Espectrofotometría

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Espectrofotometro.

La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones

químicas y biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la
radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida
de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Contenido
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 1 Principio de la Espectrofotometría
o 1.1 Ley de Beer
o 1.2 Ley de Lambert
o 1.3 Ley de Bouguer-Beer-Lambert
o 1.4 Transmitancia y absorción de las radiaciones
 2 Aplicaciones
 3 Véase también
 4 Referencias

[editar] Principio de la Espectrofotometría

Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser
completamente transparente absorbe radiación de longitudes de ondas que no pertenecen al
espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura
de las moléculas, y es característica para cada sustancia química.

Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante
no puede producir ningún efecto sin ser absorbida.

El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz
blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda
no absorbidas.

La espectrofotometría ultravioleta-visible usa haces de radiación del espectro

electromagnético, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el
de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los
materiales en la región ultravioleta y visible del espectro.

Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce también como rango de uv cercano , la

espectrofotometría visible solamente usa el rango del campo electromagnético de la luz
visible , de 400 a 800 nm.

Además, no está de menos mencionar el hecho de que la absorción y trasmitancia de luz

depende tanto de la cantidad de la concentración y de la distancia recorrida.

[editar] Ley de Beer

La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la
concentración en la solución.

Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azúcar diluida y en otro tenemos un
vaso con la misma cantidad de agua pero con más azúcar diluida. El detector es una celda
fotoeléctrica, y la solución de azúcar es la que se mide en su concentración.

Según la ley de Beer, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la
cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo;
ya que en el segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de
átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos.

[editar] Ley de Lambert

En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la
distancia recorrida por la luz.

Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos que ambos tiene la
misma cantidad de agua y la misma concentración de azúcar, pero, el segundo tiene un
diámetro mayor que el otro.
Según la ley de Lambert, si hiciéramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la
cantidad de luz que saldría del otro lado seria mayor que si repitiéramos esto en el segundo;
ya que en el segundo, las ondas electromagnéticas chocan contra un mayor número de
átomos o/y moléculas y son absorbidos por estos; de la misma forma que se explicó en la
ley de Beer.

[editar] Ley de Bouguer-Beer-Lambert

Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert (también conocida como ley
Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinación de las citadas anteriormente.

[editar] Transmitancia y absorción de las radiaciones

Al hacer pasar una cantidad de fotones o de radiaciones, por las leyes mencionadas
anteriormente, hay una pérdida que se expresa con la ecuación:

It/Io=T-kdc''

Donde It , es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda

fotoeléctrica (llamada radiación o intensidad transmitida); y Io que es la que intensidad
con la que sale al atravesar la celda (radiación intensidad incidente) y la relación entre
ambas (T) es la transmitancia.

En el exponente, el signo negativo se debe a que la energía radiente decrece a medida que
el recorrido aumenta. Donde k es la capacidad de la muestra para la captación del haz del
campo electromagnético, d es la longitud de la cubeta de espectrofotometría que recorre la
radiación, y c es la concentración del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta.

La ecuación simplificada de la ley de Beer-Lambert

A = ε.d.c

Comprende a la mínima ecuación que relaciona la concentración (c), la absorbancia de la

muestra (A), el espesor recorrido por la radiación (d) y el factor de calibración (ε). El factor
de calibración relaciona la concentración y la absorbancia de los estándares.

La absorción (o absorbancia) es igual a A, la es el logaritmo del reciproco de la

transmitancia:[1]

A= log 1/T

lo que es igual a:

A= -log T
Las ecuaciones mencionados de las leyes son validas solo y solo sì:[1]

 La radiación incidente es monocromática.

 Las especies actúan independientemente unas de otras durante la absorción.
 La absorción ocurre en un volumen de sección trasversal uniforme

[editar] Aplicaciones
Las aplicaciones principales son:

 Determinar la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto

utilizando las fórmulas ya mencionadas.
 Para la determinación de estructuras moleculares.
 La identificación de unidades estructurales especificas ya que estas tienen distintos
tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías
 ESPECTROFOTOMETRÍA
 La espectrofotometría se refiere a métodos cuantitativos de análisis químico que
utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias químicas. Se conocen
como espectrofotometría de adsorción visible (colorimetría), ultravioleta, infrarroja.
La espectrofotometría se basa en principios colorimétricos y comúnmente se usa
para medir la concentración de dióxido de azufre. En este proceso, los colorantes y
productos químicos se combinan con una solución que contienen dióxido de azufre.
El color de la solución da lugar a diferentes cantidades de luz absorbida .  La
cantidad de luz absorbida, medida con un espectrofotómetro, indica la cantidad de
dióxido de azufre.
 LEY DE BOURGUER-LAMBERT-BEER
 Bourguer, Lambert y Beer establecieron relaciones de la variación de la intensidad
de luz transmitida por una muestra con el espesor o con la concentración de ella,
para materiales translúcidos. Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-
Lambert-Beer. O la ley general de la espectrofotometría que permite hallar la
concentración de una especie química a partir de la medida de la intensidad de luz
adsorbida por la muestra. Esta ley se puede expresar en términos de potencia de luz
-abc
o de intensidad de luz, asumiendo luz monocromática, como It/Io= 10 . It es la
intensidad de la luz transmitida, Io es la intensidad de luz que proviene de la fuente,
 a el coeficiente de absortividad molar , b la longitud de trayectoria del haz a través
de la muestra.
 La relación It/Io se conoce como transmitancia T , y es la medida primaria que se
realiza en los instrumentos para medir la absorción de luz por parte de una muestra.
Normalmente se expresa en forma porcentual y se llama porcentaje de
transmitancia. La luz adsorbida sería la diferencia entre la intensidad de luz
incidente y la intensidad transmitida después de pasar a través de la muestra.
 Cuando se toma el logaritmo decimal negativo de la relación It/Io , entonces:
 -log It/Io = - log T
 relación que representa la cantidad de luz adsorbida por la muestra . Esta relación
recibe el nombre de absorbancia y se designa por A. Obsérvese que a diferencia de
la transmitancia, la absorbancia aumenta a medida que aumenta la atenuación del
haz.
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 La ley de Bouguer-Lambert-Beer se puede escribir de las siguientes formas:
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 It/Io== 10 -abC
 -log T = -abC
 -log T = A= abC
 Donde C es la concentración del soluto , a el coeficiente de absortividad molar y b
la absorbancia es adimensional. El coeficiente de absortividad molar es función de
la longitud de onda, el índice de refracción de la solución y es característico de cada
sistema soluto-solvente ,e s una propiedad intensiva, no depende de la
concentración y representa la absorción de luz por mol de soluto para una longitud
de onda. Al no conocer el peso molecular de la sustancia de ley de Beer se puede
expresar como:
 A=abC
 Donde a el coeficiente de absortividad molar y sus unidades depende de las
unidades de concentración utilizadas , que pueden estar en g/L o g/lOOmL. A
continuación está la representación de la ley de Beer:
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 El registro de la variación del coeficiente de absortividad molar, o de absorbancia ,
o de transmitancia, en función de la longitud de onda da origen al espectro o curva
espectral que indica las características de adsorción de la sustancia con relación a la
longitud de onda. En ocasiones el espectro de absorción ,o en función de la
transmitancia, llamándose el espectro de transmisión . Se igual forma cuando se
registra la emisión de radiación los espectros se denominan espectros de emisión o
espectros de fluorescencia
  
 FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA
 • La radiación Electromagnética y su Interacción con la Materia:
 Los modelos explicativos de la estructura de la materia que tienen como
fundamento las características ondulatorias de las partículas que la constituyen
proporcionan un marco de referencia para describir las interacciones entre la
radiación electromagnética y la materia. Estas interacciones son el fundamento de
las aplicaciones espectroscópicas. En algún medio material la interacción entre los
campos eléctricos y magnéticos que existen en la materia y los correspondientes de
la radiación pueden llegar a reducir esa velocidad de propagación, por ello sólo en
el vacío se observa la velocidad máxima. Si asignamos una longitud de onda
característica a cada tipo de radiación, la propagación de esa onda se hará con una
frecuencia tal que al multiplicarla por su longitud debe darnos la velocidad de
propagación. Esto es c = v, donde  es la longitud de onda y v es la frecuencia de
 esa onda. c O 2y99792458E8 m*s-l es la velocidad de luz en el vacío. La energía
asociada con cada onda, se obtienen mediante la ecuación de Plank:
 E = hv
  
