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PI521 - Grupo 4 - 3er TRABAJO (1) Rev en
PI521 - Grupo 4 - 3er TRABAJO (1) Rev en
15
Número de Grupo: 4
Integrantes:
Profesor responsable:
Lima – Perú
2022-II
Comentarios del Profesor:
Índice
Índice 1
Índice de tablas 2
Índice de figuras 2
Resumen 3
Introducción 4
Marco teórico 5
Biomaterial 5
Compósito 5
Tejido óseo 6
Regeneración ósea 7
Colágeno 7
Hidroxiapatita 8
9
Metodología 9
Extracción de colágeno a partir de piel de pescado 9
Extracción de colágeno a partir de escamas 10
Extracción de Hidroxiapatita (HAp) a partir de escamas 10
Síntesis de compósito Hidroxiapatita / Colágeno (HAp/Co) 12
Caracterización y cuantificación del colágeno extraído y de la hidroxiapatita 12
Resultados y discusiones 13
Aporte del artículo 15
Conclusiones 16
Bibliografía 17
1
Índice de tablas
Índice de figuras
2
Resumen
3
Introducción
La regeneración del tejido óseo se da durante toda la vida de forma natural, sin embargo,
cuando ya existe alguna fractura, pérdida de masa ósea derivado de alguna enfermedad como
algún tumor, alguna infección o degeneración, en donde el tejido ya ha sido destruido y este
deje que cumplir la función vital de dar soporte y de permitir la comunicación bien protegida
de la red sanguínea y la red nerviosa. Es necesario crear o inducir un tejido sustituto a través de
la ingeniería de tejidos que cumpla las funciones vitales del tejido, esto es posible gracias a la
compleja estructura a micro y nanoescala que presenta el hueso como material compósito
bioactivo, mezcla de hidroxiapatita y colágeno.
El colágeno es una de las principales proteínas estructurales del tejido conectivo de los
vertebrados, constituye alrededor del 30% de sus proteínas totales, es el principal componente
de tendones, piel, huesos, etc. El componente principal de la matriz extracelular de los
mamíferos es el colágeno tipo I, este contribuye a funciones fisiológicas como la protección de
tejidos y órganos, etc. Actualmente el colágeno se ha extraído de piel y huesos de animales
bovinos y porcinos; pero se ha determinado que pueden transmitir enfermedades, por lo que se
ha optado por la obtención del colágeno a partir de animales marinos, ya que el colágeno tipo I
es más común en piel, escamas, huesos y aletas de peces.
En el artículo en que nos hemos basado tiene como propósito mostrar los trabajos que se han
reportado respecto a la extracción de HAp y de colágeno a partir de desechos de pescado, ya
que esta recuperación puede ser una alternativa prometedora y amigable con el ambiente para
obtener precursores de biomateriales compósitos para regeneración ósea.
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Marco teórico
Biomaterial
Para ser considerado un biomateriales, un material debe cumplir con ciertos requisitos, como
ser biocompatibles, es decir, no causar reacciones adversas en el organismo y tener propiedades
mecánicas adecuadas para su uso en el cuerpo humano, además los biomateriales debe ser
resistente a la degradación y tener una vida útil adecuada para su uso en el cuerpo humano.Los
biomateriales pueden ser obtenidos de fuentes naturales mientras que los sintéticos son
obtenido de procesos químicos,unos ejemplos de biomateriales son el colágeno y la
hidroxiapatita que son usados en la reparación de huesos, estos pueden ser usados de diferentes
formas, como polvos, pastas o implantes sólidos.
Compósito
Un compósito es una sustancia formada por la combinación de dos o más elementos químicos
en proporciones definidas. En el caso de los compuestos de colágeno y hidroxiapatita, se trata
de dos sustancias que se encuentran naturalmente en el cuerpo humano y que juegan un papel
importante en la estructura y funcionamiento de varios tejidos y órganos.
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rellenar defectos óseos en la mandíbula. También se utilizan en productos cosméticos y de
cuidado personal para mejorar la apariencia y el aspecto de la piel.
Tejido óseo
Es el tejido que da fuerza, forma y estabilidad al cuerpo humano. El aspecto más fuerte de ese
sistema es la arquitectura ósea subyacente. El hueso es una forma modificada de tejido
conectivo, el cual está constituido por dos componentes principales: la matriz extracelular y las
células .La matriz ósea es un material extracelular con alta concentración de minerales a base
de calcio y fosfato, responsable de la naturaleza dura y calcificada del tejido óseo.
Las principales células encontradas en el tejido óseo son los osteoblastos, los osteoclastos y los
osteocitos. Estas células actúan en el mantenimiento de la homeostasis ósea, y sus funciones
incluyen la producción de matriz ósea.
Son factores determinantes en la clasificación del tejido óseo; la estructura histológica, la forma
de osificación, su apariencia en un corte transversal y el grado de madurez.
