Espectroscopía de Absorción

En los métodos de absorción la base de información es la magnitud del poder radiante proveniente de una fuente externa que es absorbido por la especie analizada. Aquí la absorción de radiación por la especie, va acompañada por la excitación del analito.

Espectroscopía de Absorción
Es el fenómeno que ocurre cuando una radiación electromagnética interactúa con la materia traspasando parte de su energía a los átomos o moléculas presentes en la materia que pasan de un estado energético menor a estados de mayor energía, o estados excitados.

Ejercicio
¿en cuántos kJ/mol aumenta la energía de OZ cuando absorbe radiación UV de longitud de onda de 147 nm?

Desarrollo E = h c / l 2.998 x 10 m/s -34 = (6. .35 x 10-18 J/molécula) (6.626 x 10 Js) -------------------- 8 (147 nm) (10-9 m/nm) – = 1.35 x 10-18 J/molécula – = (1.022 x 1023 moléculas/ mol) – = 814 kJ/mol Esta energía es suficiente para romper el enlace O=O del oxígeno.

su energía disminuye El estado de mínima energía de una molécula se llama estado fundamental . Se dice que ha pasado a un estado excitado. Si una molécula emite un fotón.Absorción de la Luz Cuando una molécula absorbe un fotón. su energía aumenta.

P. P ≤ P0 . La radiaciòn es monocromática. La luz monocromática con una potencia radiante P0 .Medida espectrofotométrica Cuando una muestra absorbe luz. Como la muestra puede haber absorbido algo de luz. la potencia radiante del haz que emerge por el lado opuesto de la muestra es P. incide en una muestra de longitud b. es la energía por segundo y por unidad de área del haz de luz La luz se hace pasar a través de un monocromador para seleccionar una longitud de onda. La potencia radiante. la potencia radiante del haz de luz disminuye.

Transmitancia La transmitancia. se define como la fracción de la luz incidente que pasa a través de la muestra. T. P Transmitancia: T = ----P0 T puede valer de 0 a 1 El porcentaje de transmitancia es simplemente 100 T y puede valer desde 0 a 100 %. .

es directamente proporcional a la concentración? .01 % T = T*100 100 10 1 A 0 1 2 ¿Cual.log10 ---.1 0.Absorbancia A = .log T P0 P Relación entre transmitancia y absorbancia T= P/P0 1 0.= . A o T.

Absorbancia Cuando no se absorbe luz. – P= P0/10 y A= 1 Si solamente se transmite el 1 % de luz. – P= P0 y A=0 Si se absorbe el 90 % y se transmite el 10 %. – A= 2 La Absorbancia a veces también se llamaba densidad óptica .

de la especie que absorbe la luz en la muestra. .Absorbancia La absorbancia es importante porque es directamente proporcional a la concentración. c.

puede ocurrir que: . con una potencia P0.Leyes de la Absorción Cuando un haz de radiación monocromática. incide sobre una cubeta conteniendo una solución.

Leyes de la Absorción Po = Pt + Pd + Pa Cubeta Pd Po Pt Pt < Po Pa .

– de las diferencias entre  del medio de propagación de la radiación y el  del medio que esta siendo analizado. . Parte de la radiación incidente sea reflejada: – dependiendo de la especie absorbente o.Leyes de la Absorción Parte del haz de radiación sea absorbido por el medio que está siendo analizado.

Leyes de la Absorción Parte de la radiación incidente sea dispersada: – Dependiendo del medio: no sea transparente ni homogéneo Parte de la radiación incidente sea transmitida. siendo su potencia menor a la potencia de la radiación inicial o incidente. .

– Cubetas con paredes homogéneas. de menor espesor y de caras paralelas – Una cubeta conteniendo la muestra y otra cubeta conteniendo todos los componentes de la cubeta anterior menos la sustancia de interés. .Potencia Reflejada Puede ser minimizada: – Uso de medidas relativas y.

. antes de la medida de la potencia transmitida por la cubeta que contiene el material a analizar.Potencia Reflejada La medida del haz transmitido por la segunda cubeta servirá de referencia para calibrar el instrumento.

