HISOPADO FARÍNGEO

Agar sangre

Incubar 48 hs a 37°C (primera lectura a las 24 hs.)

ẞ hemolíticos
No ẞ hemolíticos
Gram

Cocos gram positivos Bacilos Gram Flora habitual de

positivos faringe.
Catalasa negativa CAMP reversa positiva
Bacitracina sensible
Pyrasa positiva
Arcanobacterium haemolyticum
Streptococcus
pyogenes
  Gram +
Familia: Streptococaceae
Género: Streptococcus
Streptococcus  Catalasa –
➢Gruesa pared bacteriana:
 Bacitracina: Sensible
Especie:  Anaerobio facultativo
 Peptidoglicano (Mureína: polímero de
 Pyogenes N-acetil-glucosamina y ácido N actetil-  Inmóviles
murámico)
 Agalactiae  Ácidos teicoicos (glicerol)
 Exigentes
 neumoniae  Proteína M (ayuda al Strep adherencia  Agrupación: en cadenas
 Otras proteínas
 Morfología: esferoidal (esféricas)
 No forman esporas
Habitad: coloniza en la piel y mucosa (cavidad bucal, faringe, mucosa nasal, pliegues cutáneos)  Tamaño:0,5 a 1,2 um de diametro
Flora del tracto gastrointestinal (perineo)- Respiratorio - genitourinario

De acuerdo a polisacáridos de pared (Lancefield) De acuerdo a la hemólisis

 Streptococcus Pyogenes Streptococcus pyogenes: otras
patologías Piógenas

 Beta hemolítico (Halo Total)
 Grupo A (antígeno polisacárido
específico)
 Puede tener capsula
 15 a 20 % portadores faríngeos (niños y
jóvenes)
 Transmisión vía aérea
 Meningitis
 Neumonía
Pruebas: ASTO antiestreptolisina mide los
 Infecciones urinarias
 Respiratorias altas: sinusitis, otitis
anticuerpos que se producen en un individuo media,abscesos peritonsilares,
como respuesta a la infección. absceso retrofaríngeo
 Infección causada por SpeA: shock
Con esta prueba se si tuve para detectar secuela. tóxico (requiere la invasión del
torrente sanguíneo por la bacteria.

ACCIÓN DIRECTA ACCIÓN A DISTANCIA

Infecciones supuradas Complicaciones NO supuradas
Infecciones respiratorias
 faringitis Fiebre reumática
 Otitis
 Sinusitis  Fiebre
 Artritis
Infecciones de Piel y tejidos  Afección cardiaca
blandas
 Impétigo Glomerulonefritis Agudas
 Escarlatina
(Enfermedades  Edema
causadas por las  Hematuria
exotoxinas)  Proteinuria
 Erisipela  Edemas
 Celulitis
 Fascitis Necrotizante
 CULTIVO DE EXUDADO FARÍNGEO
CULTIVO DE EXUDADO FARINGEO: Es una prueba de laboratorio que se hace para identificar las especies bacterianas que pueden causar una infección en la garganta. Sirve
como herramienta de diagnóstico de afecciones de origen bacteriano.

Toma de muestra: Se pide que incline la cabeza hacia atrás y abra la boca los más grande posible. Si no se ve con claridad la parte posterior de la garganta presionar hacia
abajo con bajalenguas. Se frota con hisopo estéril contra la pared posterior de la garganta, sobre las amígdalas y sobre las partes enrojecidas o inflamadas, placas o llagas a
fin de recolectar la muestra.

Cuando el paciente es un niño es conveniente tenerlo en la falda con la espalda contra el pecho del adulto a fin de sostenerlo y evitar que se mueva demasiado y dificulte la
obtención de la muestra.

Es posible que el paciente tenga arcadas cuando el hisopo entre en contacto con la pared posterior de la garganta

Condiciones del paciente:

 No ingerir alimentos o bebidas durante las 3 horas previas.

 No utilizar enjuague bucal con antisépticos.
 No tomar antibióticos una semana previa.

Transporte conservación: Una vez que tomamos la muestra el hisopo debe colocarse en un tubo estéril

Tiempo: inmediatamente si se procesa dentro de las 2 horas, en caso contrario colocarlo en medio de transporte Stuart.