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Regeneración ósea
Ante alguna agresión qué supone una pérdida de sustancia, el organismo responde con un
proceso de restauración del tejido afectado, básicamente el proceso se va a iniciar con la
aparición de un coágulo sanguíneo que se va diferenciando en un tejido fibroso el cual rellena
el defecto, así este tejido dañado no conserva ni su arquitectura ni su función original y sus
propiedades y características no corresponden con las que previamente existían; en este caso se
ha producido una reparación del tejido. En algunos casos el proceso de restauración tiende a la
creación de un tejido similar al original y no hay diferencia alguna con el tejido circundante en
este caso se habla de regeneración de tejido.
La regeneración del tejido óseo se basa en tres vértices: La existencia de células competentes,
la presencia de la matriz celular insoluble y las moléculas reguladoras de función celular. En el
caso particular del tejido óseo también se debe considerar unos factores locales importantes
como el mecánico y el vascular, tanto por el efecto adverso de las fuerzas que pueden incidir
sobre el hueso como por la vascularización ósea.
Colágeno
El colágeno es una de las principales proteínas estructurales del tejido conectivo de los
vertebrados, constituye alrededor del 30% de sus proteínas totales ya que es el principal
componente de tendones, piel, huesos, tejidos del sistema vascular entre otros tejidos.
(Jongjareonrak , Benjakul, 2005)
El colágeno está constituido por un conjunto de tres cadenas polipeptídicas (1.000 aminoácidos
por cadena), agrupadas en una estructura helicoidal.
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Figura 2. Estructura del colágeno
Hidroxiapatita
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Figura 3. Arreglo atómico en la celda unitaria hexagonal de la hidroxiapatita, mostrando las posiciones
atómicas del Ca, P, O e H dentro de la celda unitaria
Metodología
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Extracción de colágeno a partir de escamas
Para realizar la extracción del colágeno a partir de las escamas de pescado, se propuso una
metodología que consiste en seguir los mismos pasos reportados anteriormente para la
extracción de colágeno a partir de piel, incorporándose algunas modificaciones en la
concentración de las soluciones y sustituyendo la eliminación de grasa en piel por la
descalcificación de escamas.
Ulfyana y colaboradores han descrito recientemente una metodología para extraer precursores
de HAp de las escamas del pescado (Figura ). En la cual se incluye como primer paso la
remoción de todo residuo biológico no deseado, para posteriormente ser sometidas a hidrólisis,
esterilización, secado y calcinación.
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Las muestras de escamas de pescado se lavan primero para liberar las impurezas que podrían
afectar el resultado final, luego se hierven las muestras con agua hirviendo. Después de hervir,
las muestras se lavan con agua y luego se drenan. Luego, las muestras se hidrolizan con NaOH
al 1% durante 2 horas, para eliminar la grasa. Posteriormente, las muestras se dejan a
temperatura ambiente durante 24 horas y se lavan con agua y luego se esterilizan en autoclave.
Después de que se lleva a cabo el proceso de esterilización, las muestras se secan en un horno
por 5 horas. Las escamas de pescado hidrolizadas forman un compuesto de CaCO3 que debe
convertirse en CaO como precursor de calcio en la calcinación. (Ulfyana, Anugroho, Sumarlan
& Wibisono, 2018)
Con ello, se obtiene el óxido de calcio como precursor de la HAp. Posteriormente vierten un
una solución el óxido de calcio con el precursor de fosfato (ácido fosfórico), una vez mezclados
estos componentes, se continúa con los tratamientos mecánico y térmico que permiten obtener
la HAp.
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Síntesis de compósito Hidroxiapatita / Colágeno (HAp/Co)
Para la síntesis de este compósito se propuso la obtención de este a través del método de
precipitación. El método de precipitación consiste en mezclar el colágeno con H₃PO₄ y por
adición incorporar el Ca(OH)₂, posteriormente dejar envejecer el material, filtrar y liofilizarlo.
Así se disolvió 1 gramo de colágeno soluble en ácido extraído de piel de pescado en solución
acuosa de H₃PO₄ 0,6 M. Se preparó Ca(OH)₂ 1,008 M a temperatura ambiente mediante
agitación continua usando un agitador magnético. La solución acuosa de colágeno H₃PO₄ se
añadió gota a gota al Ca(OH)₂ en condiciones de agitación con ph (11-12). La solución
obtenida se envejeció durante 24 horas seguido de una filtración. El producto filtrado se secó
por congelación para eliminar el contenido de agua con el material compuesto. A continuación,
el compósito de Hidroxiapatita / colágeno se trituró utilizando un mortero y una maza seguido
de un tamizado.
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microscopía electrónica de barrido (SEM) para analizar la morfología del material,
espectrometría de energía dispersiva (EDS) para cuantificar la presencia de los elementos
presentes en la muestra, entre otras técnicas.