 • Absorción y Emisión de radiación por Parte de la Materia:
 Una descripción simple de la estructura de la materia permita explicar los enlaces
entre los átomos para formar moléculas en términos de la localización de ciertas
partículas subatómicas. Estas partículas evidencian sus características ondulatorias
ya que interactúan con la radiación electromagnética. La molécula en forma estable
bajo las condiciones ambientales corrientes se encuentra en un determinado nivel
energético. Si la se logra hacer incidir sobre la molécula un fotón de radiación
electromagnética con energía apropiada, la molécula aumenta su contenido
energético absorbiendo el fotón. Entonces la molécula pasa a un estado excitado. La
molécula energizada se encuentra en un estado que no es estable en condiciones
ambientales corrientes y regresa a la condición estable y para lograrlo emite un
fotón con la energía que logró excitarla antes.
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 MEDIDA DE LA TRANSMITANCIA Y LA ABSORTIVIDAD
 Las medidas se realizan por medio de distintos tipos de instrumentos de
espectroscopia óptica como: La espectroscopia de emisión, espectroscopia de
absorción y la espectroscopia de fluorescencia y dispersión. En muchos
instrumentos, el dispositivo de lectura consiste en una escala lineal calibrada en
unidades de O a 100% T . Con este tipo de instrumentos una medida de
transmitancia se hace 3 pasos, Primero mientras está interrumpida la incidencia del
haz luminoso sobre el transductor por medio de un obturador, se realiza un ajuste
eléctrico hasta que la aguja del dispositivo de lectura marque 0; este paso se
denomina ajuste de la corriente obscura o T 0% . A continuación se hace un ajuste a
T 100% , con el obturador abierto y la celda con el disolvente colocada en la
trayectoria del haz. Por último, se sustituye la celda con el disolvente por la celda
que contiene la muestra. También se puede construir una escala de absorbancia.
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 EQUIPOS Y MÉTODOS UTILIZADOS PARA EL ESTUDIO DE LA
E8PECTROFOTOMETRÍA
 Los instrumentos espectrofotómetros se dividen dos tipos; simples y de doble haz.
 .Los espectrofotómetros de un solo haz requieren el intercambio de la muestra y de
las soluciones de referencia para cada longitud de onda, por que están mejor
capacitados par ala operación manual que para la automática. Un instrumento muy
usado principalmente para el rango del visible (de 340 a 625 nm, pudiendo
extenderse por el cambio del fororubo a 950nm) es el Spectronic-20 de la Bausch &
Lomb .
 ٠     Espectrofotómetros de Ultravioleta:
 Generalmente los espectrofotómetros para el ultravioleta y el visible tienen como
límite inferior el rango que va de los 165 a los 210nm. El límite superior nunca es
menor de 650 nm, pudiendo extenderse hasta los 1000 nm o más .Hasta 1963 había
muy pocos instrumentos que llegaran a 210 nm, límite impuesto principalmente por
la absorción del cuarzo natural. El uso de la sílice vítrea de calidad óptima ha
abierto grandes posibilidades en la observación de compuestos que contiene dobles
ligaduras y de algunos otros grupos que absorben en esta región . El primer
espectrofotómetro del ultravioleta con detección fotoeléctrica que apareció en el
mercado norteamericano fue el modelo DU de Beackman.
  
 ٠     Espectrofotómetro de Doble Haz:
 Una posible fuente de error en cualquier tipo de absorciómetro es le provocada por
las fluctuaciones que aparecen en la intensidad de la fuente de radiación . Las
variaciones a corto plazo generalmente resultan de la falta de regulación en la
potencia de la línea. A largo plazo las variaciones adicionales pueden deberse al
deterioro de la lámpara o de otros componentes . Por supuesto cualquier cambio en
la intensidad durante la comparación entre el problema y el tipo, causará un error.
La manera más efectiva de eliminar los efectos derivados de las variaciones de la
fuente es el empleo de un diseño de doble haz . La ventaja de este espectrofotómetro
 es que ofrece cortar la radiación en una sucesión de pulsos . Por una parte, facilita el
diseño de un sistema electrónico que escoja las señales pertenecientes a los dos
canales. Por la otra, permite una importante discriminación de las señales
indeseables (ruido) y de la radiación extraviada no cortada, gracias a que el
amplificador puede sintonizarse para que corresponda solamente a las señales
moduladas de la frecuencia interrumpida.
 ٠     Espectrofotómetros de Longitud de Onda Dual
 Es posible diseñar un instrumento en donde dos haces de radiación de diferente
longitud de onda pasen simultáneamente a través de una sola celda . Este principio
se emplea en diferentes formas: 1) Puede utilizarse sin ajuste para medir dos
componentes , registrando su variación con el tiempo para estudios cinéticos o para
procesos de control .2 ) una longitud de onda puede fijarse en un punto de
absorbancia despreciable mientras que la otra sea variada . 3) Puede operarse con la
misma configuración que 2) para dar espectros de absorción correctos en presencia
de una turbidez alta; en este caso la trayectoria de la longitud de onda efectiva es
inherentemente incierta debido al efecto de la materia en suspensión, lo que
garantiza que la trayectoria de ambos rayos sea la misma. 4) Finalmente , las dos
longitudes de onda pueden ser revisadas al mismo tiempo , aunque con un desajuste
de unos cuantos décimos de nanómetro , de modo que el espectrograma resultante
muestra la diferencia AA entre las dos absorbancias a las dos longitudes de onda
contra la longitud de onda promedio, obteniéndose así una curva de derivada.
  