Temperatura: Ambiente

PROCESAMIENTO

1- Primer día: 2- Segundo día: 3- Tercer día:

•Hacer extendido (frotis) •Observación macro y micromorfológica •Lectura de Pruebas Bioquímica
•Coloración de Gram •Largar Pruebas Bioquímicas •Informe de Resultados
•Siembra
PROCESAMIENTO  PRIMER DÍA

Coloración de Gram Angina de Vincent

 Observar presencia de leucocitos y asociación fusoespirilar.

 Se observa la presencia de espiroquetas y bacilos gram negativos fusiformes.
 Es la asociación de anaerobios como Borrelia spp y Fusobacteriun spp.

Siembra

 A partir del hisopo en Stuart o en el tubo estéril sembrar una placa de agar sangre e incubar a 37 °C 24 horas.
 Frotar el hisopo en un extremo de la placa haciéndolo girar para descargar toda la muestra.
 Extender el inóculo inicial con el ansa sobre la descarga.
 Con el ansa extender el inóculo sobre otro segmento.
 Repetir el paso anterior
 Hacer una última estría y cortar el agar.
 Incubar a 37° C durante 24 horas

PROCESAMIENTO  SEGUNDO DÍA

 Observación de macromorfología
 Realizar visualización macroscópica de las placas en las que se produjo desarrollo bacteriano.
 Examinar las placas en busca de colonias β hemolíticas.
 La β hemolisis suele ser más evidente en la estría que se cortó con el ansa el agar.
 Si no hay colonias β hemolíticas incubar 24 hs. más.
 Observación de micromorfología
 Si se encuentran colonias β hemolíticas sospechosas realizar coloración de Gram a fin de diferenciar forma, agrupación, morfología y características de pared
bacteriana (Gram positiva o Gram negativa).

Largar pruebas bioquímicas

 Catalasa (es negativa). En un portaobjetos se depositan una o dos gotas de agua oxigenada al 30% y se pone en contacto con ella una colonia de los
microorganismos a estudiar. Sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema
citocromooxidasa que activa la oxidación del citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular produciéndose agua o peróxido de hidrógeno según la especie
bacteriana.
 Sensibilidad a la Bacitracina. (Es un antibiótico que inhibe el desarrollo del Streptococcus pyogenes a bajas concentraciones 0,02 a 0,04 unidades) técnica: se hace
una siembra masiva en la placa de agar sangre, colocar el disco de bacitricina. Incubar a 35° por 24 hs. Resultado: es sensible a cualquier halo de inhibición.
 Pyrasa (la prueba consiste en determinar la presencia de la enzima l-pirrolidonil arilamidasa).

PROCESAMIENTO  TERCER DÍA

Leer pruebas bioquímicas Streptococcus pyogenes (β hemolítico grupo Α)

 Catalasa negativa.
 Bacitracina sensible.
 Pyrasa positiva.

Interpretación de resultados de resultados

 No todas las bacterias que son aisladas en un cultivo faríngeo son patógenas o están relacionadas como causa de faringitis bacteriana.
 Se considera resultado positivo el aislamiento de Streptococcus pyogenes.
 De toda la lista de bacterias patógenas por su frecuencia en su etiología sólo resulta adecuado buscar y reportar Streptococcus pyogenes. Los demás sólo deberían ser
buscados de manera intencionada cuando exista sospecha de su participación.

 Bacterias consideradas  Staphylococcus aureus  Arcanobacterium  Mycoplasma pneumoniae

patógenas en faringitis:  Corynebacterium diphteriae haemolyticum  Chlamydias pneumoniae
 Streptococcus pyogenes  Neisseria gonorrhoeae  Francisella tularensis  Streptococcus grupo C y G
 Streptococcus pneumoniae  Yersinia pestis

 Flora habitual de faringe

Es el conjunto de gérmenes que conviven con el huésped en estado normal sin causarle enfermedad.
En el exudado faríngeo aislaremos diversos gérmenes y se deberá valorar en forma cuidadosa cuáles son habitantes normales de esa región y cuáles no.