Resultados y discusiones
En la Tabla 1, se muestra los diferentes autores que han extraído colágeno a partir de residuos
de pescado han encontrado diferencias en los rendimientos de colágeno obtenido. Esto podría
deberse, en parte, a las diferentes especies utilizadas, así como a la metodología y cuidado de la
temperatura durante la extracción. Se debe tener en cuenta que a la temperatura de
desnaturalización del colágeno respecto al lugar de origen de los peces, apunta que el colágeno
obtenido de peces que viven en aguas más frías, tiene una temperatura de desnaturalización
menor que los que viven en aguas más cálidas. Además, la cantidad de colágeno aislado
también varía con la edad y temporada en la cual se adquirió el pez.
Pescado Rendimiento
Región
Colágeno soluble Colágeno soluble en
Nombre Parte del pescado
en ácido (ASC) pepsina (PSC)
Asia Sardina Escama – –
Piel 51.4 –
Lateolabrax
Asia japonicus Huesos 40.7 –
(Lubina japonesa)
Aletas 5.2 –
Scomber japonicus
Asia Piel 49.8 –
(Estornino)
Heterodontus
Asia (Tiburón toro o Piel 50.1 –
bullhead shark)
Katsuwonus pelamis
Asia Hueso 42.3 –
(Listado)
Pagrus major
Asia Escama –
(Pargo japonés)
Oreochromis 2
Asia niloticus Escama –
(Tilapia del Nilo)
Asia Sardina Escama – 50.9
Lateolabrax
Asia japonicus Escama – 41
(Lubina japonesa)
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Asia Pagellus bogaraveo Escama – 37.5
Lutjanus vitta
Asia Piel 9 4.7
(Pargo)
Siganus fuscescens
Asia Piel 3.6 –
(Pez conejo)
Kyphosus bigibbus
Asia Piel 3.6 –
(Carpa marrón)
Asia Myliobatis tobijei Piel
3.5
Asia Dasyatis akajei Piel –
3.7
Asia Dasyatis laevigata Piel
Piel 41.3 –
Cyprinus carpio
Europa Escama 1.35 –
(Carpa)
Hueso 1.06 –
Parupeneus
Asia Escama 0.46 1.2
heptacanthus
Pangasianodon
Asia hypophthalmus Piel 5.1 7.7
(Pez gato)
Asia Istiophorus platypter Piel 5.7 2.1
Lates calcifer
Asia Escama 0.38 1.06
(Barramundi)
Piel – –
Ctenopharyngodon
Asia idella Escama – –
(Carpa herbívora)
Aleta – –
Oreochromis Escama 3.2 –
Asia niloticus
(Tilapia del Nilo) Piel 27.2 –
Escama 6.5 –
América Oreochromis ssp
Piel 15.5 –
del Sur (Tilapia roja)
Hueso 5.6 –
Asia Dover sole Piel 19.2 –
Para poder obtener rendimientos con una variabilidad mínima es necesario establecer una
metodología que sea aplicada para la mayor parte de los peces o incluso hacerlas para aquellos
que cumplan la mayor cantidad de características de una población, lo que ayudaría a conocer
con mayor exactitud el rendimiento promedio de la extracción de colágeno a partir de los
residuos de pescado y de esta manera poder equipararlo e incluso competir con el colágeno
obtenido de animales bovinos y porcinos y con ello poder incrementar su aplicación en el área
médica y evitando la potencial transmisión de enfermedades que conlleva el uso de colágeno
bovino y porcino.
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De las referencias del compósito HAp/colágeno a partir de desechos de pescado, se nota que
existe información limitada sobre este tema, lo cual indica que es un área con gran potencial de
investigación para la obtención de materiales que son recuperados de residuos.
No solo es eso, sino que la hidroxiapatita derivada de espina de pescado, genera un tamaño de
los poros adecuado para el biomaterial, lo cual produce una interconectividad celular ideal, lo
cual apoya la actividad biológica como el crecimiento y vascularización del tejido óseo. Las
pruebas de bioactividad destacaron la proliferación de osteoblastos mostrando que los
andamios producidos pueden moldearse rápidamente a las etapas de cicatrización ósea.
Esta investigación y otras similares, no solo ayudan a dar una mejor calidad de vida a las
personas que se pueden beneficiar de estos biomateriales sino que también la producción de
este biomaterial aborda el problema de los residuos de la acuicultura, ya que, cada año se
desechan más de 20 millones de toneladas de subproductos de la pesca, como aletas, escamas y
pieles. Esto es muy beneficioso para el medio ambiente y en la reutilización de residuos.
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Conclusiones
- Existe una amplia fuente de colágeno e hidroxiapatita en el mundo animal, siendo la fauna
marina que presenta estas sustancias sin tener complicaciones en su consumo, por lo que su
porcentaje de rendimiento y biocompatibilidad hacen de este una fuente de alta calidad.
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Bibliografía
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