Potencia Reflejada Como vemos es necesario usar: – Cubetas prácticamente idénticas – De espesor reducido y – De caras paralelas .

de modo que la potencia de la radiación dispersada puede despreciarse . son realizados en soluciones homogéneas y transparentes.Potencia Dispersada Normalmente los procedimientos involucrados en la absorción de luz.

Pt . y La potencia absorbida puede determinarse como la diferencia entre P 0 y P t. – Pa = Po .Leyes de la Absorción Por lo anterior podemos considerar que: – PO = Pa + Pt Las potencias incidente y transmitida pueden ser medidas directamente.

Leyes de la Absorción Investigaciones sobre la relación entre las potencias de radiación incidente y transmitida fueron realizadas por Pierre BOUGUER (1729) y por Johann H. llegando a enunciar dos leyes fundamentales que caracterizan al proceso de absorción: . LAMBERT (1760).

Leyes de la Absorción “La intensidad o potencia de luz monocromática transmitida por un medio homogéneo es proporcional a la intensidad o potencia de luz incidente” Pt = k P o ( I t = k Io ) .

Leyes de la Absorción: Ley de Lambert “La intensidad o potencia de luz monocromática transmitida disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente” Pt = Po e-kb ( It = Io e-kb ) .

denominada coeficiente de absorción .Leyes de la Absorción: Ley de Lambert Pt = P o e -kb b = espesor del medio absorbente k = constante para la longitud de onda y el medio absorbente.

Leyes de la Absorción: Ley de Lambert Pt Pt = = Po e-kb -0.3206 = k * 0.4343 Pt = Po 10-k’b .4343 kb Po 10 k’ = k/2.

Leyes de la Absorción: Ley de Lambert Pt = Po 10.k’b Pt − k 'b = 10 PO .

Leyes de la Absorción: Ley de Lambert .log Pt =k'b PO Pt / Po = Transmitancia. fracción de la luz incidente transmitida por un espesor b .

la potencia radiante disminuye logarítmicamente a medida que la longitud del paso óptico aumenta aritméticamente”.Ley de Lambert . de concentración constante.Bouguer “Cuando una radiación monocromática proveniente de una onda plana pasa a través de un medio capaz de absorber radiación. .

Leyes de la Absorción: Ley de Beer August Beer (1852) estudió la influencia de la concentración del componente absorbente en la transmisión y absorción de la luz. Descubrió que existe la misma relación entre la transmisión y la concentración que la descubierta por Lambert entre la transmisión y el espesor del medio absorbente: .

Leyes de la Absorción: Ley de Beer “La intensidad o potencia de un haz de luz monocromática transmitido disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente la concentración de la especie absorbente” Pt = Po e-kc .

Leyes de la Absorción: Ley de Beer Pt = Po e k’’ = -kc Pt = Po 10-0.4343 Pt = Po 10-k’’c .4343kc k/2.3206 = k * 0.

Leyes de la Absorción: Ley de Beer Pt = Po 10 -k’’c Pt − log = k'' c P0 como Pt A = − log P0 .

Leyes de la Absorción: Ley de Beer Pt − log = k'' c P0 .

Ley de Lambert – Bouguer .Beer Pt = Po 10 Pt = Po 10 -k’’c -k’b Pt = Po 10-k’k’’bc .

Beer definiendo una constante a a = k’ * k’’ P t y como A = − log P0 tenemos .Ley de Lambert – Bouguer .

g/L .Ley de Lambert – Bouguer . cm – a = absortividad. L g-1 cm-1 – c = concentración.Beer LEY DE BEER A = abc – A = Absorbancia – b = trayecto óptico.

Ley de Lambert – Bouguer – Beer LEY DE BEER A = ε bc –A = Absorbancia – b = trayecto óptico –  = absortividad molar – c = concentración molar .

