Universidad del Quindío

Taller Espectroscopia y Cromatografía

Luisa Fernanda Londoño, Laura Camila Beltrán R, Juliana Andrea Gómez

1. La espectrometría ultravioleta-visible o espectrofotometría UV-Vis implica la espectroscopia

de fotones en la región de radiación ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y
adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano.
En esta región del espectro electromagnético, las moléculas se someten a transiciones
electrónicas.
Esta técnica es complementaria de la espectrometría de fluorescencia, que trata con
transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometría de
absorción mide transiciones desde el estado basal al estado excitado.
ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA El espectro Ultravioleta y Visible de las
moléculas está asociado a transiciones electrónicas entre los diferentes niveles
energéticos en ciertos grupos o átomos de la molécula y no caracterizan a la
molécula como entidad. En contraste la absorción de energía en la región
Infrarroja estimulan la molécula completa y causa cambios vibracionales y
rotacionales en esta lo cual caracteriza la entidad estructural de dicha molécula.
Los grupos de átomos que dan origen a la absorción en el UV cercano o UV de
cuarzo, se conocen como grupos cromóforos. La mayoría de los grupos
insaturados y heteroatómicos que tienen pares de electrones no compartidos, son
cromóforos potenciales y estos grupos son la base de la elucidación de grupos
estructurales en las moléculas activas en el UV cercano.

El espectro electromagnético

Las ondas electromagnéticas cubren una amplia gama de frecuencias o de

longitudes de ondas y pueden clasificarse según su principal fuente de producción.
La clasificación no tiene límites precisos.

Región del Intervalo de frecuencias

espectro (Hz)
Radio-microondas 0-3.0·1012
Infrarrojo 3.0·1012-4.6·1014
Luz visible 4.6·1014-7.5·1014
Ultravioleta 7.5·1014-6.0·1016
Rayos X 6.0·1016-1.0·1020
Radiación gamma 1.0·1020-….

Fuente: Leonberger. Revealing the small range of radio-microwave frequencies.

Phys. Educ. Vol. 37, September 2002, pp. 425-427
En la figura, se muestra las distintas regiones del espectro en escala logarítmica.
En esta escala las ondas de radio y microondas ocupan un amplio espacio. En
esta escala podemos ver todas las regiones del espectro, sin embargo, el tamaño
relativo de las distintas regiones está muy distorsionado.

En esta otra figura, se representa las distintas regiones del espectro en escala
lineal. Vemos como la región correspondiente a las ondas de radio y a las
microondas es muy pequeña comparada con el resto de las regiones. El final de la
región ultravioleta estaría varios metros a la derecha del lector, y el final de los
rayos X varios kilómetros a la derecha del lector.

Por lo tanto, no se puede dibujar la representación lineal de todo el espectro

electromagnético, porque sería de un tamaño gigantesco. Pero se puede dibujar la
representación lineal de una fracción del espectro electromagnético, para darnos
cuenta de las dimensiones relativas reales de sus distintas regiones.

2. La absorción de radiación electromagnética es el proceso por el cual dicha

radiación es captada por la materia. Cuando la absorción ocurre dentro de un
rango de luz visible, se llama absorción óptica. Esta radiación, cuando se absorbe,
puede remitirse o transformarse en otro tipo de energía, como calor o energía
eléctrica. En general, todos los materiales absorben algún tipo de rango de
frecuencia. Aquellos que absorben todo el rango de luz visible se llaman
materiales opacos, mientras que si dejan pasar este rango de frecuencia se llaman
transparentes. Es precisamente este proceso de absorción y posterior remisión de
la luz visible lo que le da color a la materia. Los colores mostrados por es espectro
(arco iris) son la combinación de los colores primarios, que no incluyen blanco y
negro, ya que éstos se consideran valores. El blanco indicara la presencia de luz y
la ausencia de luz negra.

3. Ley de Lambert-Beer Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz

monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromófobo en
solución:

A = log I/Io = ε·c·l

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –

a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-; también
depende de la distancia que recorre la luz por la solución –a igual concentración,
cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se
encontrará-; y por último, depende de ε, una constante de proporcionalidad
-denominada coeficiente de extinción- que es específica de cada cromóforo

Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las de c y l. La

segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras que la primera (c) se
hace, siempre que sea posible, en M, con lo que las dimensiones de ε resultan ser
M-1·cm-1. Este coeficiente así expresado, en términos de unidades de
concentración molar (o un submúltiplo apropiado), se denomina coeficiente de
extinción molar (εM). Cuando, por desconocerse el peso molecular del soluto, la
concentración de la disolución se expresa en otras unidades distintas de M, por
ejemplo g·L-1, las dimensiones de ε resultan ser distintas, por ejemplo g-1·L·cm-1,
y al coeficiente así expresado se denomina coeficiente de extinción específico (εs).
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c
altos, ε varía con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz,
agregación de moléculas, cambios del medio, etc.

