Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Práctica 4. Curvas de titulacion de aminoacidos (titulaciones potenciométricas)
Integrantes:Hernandez Lopez Daniela
Jacome lopez Stephani Nicole
Introducción
Las curvas de titulación de aminoácidos son una
herramienta importante para comprender el
comportamiento de los aminoácidos en solución.
Estas curvas se generan mediante la titulación de
una solución de aminoácidos con un ácido o una
base fuerte, y midiendo el pH de la solución en
diferentes puntos de la titulación.
Cada aminoácido tiene un punto isoeléctrico (pI)
específico, que es el pH en el cual el aminoácido
tiene una carga neta igual a cero. Por encima del
pI, el aminoácido tiene una carga neta negativa y
por debajo del pI, tiene una carga neta positiva. La
curva de titulación de un aminoácido muestra
cómo cambia su carga neta a medida que se titula
la solución con ácido o base.
Además de proporcionar información sobre la
carga neta de los aminoácidos, las curvas de
titulación también pueden ayudar a determinar la
acidez o basicidad de la solución y la capacidad
tamponante de los aminoácidos.
Objetivo
Aprender a interpretar las gráficas de las curvas
de titulación y observar el comportamiento de los
aminoácidos cuando se titulan con una base y un
ácido, y también por el método Sörensen.
Resultados
Imagen 1. Curva de titulación del NaOH con HCl y CH3COOH.
Grupo: 3OV1
Sección: 3
Figura 1. Gráfica de curvas de titulación de glicina y glicina con formol
utilizando como titulante NaOH y HCl
Discusión
En la titulación con NaOH 0.1 N que es una base
fuerte, observamos el comportamiento de ácidos
fuertes (como el HCl),la pendiente se mantuvo
constante ya que es la misma molécula (HCl) que
dicta el pH, el pH no aumentó mucho hasta que
agregamos los últimos 1.5 mL de base. Después
de que el -OH se disocia completamente (ya que
ácidos y bases fuertes se disocian
completamente), el pH fue más alto hasta el final
de la titulación, en este punto cambió el pH porque
la molécula cambió ya que se acabó el HCl y
quedó NaOH (imagen 1).
Con la siguiente curva de titulación que muestra el
ácido débil CH3COOH, el valor de pH inicial
aumenta con la primera alícuota y después de 5
mL aparece una zona amortiguadora, en la cual el
valor de pH no cambia mucho en esta zona
amortigua el pH a 4.8 , comienza a cambiar hasta
los últimos 4 ml. Esto pasa porque el ácido débil
no está completamente disociado, por lo que
tendrá una zona amortiguadora durante la
titulación. La concentración de iones H + y -OH se
mantiene constante en la zona hasta que la
concentración aumenta ya que los ácidos débiles
se disocian formando una base conjugada (imagen
1).
En la imagen 2 , la curva de titulación de la glicina
pone en evidencia que se comporta como
anfótero lo que quiere decir que puede actuar
como ácido o base dependiendo del medio en el
que este se encuentre, por lo tanto observamos
dos puntos de amortiguación de la glicina y
sus pKa. La glicina inició con un pH de 6 y a
medida que se agregó el HCl 0.1N llegó a un
punto de amortiguación en donde el pKa era
masomenos de 2.3, este pH corresponde al
grupo carboxilo se había desprotonado
quedando la mitad en su forma básica y la otra en
su forma ácida, podríamos deducir que el pka de
2.3 funciona como amortiguador, ya que un
incremento de HCl no cambia mucho el pH de la
glicina . Por otro lado, al titular la glicina con
NaOH 0.1N llegó a un punto de amortiguación
cercano a pka de 9.6, en donde el grupo amino
se disocia completamente y se desprotono
quedando la mitad en su forma básica y la otra en
su forma ácida, por lo que si agregamos más
NaOH tampoco provoca cambios muy grandes en
el pH por lo que funciona como otro punto
amortiguador para básicas.
Por último, se utilizó el método de Sörensen para
titular la glicina añadiendo formol, la reacción de
Sörensen nos ayuda a determinar qué grupo
funcional del aminoácido ya sea amino +NH3 o
COOH se desprotona o protona empleando HCl o
NaOH. Comenzamos con un pH de 4 aprox si
añadir titulante, entonces al añadir titulante de
NaOH tiene un punto isoeléctrico a un pH 7
aproximadamente, que es mayor al de la glicina,
la curva de titulación de la glicina cambia debido a
que el formol reacciona con los grupos amino para
formar una imina que al liberar protones
eliminando así su carácter anfifílico, sin embargo,
al añadir HCl los cambios de pH cambia similar al
de la glicina,puesto que hay una protonación del
grupo carboxilo.
Para calcular el pI se utiliza la ecuación de
Henderson-Hasselbach. Los valores de pKa
obtenidos fueron: pKa1=2.22 pKa2=9.32
Calculando su pI:
𝑝𝐼 =(𝑝𝐾𝑎1+𝑝𝐾𝑎2)/2=2.22+9.32/2= 5.77
De acuerdo a los datos teóricos y a la reacción
sabemos que los valores reales de pKa1=2.36,
pKa2=9.60 y su pI=5.97. Por lo que podemos
decir que nuestros datos y la curva de titulación
son correctos ya que es poca la diferencia con los
datos teóricos. Esta pequeña diferencia puede
deberse posiblemente a la hora de hacer las
técnicas para la titulación
Conclusiones
La curva de titulación nos ayuda a encontrar los
valores del pKa y pI.
Si los aminoácidos tienen carácter anfótero
pueden actuar como ácido o base dependiendo
del medio en el que este se encuentre.
Los puntos de pka determinados por las curvas de
titulación son correspondientes al teórico.
La reacción de Sörensen nos ayuda a
determinar qué grupo funcional del aminoácido
ya sea amino +NH3 o COOH si se desprotona o
protona.
Referencias bibliográficas
Rodwell, Victor W., Bender, David A., andBotham,
Kathleen M.. 2018. Harper.Bioquímica
ilustrada (31a. ed.). México:McGraw-Hill. 20 pp.
Stryer, L. L. (2013). Bioquímica 7a. Ed. 2 Tomos
reimpresión digital. Reverté.
Nelson,D.L y M.M (2005) "Principios de
Bioquímica".
Anexos