Investigación de Nuevos

Fármacos: Antibióticos I
Objetivos

Aprender conceptos básicos acerca de Antibióticos

Conocer métodos para el aislamiento de organismos

productores de antibióticos

Desarrollar un métodos de aislamiento de organismos

productores de antibióticos

Identificar cepas microbianas productoras de

antibióticos
 Investigación de fármacos nuevos
La investigación de
Esto es así a causa del
fármacos nuevos,
creciente conocimiento
eficaces y seguros se
de los peligros Por lo que debemos demostrar
ha convertido en un
potenciales engendrados que un fármaco:
proceso cada vez
en el cuerpo por agentes
más complicado y
externos.
costoso.
No tiene efectos nocivos sobre la
salud a corto ni a largo plazo

No dejará una huella sobre el

material genético que afecte a la
descendencia

Desempeñará el papel
farmacológico para el que se ha
recomendado
 Antibióticos Microbianos
Anti- = En contra -biôtikos = de la vida o de los seres vivos
Antibióticos = Que se opone a la vida

Los antibióticos son Es una sustancia química

medicamentos que combaten
las infecciones bacterianas en
personas y animales.
Funcionan matando las
bacterias o dificultando su
crecimiento y multiplicación.
producida por un ser vivo o
derivado sintético.
Los Antibióticos en los
organismos vivos se sintetizan
como metabolitos
secundarios.
“Debido a que la gran mayoría
de estos organismo productores
de antibióticos se encuentran en
el suelo, deben competir con
otros organismos por el acceso
a las fuentes de nutrición.”

Por lo que estos metabolitos son

sintetizados para afectar a otros
microorganismos.
Antibióticos Microbianos

La era de los antibióticos:

Inicia con el descubrimiento de la penicilina en 1928, el científico británico

Alexander Fleming, descubrió por accidente una sustancia de crecimiento
natural que podía atacar a ciertas bacterias.

Fleming observó que colonias de la bacteria Staphylococcus aureus habían

sido agotadas o eliminadas por un moho que creció en la misma placa de Petri.

Determinó que el moho elaboraba una sustancia que podía disolver las
bacterias. Llamándola penicilina, por el moho Penicillium que la produce.

Al demostrar su capacidad de destruir bacterias infecciosas, a partir de 1941,

encontraron que incluso los niveles bajos de penicilina curaban infecciones muy
graves y salvaban muchas vidas.
 Antibióticos Microbianos

Los metabolitos Los metabolitos secundarios microbianos tienen características comunes:

microbianos secundarios,
han contribuido al
Son moléculas orgánicas de bajo peso molecular (< 3.000) con una
descubrimiento de
amplia complejidad estructural; la estereoquímica determina papel crucial
candidatos clínicos desde el
para sus actividades biológicas.
fin del siglo XIX

Muestran amplias actividades biológicas, especialmente de relevancia

farmacéutica (antimicrobianos, antitumorales, antivirales,
farmacológicos, y actividades similares).

Las actividades biológicas son atractivos para la industria farmacéutica;

estos compuestos a menudo presentan gran potencia y selectividad
cuando se prueban frente a diversos objetivos biológicos.
 Aislamiento de Antibióticos

Los antibióticos son Dado que los microorganismos que crecen en su hábitat natural no
metabolitos microbianos producen antibióticos, o al menos no lo hacen en cantidades
que, en elevada dilución, apreciables.
pueden inhibir el
crecimiento de los
microorganismos. ¿CUÁL SERÁ EL PROCEDIMIENTO PARA SU DETECCIÓN Y
POSIBLE UTILIZACIÓN?

Se han empleado con frecuencia algunos métodos para el

aislamiento de organismos productores de antibióticos,
a partir de su ambiente natural.
 Métodos de Aislamiento: Primer método

Se prepara una suspensión de suelo normal, jardín o de tierra de

labor en agua estéril, y se extienden porciones de la misma sobre la
superficie de placas de agar nutritivo estéril.

Tras unos pocos días de incubación a temperatura ambiente, suelen

aparecer numerosas colonias microbianas,

Algunos de estos microorganismos producen antibióticos y son capaces

de inhibir el crecimiento de otros microorganismos presentes en la
placa.