 MÉTODOS:
 En la siguiente tabla están las señales más comunes que se utilizan con fines
analíticos. Las primeras 6 corresponden a la emisión de radiación o a la interacción
de éstas con la materia. Las 3 siguientes son eléctricas; las 5 finales son   de
naturaleza variada. Los métodos gravimétricos y volumétricos se conocen como
métodos clásicos de análisis y los demás se llaman métodos instrumentales.

Señal Métodos analíticos basados en la medición de la señal.

Emisión de radiación Espectroscopia de emisión (rayos X, ultravioleta, visible),
fotometría de llama, fluorescencia, métodos radioquímicos.
Absorción de la radiación Espectrofotometría (rayos X, ultravioleta, radiación
visible, infrarrojo); colorimetría; adsorción atómica.
Dispersión de radiación Turbidimetría, nefelometría, espectroscopia Raman.
Refracción de radiación Refractometría, interferometría.
Difracción de radiación Rayos X, métodos de difracción eléctrica.
Rotación de radiación Polarimetría, dispersión óptica rotatoria y dicroísmo
circular.
Potencial eléctrico Potenciometría, cronopotenciometría.
Comente eléctrica Polarografía, amperometría culombimetría
Resistencia eléctrica Conductimetría.
Razón masa a carga Espectrometría de masa
Velocidad de reacción Métodos cinéticos
Propiedades térmicas Conductividad térmica y métodos de entalpia
Volumen Análisis volumétrico
Masa Análisis gravimétrico

  
  APLICACIONES
 FOTÓMETROS PARA INFRARROJO PARA LA DETERMINACIÓN RUTINARIA
DE CONTAMINANTES ATMOSFÉRICOS
 La figura es un diagrama de un fotómetro portátil para infrarrojo que ha sido
diseñado para la determinación cuantitativa de rutina de contaminantes orgánicos en
la atmósfera. La fuente es una varilla de cerámica unida a un alambre de nicromo, y
el transductor es un detector piroeléctrico. Hay a la disposición una variedad de
filtros de interferencia que transmiten en la región de 3000 a 75° cm -1 o 3.3 a 13 )
^m, cada uno diseñado para la determinación de un compuesto específico. Los
filtros son fácilmente intercambiables. Las muestras gaseosas se introducen a la
celda por medio de una bomba operada por batería. La longitud de la trayectoria de
la celda como la que se muestra es de 0.5 m; una serie de espejos reflejantes (no se
muestran) permiten incrementos en la longitud de la celda a 20.5 m en incrementos
de 0.5 m. Esta característica refuerza grandemente el intervalo de concentración del
instrumento. Se tienen pruebas de que el fotómetro es sensible a pocos décimos de
una parte por millón de sustancias como acrilonitrilo, hidrocarburos clorados,
monóxidos de carbono, fosgeno y cianuro de hidrógeno.
  

Tablilla de circuitos
 

Motor de
obturación
 
Mecanismo de
obturación
 
Panel de

control
 

  

fuente
 

 AGRICULTURA: Cuantificación de macro y micro elementos presentes en suelo,

agua y foliar.
 ACUACULTURA: Determinación y cuantificación de metales traza en agua,
sedimentos marinos y dietas.
 ECOLOGÍAS: Caracterización de metales pesados en diferentes zonas, para
determinar o prevenir contaminaciones antropogénicas en desarrollos turísticos,
industriales y costeros.
 MINERÍA : Determinación de metales, ferroso y no ferrosos así como metales
preciosos.
  

 BIBLIOGRAFÍA
 1.      http://www.agro.unicQr.edu/posgrado/cursos%202002/program/espectro
uv.htm
 2.      http://www.analitica.com.ar/equipos/espectrofotometria.htm

http://wwwprof.uiiiandes.edu.co/-mfquimi/ANALISIS/irdcio/con^^
 3.      http: / /www,seqa.es/libros.htm
 4.      http://www.ua.es/centros/ciencias/progranias/0203/ingquimicaB052/optati
vas/B052-99-7356.pdf
 5.      Skoog, Douglas A., West, Donaid M., Holler, F. James. QUÍMICA
ANALÍTICA. McGraw Hill. México 1995. Páginas 257-281/Introducción a
electroquímica