Leyes de la Absorción: Ley de t-Beer A =  bc  = absortividad Molar = M-1 cm-1 c = moles/L b = cm la absorción de varias especies  permite comparar cuantitativamente .

Leyes de la Absorción: Ley de Lambert-Beer La absortividad Molar – – – –  depende de: La sustancia absorbente Longitud de onda Temperatura de medición Solvente A mayor ε mayor nivel de absorción observado por lo que más sensible el método espectrométrico .

Ley de Beer A = abc o A = ε bc Esta ecuación demuestra la relación lineal entre la A y la concentración c .

Ley de Beer Por lo que manteniéndose constante el camino óptico. es posible determinar la concentración de una especie en solución a través de una medida de absorbancia .

pasa a través de un medio capaz de absorber radiación.Ley de Beer “Cuando un haz de radiación monocromática proveniente de una onda plana. la potencia radiante disminuye logarítmicamente a medida que aumenta la concentración aritméticamente” . contenido en una celda de paso óptico constante.

Alcances de la Ley de Beer
Mayoritariamente se aplica en las regiones UV, VIS, IR cercano, R. X. Aplicable a especies químicas: iones, moléculas y átomos. Aplicable a soluciones diluidas, y matrices sin gran complejidad. Aplicable a niveles de detección de analitos del orden ppm o menores.

Alcances y Aplicaciones de la Ley de Beer
Absorción radiación UV-VIS por compuestos orgánicos Absorción radiación UV-VIS por compuestos Inorgánicos

Aplicaciones de la Ley de Beer
Determinación de un constituyente absorbente presente en una muestra Determinación de dos o más especies absorbentes presentes en una muestra. Valoraciones fotométricas en cuyo sistema participa una o más especies absorbentes. Cinética de reacciones químicas

Cinética de reacciones químicas .Aplicaciones de la Ley de Beer Determinación de un constituyente absorbente Determinación de dos o más especies absorbentes Valoraciones fotométricas en cuyo sistema participa una o más especies absorbentes.

Aplicaciones de la Ley de Beer Determinación de un constituyente absorbente presente en una muestra: – Medición directa de la muestra y un patrón con lectura próxima a la muestra: – Mediante Curvas de Calibración .

Aplicaciones de la Ley de Beer – Medición directa de la muestra y un patrón con lectura próxima a la muestra: AX C X = CR AR .

Patrón Interno : previo a la determinación se añade una cantidad conocida de una sustancia similar al analito (patrón interno) . El analito de la muestra es empleado en el protocolo de calibración. Los patrones contienen al analito pero éste es EXTERNO al analito de la muestra Adiciones Patrón o Calibración Interna: Interna el analito en sí mismo es usado para la calibración interna.CURVAS DE CALIBRACIÓN: el concepto Indirecto o de Calibración externa: externa las muestras contienen un cantidad desconocida del analito y los patrones tienen una cantidad perfectamente conocida de analito.

Construcción de la Curva de Calibración Restar el blanco de las señales o asuma un intercepto distinto de cero en la curva – Sustraer el blanco de las señales es la práctica más común en los laboratorios asegurase que las señales de las muestras queden en el intervalo de las señales de los estándares La curva de calibración calculada con su pendiente e intercepto permite obtener la concentración de las muestras desconocidas Debe estar seguro que la relación entre la señal y la concentración es lineal antes de aplicar los mínimos cuadrados para encontrar la recta – Si matemáticamente la relación no es conocida. grafique la curva y elija la mejor opción para interpolar los valores de las muestras. el gráfico es una opción válida. .

Curva de Calibración externa –Obtención de la recta: Representación gráfica: A vs cc –Completamente lineal .

etc 12 14 16 y = 0.5 3 Signal response 2. mass.Gráfica de los puntos 3.5 0 0 2 4 6 8 10 conc.5 2 1.1976x Calibration curve (n=4 measurments/ std) .5 1 0.

000 1.500 2.1976x Calibration curve (n=4 measurments/ std) . etc 12 14 16 y = 0.000 0 2 4 6 8 10 conc.000 Signal response 2.Gráfica de los promedios con rango de error ± 1 3.500 3. mass.000 0.500 0.500 1.