 Streptococcus grupo viridans  Corynebacterium spp  Haemophylus influenzae  Moraxela Branhamella

 Estafilococo coagulasa  Neisserias spp  Haemophylus catarrhalis
negativa  Lactobacillus spp parainfluenzae  Candida spp
 Micrococcus spp  Veilonella spp

 Pacientes portadores de Streptococcus pyogenes

Se conocen como portadores aquellos pacientes que portan una bacteria capaz de propagarse a otras personas sin tener ningún síntoma de infección.
Por esto se sugiere realizar exudado faríngeo sólo en pacientes cuyo examen físico sugiera que hay infección presente.

 Arcanobacterium haemolyticum:

Son colonias β-hemolíticas en agar sangre, es catalasa (-) y suele ser sensible a bacitracina situación que puede llevar a confundir el diagnóstico con el Streptococcus
pyogenes. En la coloración de Gram se observan bacilos Gram positivos, dispuestos como cocobacilos. La prueba confirmatoria es la de CAMP reversa que da positiva.
Prueba rápida para la detección de Streptococcus pyogenes

Permite determinar la presencia/ausencia de Streptococcus pyogenes en exudado faríngeo. La metodología utilizada dependerá de las condiciones establecidas por el
fabricante, pero en términos generales se realiza primero una extracción de los antígenos de superficie y posteriormente su detección.

 Se realiza en 5 minutos.
 Especificidad >95 %.
 Sensibilidad 80% - 96%
 Adultos, la prueba rápida negativa se considera evidencia suficiente contra la infección por Streptococcus pyogenes (baja prevalencia de este gérmen)
 El inconveniente es que no distingue entre infección aguda y estado de portador

Si el resultado es NEGATIVO

 En adultos: NO es necesario cultivar

 En niños: SI es necesario cultivar

Si el resultado es POSITIVO

 NO es necesario cultivar

Cultivo de Exudado faríngeo

 Patrón de oro para el diagnóstico.

 Tiene sensibilidad superior al 90% para detectar Streptococcus pyogenes y un resultado negativo prácticamente descarta que esta bacteria este implicada.
 El inconveniente es que la información se demora 48 horas.
 La prevalencia de portadores asintomáticos alta en niños no permite distinguir entre infección aguda y estado de portador.

