas: tiempo de vida media.
Comparadas con otras proteínas del suero, las enzimas séricas poseen un tiempo de vida media muy
corto. Esto significa, por una parte, que sus actividades en el suero son representativas del curso temporal
de la lesión que les dio origen, y por otra, que, en las lesiones agudas, como por ejemplo el infarto de
miocardio, las determinaciones enzimáticas deben ser efectuadas según el tiempo transcurrido luego de
la lesión:

Enzima Vida media promedio

Transaminasa glutámico-pirúvico (GPT o 47±10 horas
ALAT)
Transaminasa glutámico-oxalacético t (GOT o 17±5 horas
ASAT)
Glutamato deshidrogenasa (GLDH) 18±1 horas
Lactato deshidrogenasa (LDH) 113±60 horas
Creatina quinasa (CK) 15 horas aproximadamente
Fosfatasa alcalina 3-7 días
Gama-glutamiltranspeptidasa (γ-GT), 3-4 días
Colinesterasa (CHE) 10 días aproximadamente
Amilasa 3-6 horas
Lipasa 3-6 horas

Existen diversas vías de eliminación de las enzimas del suero:

a- Eliminación renal: se cumple para aquellas de bajo peso molecular. Ej.: amilasa y algunas fosfatasas
b- Inactivación sérica: existen inactivadores o inhibidores para varias enzimas: Ej.: tripsina,
quimiotripsina.
c- Para algunas enzimas existe recaptación por parte de los tejidos convalecientes, al restablecerse
anatómica y fisiológicamente. Esta pequeñísima parte de las enzimas previamente liberadas sería
utilizada, no para su función primitiva, sino como integrante de un “pool” (reservorio) de aminoácidos.
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 Localización del lugar de la lesión
Se pueden utilizar distintos métodos:
Medida de biomarcadores o enzimas específicas de órgano: se designa como específicas de órgano
a las enzimas que se presentan con actividad relativamente alta en un determinado órgano o tejido. Por
lo tanto, sus niveles séricos aumentados indican con seguridad una lesión en este órgano. Por ejemplo,
la CK es prácticamente específica de músculo, la enzima sorbitol deshidrogenasa (SDH), y la enzima
glutamato deshidrogenasa (GLDH) son altamente específicas de hígado, en tanto que la lipasa lo es
de páncreas. El valor diagnóstico de la determinación de las enzimas específicas de órgano puede
aumentarse considerablemente por la determinación simultánea de la actividad de otras enzimas. Al
presentarse síntomas poco claros, sobre todo en casos de urgencia (ej.: infarto de miocardio, abdomen
agudo) tales mapas enzimáticos sirven para un rápido diagnóstico diferencial.

Discriminación de isoenzimas: la determinación de la actividad de varias isoenzimas es

metodológicamente más costosas que las medidas de la actividad total de una enzima. Sólo se emplea
a algunos casos particulares. Por ejemplo:
1.- Bajo la sospecha de carcinoma prostático, resulta de interés la determinación de la actividad de la
isoenzima de la fosfatasa ácida susceptible a inhibición por tartrato, ya que esta isoenzima es
específica de la próstata. En la actualidad se utiliza como biomarcador la determinación de PSA
(antígeno prostático específico).
2.- Las cinco isoenzimas de la LDH tienen el mismo peso molecular, pero difieren en la carga que
contienen. Esta diferencia es el principio de la determinación diferencial, que se realiza por separación
electroforética. La fracción con mayor movilidad hacia el ánodo (polo positivo) es la isoenzima de tipo
LDH-1 y la de menor movilidad es la LDH-5. Como la vida media de las LDH-1 (HHHH) (específica
de corazón) es diez veces mayor que la de la LDH-5 (MMMM), específica de músculo esquelético,
después de un infarto de miocardio se puede comprobar la preponderancia de la isoenzima cardio-
específica aun cuando la actividad de LDH total retorne a los valores normales.

ISOENZIMA SUBUNIDADES Tejidos en donde se Niveles normales

encuentra mayoritariamente en el adulto*
LDH-1 HHHH Miocardio, eritrocito 17-27%
LDH-2 HHHM Miocardio, eritrocito 27-37%
LDH-3 HHMM Células linfoide, cerebro, riñón 18-25%
LDH-4 HMMM Hígado, músculo esquelético 3-8%
LDH-5 MMMM Hígado, músculo esquelético <5%
(*En estos valores puede haber ciertas diferencias por la técnica o por criterios de normalidad propios
de laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a las que se
hace referencia.)

3.- Existen tres isoenzimas de CK cuya distribución se muestra en la siguiente tabla

ISOENZIMA % de Isoenzima por tejido

Músculo esquelético Miocardio Cerebro
CK3-MM 95 80-85 1-2
CK2-MB 2-3 15-20 1
CK1-BB 1-2 1-2 90
El hallazgo de un nivel elevado de CK total puede deberse al aumento de cualquiera de las fracciones
indicadas. Es importante remarcar que traumatismos, ejercicios musculares intensos o inyecciones
intramusculares pueden producir el aumento de CK total. En este caso se trata de un aumento a expensas
de la fracción MM. La determinación de la isoenzima cardiaca CK (CK-MB) presente en el suero
permite diferencias entre un infarto de miocardio y lesiones de la musculatura esquelética.

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Confección de Mapas Enzimáticos: La utilidad de determinar un mapa enzimático reside no tanto en

conocer el valor absoluto de la actividad de enzimas investigadas sino en considerar sus valores en
términos relativos. Así, un cociente GPT/GOT mayor que uno es altamente indicativo de una lesión
hepática; en el caso inverso (cociente menor que uno) es más probable un infarto de miocardio. Es
importante remarcar que las conclusiones obtenidas a partir de la medición de un mapa enzimático deben
corroborarse con los síntomas clínicos del paciente.