500 0.000 1.500 2. mass.000 0.000 0 2 4 6 8 10 conc.Gráfica de promedios con error indicando un intervalo de confianza de 95 % 3.1976x Calibration curve (n=4 measurments/ std) .500 3.000 Signal response 2.500 1. etc 12 14 16 y = 0.

Curva de Calibración externa –Recta: Completamente lineal –la lectura de la muestra se interpola en la recta obteniéndose la concentración de la solución de muestra .

Curva de Calibración externa – Recta: Rango lineal y región no lineal – lectura muestra rango lineal: interpolación en la recta – lectura muestra en rango no lineal: interpolación en región no lineal. pero requiere mayor número de patrones en esa zona .

Curva de Calibración externa – Recta: Puntos distribuidos no linealmente pero con una tendencia lineal manifiesta – Elevar número de datos – establecer la mejor recta que pasa por los puntos ecuación de los mínimos cuadrados residuos cuyo error corresponde a errores aleatorios de la medida y no a la concentración .

.Curva de Calibración externa La efectividad y confiabilidad de sus resultados depende de la exactitud en las concentraciones de los patrones y la mínima diferencia entre la matriz de los patrones y de la muestra.

EJEMPLO A partir de una solución patrón de 1000 ppm de Ca prepare la siguiente C. de C. – 100 mL de solución patrón de 100 ppm de Ca – 100 mL de solución patrón de 80 ppm de Ca – 100 mL de solución patrón de 60 ppm de Ca – 100 mL de solución patrón de 40 ppm de Ca – 100 mL de solución patrón de 20 ppm de Ca – 100 mL de solución patrón de 10 ppm de Ca – 100 mL de solución patrón de 5 ppm de Ca .

3 % T? .6 %T cuando se mide a 525 nm en cubetas de 1.Una muestra de disolución de KMnO4. 1 * 104 M presenta un 36.0 cm: – – – – ¿qué Absorbancia presenta la disolución? ¿a qué valor cambia el % T si la disolución se midiera en cubetas de 2 cm? ¿cuál es la absortividad molar del compuesto a 525 nm? ¿qué concentración presenta una disolución desconocida de analito si al medirse en las mismas condiciones que la muestra dio una lectura de 48.

.

Igualdad de matrices Opciones Prácticas – Separar el analito de la matriz de la muestra permite el uso de las curvas de calibración externas – Uso de las Curvas de calibración de Adición Estándar .

En este sentido los efectos de matriz son igualados en los patrones al igual que existen en la muestra. .PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar El empleo más habitual del Método de las Adiciones Patrón es para eliminar la existencia de errores sistemáticos generados por el efecto de matriz por parte de la muestra.

. antes de efectuar la medida.Curva de Calibración de Adición Estándar Formas de aplicación de la Adición Estándar: – Adicionar diferentes volúmenes de disolución patrón a varias alícuotas de muestra del mismo tamaño. – Adicionar incrementos sucesivos de volúmenes del patrón sobre un volumen fijo de muestra exactamente medido. Después cada disolución se lleva a un volumen fijo. requiere el control del volumen total en cada incremento.

de la disolución problema con concentración cX volúmenes variables de una disolución patrón de analito que tiene una concentración cS.Curva de Calibración de Adición Estándar – Preparación de la serie de disoluciones: – Preparar una serie de matraces aforados de volumen VT y añadir alícuotas idénticas. VX. reactivos apropiados y diluir hasta el volumen determinado VT. y – medir la Señal S .

1 Muestra vol.Curva de Adición Estándar Uso: minimizar interferencias Preparación de los patrones •En cada matraz vierta el mismo volumen de muestra •Agregue cantidades o volumenes creciente de patrón o estándar •Diluya a volumen conocida e igual todas las solucioneste ejemplo Solución no. 10 2 5 1 10 3 5 3 10 4 5 4 10 solvent e estánd ar muestr a Std Conc=10 ppm . 5 Std vol. 0 Total vol.