INFORME DE RESULTADOS

 El informe debe ser rápido, claro, objetivo y fiable. Debe ayudar al médico en la toma de decisiones y a impartir el tratamiento antibiótico.
 Resulta correcto y es aceptado (American Society for Microbiology) el omitir reportar todo aquel microorganismo considerado no patógeno. Se debe informar como
flora habitual de faringe. Y se informa por cantidad
 Debe incluir:
 Coloración de Gram.
 Cultivo. Informar en forma semicuantitativa (abundante, regular, escaso desarrollo).
  Diplococos Gram + lanceolada de a par
puntiforme transparentes
 Bacterias exigentes (fastidiosas)
 Crecimiento rápido
 Catalasa -
 Colonias pequeñas no pigmentadas
 Anaerobio facultativo
 α hemolíticos en agar sangre
 Sensible a la Optoquinasa
 Poseen capsula  Factor de Virulencia
 Factores de Patogenicidad o virulencia:
 Capsula polisacárido grueso
permite diferenciar 80
serotipos
 Enzimas
 Toxinas
Determinantes de patogenicidad:
 Cápsula: inhibe la Fagocitosis.
 Neumolisina, Neuraminidasa: invasión
tisular
 Factores del huésped: Tabaquismo, enf.
respiratoria, asplenia, I.D.
CLÍNICA
 Infección respiratoria: Neumonía. Otitis.
Sinusitis.
 Infección del SNC: Meningitis.
Streptococcus Pneumoniae
 Hemolisis alfa hemolisis (Halo parcial)
verde
 Habitante de la flora normal de las vías
superior.
 Factor de patogenicidad: es la capsula el
sistema inmunológico no puede fagocitar
la bacteria.
 Bacteria: comensales
Medio de cultivo: AGAR SANGRE ver la alfa
hemolisis.
 Hacer el Gram (+)
 Catalasa (-)
 Prueba de la Optoquina
Muestras: Respiratorias (esputo, líquido pleural). Sangre. Orina.
LCR.
 Detección de Antígeno.
 Cultivo. Agar sangre
 Identificación:
 Gram. diplococos lanceolados rodeado de una capsula
 Prueba Bioquímica: Catalasa, Optoquina, solubilidad a
la bilis
 Serológica.
Optoquina: sensible se mide el Halo y si es mayor el Halo 14mm es
sensible. Identifica la especie. Es un ATB
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio,
utilizando un hisopo o un ansa de inoculación estéril, inocular una
placa de Agar Sangre, en las cuatro direcciones para cubrir toda la
superficie del medio de cultivo. Luego colocar un disco de
Optoquina sobre la superficie del agar.
Solubilidad a la bilis: puede vivir la presencia de bilis
La bilis es una sustancia líquida alcalina amarillenta producida por
el hígado de muchos vertebrados. Interviene en los procesos
de digestión funcionando como emulsionante de los ácidos grasos.
Contiene sales biliares, proteínas, colesterol y hormonas. No
contiene enzimas digestivas.
 Importancia médica
Streptococcus Agalactiae
 Patógeno multifactorial
β hemolítico – grupo B de Lancefield  Flora normal del tracto Digestivo (comensal intestino)
Infecciones maternas: Infecciones neonatales
 Fiebre puerperal sistema inmunológico
Bacitracina: Resistente Gram (+) catalasa (-)  15-30% gestantes portadoras (causa de infección en
 Aborto séptico inmaduro: CAMP (+) Purato de Sodio (+) RN)
 Sepsis puerperal  Neumonía  Principales factores de virulencia o patogenicidad:
Prevención de Infección Neonatal
 Corioamnionitis  Sepsis infección gral  Peptidoglicano
Obligatorio 35-37 S x ley  Identificación de gestante portadoras: Cultivo  Acido lipoteicoico (acción tóxica, daño)
 Meningitis
investigar a toda exudado vaginorectal 35 a 37 semanas.  Diversas proteínas de unión (adherencia)
embarazada la presencia  Administración de profilaxis intraparto a todas  Cápsula polisacarídica rica en ácido
de esta bacteria las portadoras: penicilina al inicio del parto y  siálico (10 serotipos)  evitan la fagocitosis
cada 4 hs hasta el final.  Estreptolisinas
INFECCIONES DEL ADULTO:  Hemolisinas (Enzimas)
 Urinarias en adultos prostáticos  Neumonía  Hialuronidasa (Enzima)
 Lesiones gangrenosas supuradas (diabetes)  Empiema  Neuraminidasa (Enzimas)
 Artritis  Bacteriemia en pacientes con enfermedad de  Proteasa (Enzimas)
 Endocarditis base (cirrosis, diabetes, neoplasias, infección  Toxina que afecta la permeabilidad vascular (distrés
 Meningitis por VIH) respiratorio)
  Pili

Muestra que se toma del Streptococcus
Hisopado anal: (costado del ano)
Hisopado vaginal: la muestra se realiza en el tercio externo de la
vagina es peri vaginal (no se toma con especulo pinza) es una
batería que esta en el intestino y por contaminación está en la
vagina.
Estos dos hisopados se investigan y para que tengamos más
probabilidad de recuperación
Se coloca en cada uno de los hisopados EN UN CALDO DE TODD
HEWITT este es específico que enriquece la presencia del
Agalactiae.
Vamos a tomar de ese caldo lo siembra en:
La prueba identificatoria del Streptococcus Agalactiae es la PRUEBA DE CAMP  se pone
en manifiesto un factor que tiene el Streptococcus Agalactiae lo que hace es acervar la
hemolisis de los estafilococos áureos.
Prueba: En el agar sangre vamos a hacer una estría en los estafilococos áureos (sepa de
estafilococos áureos) y vamos a sembrar sin llegar a tocar con un control + sepa guardada
aquí aumenta la hemolisis como flecha (- ) no se ve el agrandamiento de la hemolisis
Hago una estría siembro un estafilococo aéreo sin tocar la muestra que yo quiero investigar y si yo
veo exacerbarda la hemolisis esa ya es positiva. --
Paciente que se investiga: Mujer embarazada de 35 a 37 semanas
Toma de Muestra: hisopado Anal y vaginal
Como hacemos el procesamiento: utilizamos un CALDO DE TODD HEWITT replicamos un agar
sangre o un agar granada

AGAR SANGRE: busca la colonia Beta hemolítica Zona: inferior

AGAR GRANADA: Medio Naranja