Este fenómeno da lugar a una zona

transparente alrededor de la colonia
productora de antibióticos, que de este
modo puede seleccionarse para su posterior
estudio.
 Métodos de Aislamiento: Segundo método

Es similar al anterior, pero emplea una mayor dilución, dando lugar

a un menor número de colonias por placa (evita el crecimiento
confluyente de las mismas).

Una vez desarrolladas las colonias, se esparce sobre las placas

una suspensión de bacterias o levaduras en el ensayo, y se repite la
incubación durante uno o dos días.

En general, bacterias grampositivas suelen emplearse

Staphylococcus aureus, Sarcina lútea o Bacillus subtilis; las
gramnegativas son Escherichia coli o Pseudomonas aeruginosa y la
levadura Sacccharomyces cerevisiae.

Se observan las áreas de inhibición de los microorganismos de

ensayo y se seleccionan las correspondientes colonias para una
posterior evaluación.
 Métodos de Aislamiento: Tercer método

Se siembra sobre agar un cultivo puro del microorganismo. Tras el intervalo de tiempo adecuado (de 4 a 10 días,
según la especie), se efectúa una siembra cruzada del mismo agar con alguno de los microorganismos de ensayo
antes mencionado.

Se estudia la extensión de la inhibición de dichos microorganismos y, si se observa una inhibición

significativa, se selecciona al productor de antibióticos para un ulterior estudio.

Puesto que se han descrito más de 4 000 antibióticos, existen notables posibilidades de que un
antibiótico nuevo, producto metabólico de un microorganismo aislado por primera vez, pueda
encontrarse relacionado con alguno de los antibióticos ya existentes en la bibliografía científica.

Por lo que se emplean diferentes procedimientos, como son la cromatografía en papel o

capa fina, cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), la electroforesis en papel y
métodos biológicos en los que se emplean cultivos seleccionados, tanto de
microorganismos resistentes como sensibles
 Procedimiento: Preparación de diluciones

a) Pesar 1 g de muestra de suelo o de tierra de 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

cultivo (jardín chacra, etc.).
b) Colocarlo en un tubo de ensayo que
contenga 9 ml de agua destilada estéril,
agitar, así se habrá conseguido la dilución
1:10 ( 10−1)
c) De la dilución anterior se mide 1 ml y se
coloca en otro tubo que contenga 9 ml de
líquido diluyente, agitar, así se obtiene la
dilución 1:100.
Proseguir en forma semejante al paso anterior
hasta obtener la dilución 10-6
Concentración: 10−1 10−2 10−3 10−4 10−5 10−6
Composición: 1gr Tierra 9ml 9ml 9ml 9ml 9ml
+ 9ml H2O H2O H2O H2O H2O H2O
 Procedimiento: Siembra

a) En una placa estéril colocar como medio de cultivo agar

nutritivo estéril.
b) Medir 0.2 a 0.3 ml de la dilución 10-4. 10-5, 10-6.
c) Colocar sobre la superficie del medio de cultivo.
d) Realizar la extensión con una espátula de Drigalsky, sellar.

Colocar sobre el
medio de cultivo Extendemos
0.2 a 0.3 mL de la dilución
la dilución

10−4
 Procedimiento: Incubación y Lectura

Llevar a incubación a temperatura ambiente durante 3 a 5 días.

a) Realizado el cultivo de cepas de bacterias, hongos y
levaduras productoras de antibióticos.
b) Identificar y rotular los halos de inhibición con diámetro
más grande alrededor de cada una de las colonias de los
microorganismos.

Al paso del
tiempo, se
observa el
crecimiento
Cuestionario

1. Después de haber identificado cepas de microorganismos productoras

de antibióticos, qué haría Ud. para aislar y purificar el principio activo.
Haga un esquema.
2. ¿A qué se denomina antibiótico?
3. ¿Diferencias entre antibióticos y quimioterápicos propiamente dichos?
4. Mencione 5 especies de microorganismos productoras de antibióticos
5. Liste 10 antibióticos, con su DCI, nombre químico y nombres de marca
Referencias Bibliográficas
• Davies J. How to discover new antibiotics: harvesting the parvome. Current opinion in chemical biology.
2011 Feb 1;15(1):5-10.
• Newman DJ, Cragg GM. Natural products as sources of new drugs from 1981 to 2014. Journal of natural
products. 2016 Mar 25;79(3):629-61.
• York A. New drugs underfoot?. Nature Reviews Microbiology. 2018 Aug;16(8):455.