10 2 x = 4.Adición Estándar Para calcular la concentración de la muestra x = 2.20 ppm 2 0 2 4 .

PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar .

Pendiente Calibración Externa= Pendiente Adiciones Patrón No hay efectos de matriz Pendiente Calibración Externa < Pendiente Adiciones Patrón Sí hay efectos de matriz: calibrado interno revela exaltación de la sensibilidad Pendiente Calibración Externa> Pendiente Adiciones Patrón Sí hay efectos de matriz: calibrado interno revela inhibición de la sensibilidad .

PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar Dos diseños incorrectos en Calibración Interna Intervalo de concentraciones demasiado grande Intervalo de concentraciones demasiado pequeño .

. En términos estadísticos es menos preciso porque la determinación se realiza por extrapolación.Protocolos de Calibración Método de las adiciones estándar Cada muestra requiere su propia calibración. La automatización es difícil. Se necesitan grandes cantidades de muestra.

Curva de Calibración por Adición Estándar La concentración de la muestra viene dado por: bcs Cx = mVX .

Curva de Calibración de Patrón Interno – Se basa en la medida de la respuesta del analito y de otra sustancia empleada como patrón interno. . – Para esto se preparan una serie de patrones con cantidades variables y exactamente conocidas de analito y de patrón interno y se mide la respuesta del analito y del patrón interno.

.Curva de Calibración de Patrón Interno – Para construir la curva de calibración se representa el cuociente de las respuestas entre el analito y el patrón interno. para cada uno de los patrones. Ca/Cpi. respecto al cuociente de las concentraciones. Ra/Rpi.

. se calcula la relación de las respuestas y se determina la relación de concentración por interpolación en la recta de calibración.Curva de Calibración de Patrón Interno – A continuación se le agrega una cantidad conocida de patrón interno a la muestra y se miden sus señales.

que no interactúan entre sí. la absorbancia total de la solución corresponde a la suma de las absorbancias de las especies absorbentes” Ley de Beer: – AT = A1 + A2 + A3 – AT = a1bc1 + a2bc2 + a3bc3 .Principio de aditividad de la Ley de Beer Sistemas multicomponente : “Si una solución contiene dos o más sustancias absorbentes.

000 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 -0.500 1.EJEMPLO Para obtener el espectro de un compuesto absorbente. 2.500 . c) seleccionar el rango de concentraciones para las curvas de calibración.500 0. y d) elegir una longitud de onda y un rango de concentración para la curva de calibración que permita medir muestras cuyos contenidos del compuesto absorbente se encuentra entre 10 y 70 ppm. a) elegir tres longitudes de onda de trabajo.000 0.500 50 ppm 25 ppm 10 ppm 2. se prepararon tres soluciones de distintas concentraciones y se midieron sus A entre los 300 nm y 820 nm.000 1. Las medidas se resumen en el siguiente gráfico. b) comprobar si se cumple la Ley de Beer a las longitudes de onda seleccionadas.

Principio de aditividad de la Ley de Beer – AT = A1 + A2 – AT = a1bc1 + a2bc2 Si se miden las A a las  de máxima absorción para cada especie y calculando previamente las absortividades a esas  y manteniendo b constante. se pueden obtener las concentraciones de la mezcla por medio de un sistema de ecuaciones: .

Principio de aditividad de la Ley de Beer Para una mezcla de dos componentes absorbentes: c1 + c2 AT = a1bc1 + a2bc2 a11bc1 + a21bc2 = A T  a12bc1 + a22bc2 = A T  1 para c1 2 para c2 .

y se miden por separado – Es posible determinar X e Y despejando las incógnitas en la ecuación: A’  ’y b ’x b A’ A’’ ’’y b ’’x b A’’ – X = ----------------------’x b ’y b ’’x b ’’y b Y = --------------------’x b ’y b ’’x b ’’y b  Cada símbolo a b es un determinante = ad – bc c d .Cuando los espectros están bien resueltos – Los valores de se aplican a cada especie para cada longitud de onda.