4. Experimentalmente se comprueba que la ley de Lambert-Beer se cumple

particularmente cuando la solución es diluida. No obstante son comunes las
desviaciones debidas a factores de orden físico, químico o instrumental.
La principal causa física de desviación es que la absortividad varía con el índice
de refracción de la solución, lo que se pone en evidencia a concentraciones
elevadas.
Como factor de orden químico se puede citar la variación de algunas estructuras
en función de la concentración; como por ejemplo al diluir una solución de
dicromato se verifica el siguiente equilibrio:

Los iones dicromato presentan absorción máxima a 450 nm, en tanto que los
iones cromato lo hacen a 375 nm, por lo que al efectuar las diluciones de
soluciones de dicromato se debe mantener el nivel de acidez a fin de no variar la
estructura química.
Desviación negativa de la Ley de Lambert-Beer
Análogamente cuando la especie que absorbe radiaciones es un complejo se
debe mantener una concentración grande de ligante (por ejemplo unas 100 veces
mayor).
En lo referente a desviaciones de índole instrumental debe mencionarse que las
radiaciones que llegan a la cubeta se apartan en mayor o menor grado de la
condición de ser “cuasi” monocromáticas, como lo establece la ley de L. Beer.
Cada instrumento, según su calidad, hace llegar a la cubeta una banda de
longitudes de onda, conocida como banda instrumental; cuanto más estrecha es
ésta la desviación que se produce es menor. A concentraciones elevadas la
gráfica se inclina hacia este eje, dando lugar a desviaciones negativas, que son
indeseables pues conducen a un error relativo en concentración cada vez más
grande.
En regla general, cuanto menos monocromática sea la radiación utilizada, más se
desvía la relación entre absorbancia y concentración.
En los siguientes gráficos, la banda B muestra poca desviación puesto que la
absortividad  no varía en forma importante con la λ, en cambio la banda A muestra
marcadas desviaciones; aquí una pequeña variación en λ produce una marcada
variación en la absorbancia.
El hecho que una solución cumpla la  ley de Lambert - Beer implica  que debemos
conocer su ámbito de validez, para poder aplicarla.

La  ley de Lambert - Beer no sólo se utiliza para sustancias coloreadas (con

absorción en el visible) sino también para sustancias que absorban en el UV y son
a nuestros ojos “incoloras”.
6. (2009) Retrieved 27 November 2019, from
https://core.ac.uk/download/pdf/71397292.pdf
7. La espectrometría de infrarrojos (espectroscopia IV) es un tipo de
espectrometría de absorción que utiliza la región infrarroja del espectro
electromagnético. Como las demás técnicas espectroscópicas, puede ser utilizada
para identificar un compuesto o investigar la composición de una muestra.

La espectrometría infrarroja se basa en el hecho de que los enlaces químicos de

las sustancias tienen frecuencias de vibración específicas, que corresponden a los
niveles de energía de la molécula. Estas frecuencias dependen de la forma de la
superficie de energía potencial de la molécula, la geometría molecular, las masas
atómicas y, posiblemente, el acoplamiento vibracional.
La espectrometría infrarroja se utiliza ampliamente tanto en la industria como en la
investigación científica, porque es una técnica rápida y fiable para medidas, control
de calidad y análisis dinámicos. Los instrumentos actuales son pequeños y
pueden ser transportados, incluso para tomar medidas de campo.
8. Estudia los fenómenos de interacción entre la radiación de origen infrarrojo y la
materia. Esencialmente la energía de la radiación, localizada en determinada
longitud de onda del infrarrojo, es absorbida por una molécula (o parte de ella) que
se encuentra vibrando en su estado basal a la misma longitud de onda que la
radiación infrarroja incidente, provocando con ello un cambio en la intensidad de la
vibración. Una condición necesaria para que se produzca una vibración en una
molécula al incidir sobre ella un haz de energía infrarroja es la presencia de
momentos dipolares. Sí el momento dipolar es nulo no hay absorción de energía
infrarroja, caso contrario, habrá absorción de energía infrarroja.
No todas las vibraciones serán activas en una molécula, solamente lo serán
aquellos enlaces en los que cambie el momento dipolar durante la interacción con
la energía infrarroja.
Las moléculas se trasladan y rotan y sus átomos vibran, digamos que de manera
natural. La vibración es a menudo muy compleja, pero puede considerarse la
combinación de varios movimientos vibratorios muy simples, a los que se les
denomina modos normales de vibración.
Existen ya definidos muchos modos normales de vibración en distintas moléculas,
los cuales han sido nombrados en función al tipo de vibración, por ejemplo hay
vibraciones de tensión o de estiramiento y de flexión o bandeo.
Debido a estos movimientos normales de vibración, cada molécula tiene una cierta
energía de vibración, pero esta energía solamente puede variar absorbiéndose
fotones de la región del infrarrojo. Cuando se absorbe energía la molécula se dice
que pasa a un estado de vibración superior en el que los modos de vibración no
varían, ni sus frecuencias, pero sí la amplitud de la vibración.