ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN

MOLECULAR UV - VISIBLE

PROF. CECILIA ALEGRIA

SESIÓN
 FUNDAMENTO
 Absorción por parte del analito de radiación electromagnética de la Región Ultravioleta
(UV) y Visible del espectro.
Ultravioleta (UV) , solo UV cercano: 180
- 380 nm ( ya que entre 10 y 180 nm, la
radiación es absorbida por el oxigeno
del aire por lo que la medida se debe
realizar en ausencia de este gas).
Visible: región que va entre 380 – 780 nm

 Al incidir la radiación electromagnética sobre la

materia , absorbe una energía exacta que
corresponde a una transición desde el estado
fundamental a un estado excitado y son únicas
por cada especie.

A + hv → A* → A + calor
 La energía asociada a la radiación UV-Visible
es la correspondiente a los niveles
energéticos electrónicos.
 Por otro lado la cantidad de energía absorbida a una determinada frecuencia por una
especie química, depende de la concentración de la especie .

TRANSMITANCIA: Es la relación entre la intensidad transmitida y la incidente que llega al

detector una vez que ha atravesado la muestra, siendo habitual expresarla como porcentaje .

T = It/Io % T = It/Io x 100

ABSORBANCIA : es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la
cantidad de luz absorbida por la misma. Se define de la siguiente forma:

A = - log T = - log It/Io= log Io/It = log 1/T

A = log (1/%T) = log ( 100/%T) = log 100 – log %T = 2 – log %T

A = 2 - log (%T)
 Notas:
 El ojo humano percibe colores que corresponde a la región de luz visible o región visible o
luz.
 Si la luz incide sobre la materia absorbe selectivamente en función de su composición
 L a luz no absorbida por la materia y que se transmite a través de ésta, es reflejada por una
superficie en función de su grado de transparencia.
 Si una materia absorbe todas las longitudes de onda de la luz visible lo que se refleja es el
color negro
 Si la muestra es totalmente reflejada , se observa el color blanco

 En conclusión:
- Si hacemos incidir un haz de luz blanca sobre una especie , ésta absorberá ciertas
longitudes de onda y reflejara otras , siendo estas ultimas la que se denomina color.
- Ese color observado, es el complementario del que se percibiría si la luz absorbida se
pudiera detectar.
 LEY DE LAMBERT-BEER
 Al considerar una radiación monocromática, la absorbancia α concentración de la
especie que absorbe la luz.

Ley de Lambert y Beer A = ε·c·b

Donde:
ε : es la absorbancia específica o absortividad de la especie que absorbe. Depende de la
naturaleza del cromóforo y de las condiciones experimentales ( disolvente, temperatura, pH,
etc) .
b : es el paso óptico : longitud atravesada por la radiación electromagnética a través del
medio absorbente.
C: es la concentración de la especie absorbente ( o del cromóforo)

Nota: La cubeta donde se coloca la muestra, así

como el disolvente, pueden dar lugar a
interferencias : reflexión , dispersión absorción ,
partículas de polvo, impurezas , etc. , por eso es
necesario un blanco
 LEY DE LAMBERT-BEER
CONSIDERACIONES:
 La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su
concentración.
 A mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas.
 Depende de la distancia que recorre la luz por la solución , cuanto mayor
distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará, (para
una misma concentración).
 Depende de ε, una constante de proporcionalidad -denominada
coeficiente de extinción o absortividad , que es específica de cada
cromóforo.
 Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las de c y b.
 La segunda magnitud, b , se expresa siempre en cm.
 La concentración, c, se expresa, siempre que sea posible, en M, con lo que
las dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1.
 La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores
de c altos, ε varía con la concentración, debido a fenómenos de dispersión
de la luz, agregación de moléculas, cambios del medio, etc.
 Ley de Lambert – Beer : Desviaciones

 Desviaciones reales: Debido a las concentraciones altas.

- Los valores superiores a 0,01 M pueden ocasionar desviación, debido a que
aumenta las interacciones entre molecular o el disolvente.

 Desviaciones aparentes: Debido al instrumento.

- Por procesos químicos y su interacción con el disolvente u otros especies.
- Lectura de una radiación no monocromática
INSTRUMENTACIÓN
 La medición de absorbancia de la luz por las moléculas se realiza en unos aparatos
llamados espectrofotómetros. Constan, según se indica en la figura

Fuente de radiación: lámpara de

deuterio y tungsteno.

Monocromador: selector de longitud

de onda: filtros, prismas, redes de
difracción

Recipiente portamuestra, cubeta

transparente pueden ser de vidrio,
cuarzo o plástico transparente.

Detector de luz y un amplificador

convertidor de las señales luminosas en
señales eléctricas.

Un registrador o sistema de lectura de

datos.