Ejemplo – Si las  de los compuestos X e Y determinadas con compuestos puros son 272 nm 327 nm  M-1 cm-1 x 16440 3990 y 3870 6420 – Una mezcla de los compuestos X e Y en una celda de 1. .00 cm tiene una absorbancia de 0.559 a 327 nm.957 a 272 nm y de 0. Hallar las concentraciones de X e Y en la mezcla.

00 cm tiene una absorbancia de 0.Principio de aditividad de la Ley de Beer Una mezcla de los compuestos X e Y en una celda de 1. . Hallar las concentraciones de X e Y en la mezcla.559 a 327 nm.957 a 272 nm y de 0.

95 x 10-5 M .43 x 10-5 M Y = 5.Resultados X = 4.

Principio de aditividad de la Ley de Beer Mezcla de tres componentes absorbentes: c1 + c 2 + c 3 AT = 1bc1 +  2bc2 +  3bc3 b cte A1 = 11c1 + 21c2 + 31c3 A2 = 12c1 + 22c2 + 32c3 A3 = 13c1 + 23c2 + 33c2 para 1 para 2 para 3 .

Principio de aditividad de la Ley de Beer Mezcla de tres componentes absorbentes: Resolución: matriz [3*3] -1 c1 c2 c3 = A1 A2 A3 11 12 13 21 22 23 3 1 32 33 .

. esto puede minimizar mediante: – Uso de la espectrofotometría de derivadas – Uso de longitud de onda dual. mediante modulación de la longitud de onda. fuente de corriente alterna.Aplicaciones de la Ley de Beer: aditividad Espectrofotometria de derivadas Una de las dificultades mayores es la selección de las longitudes de onda para las mediciones.

Principio de aditividad de la Ley de Beer: uso de espectrofotometría de derivadas Espectro normal: A :  A   Espectro derivado:  •Se grafica la primera derivada en función de la longitud de onda .

Titulación Fotométrica A + B C + D Especies Absorbentes: – Analito – Reactivo o Titulante – Producto .

Titulaciones Fotométricas
Absorbe el analito solamente

A

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotométricas
Absorbe el titulante solamente

A

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotométricas
Absorbe el producto solamente

A

Peq.

mL Titulante

mL Titulante .Titulaciones Fotométricas Absorbe el analito y el titulante A Peq.

mL Titulante . pero el primero el doble que el segundo A Peq .Titulaciones Fotométricas Absorbe el producto y el titulante.

– Para soluciones cuyas concentraciones no modifiquen grandemente el índice de refracción de las soluciones .01 M) de la mayoría de las sustancias – Para soluciones de bajo contenido iónico – Para soluciones con bajo contenido de grandes especies moleculares de gran tamaño que puedan afectar electrostáticamente a la especie absorbente. – La Ley de Beer se cumple para una radiación monocromática que atraviesa una disolución diluida.Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer – La Ley afirma que la A es proporcional a la concentración de la especie absorbente. Limitaciones : – Sólo para soluciones diluidas (≤0. cuando la especie absorbente no participa en un equilibrio que depende de su concentración.

Por cambios en el equilibrio químico de la especie absorbente. solubilidad. por efecto de cambios de pH. disiociaciones. entre el analito y el solvente. temperatura.Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer Desviaciones : – Químicas: Por asociaciones. . y/o reacciones entre los componentes de la muestra con el analito. normalmente por causa de las diluciones.

Esta radiación se produce por efectos de dispersión de los diferentes componentes ópticos del sistema monocromador.Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer Desviaciones : – Instrumentales: Por el no cumplimiento de hacer incidir sobre la muestra un haz verdaderamente monocromático como lo contempla la Ley. radiación que contamina la radiación separada por el sistema selector de longitud de onda. . Por la presencia de radiaciones parásitas.

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer Desviaciones : – Instrumentales: Efecto del ancho de banda. Efecto de la utilización de longitudes de onda que correspondan a los extremos útiles de los espectrofotómetros. .

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