los últimos años se está observando una tendencia a
ES
SIMPLE / STICK STREP A
USO PROFESIONAL
Ó
PRUEBA DIAGNÓSTICA EN EL LUGAR DE ASISTENCIA AL
PACIENTE
ESTAS INSTRUCCIONES DEBEN DE SER LEÍDAS CON
ATENCIÓN ANTES DE PROCEDER A UTILIZAR EL TEST.
INTRODUCCIÓN
·Intención de uso
Test inmunocromatográfico cualitativo para la detección
en un solo paso de antígenos de Streptococcus pyogenes
(Estreptococo del grupo A) en frotis orofaríngeos u otros
tipos de frotis como óticos, de ulceras, etc. También puede
utilizarse para la identificación de la bacteria cultivada.
·Información general
El estreptococo del grupo A (S.pyogenes) es una de las
causas mayoritarias de infecciones respiratorias en el
tracto respiratorio superior humano, siendo el patógeno
más significativo que causa la faringitis.
El test Simple/Stick Strep A es un test rápido
inmunocromatográfico que emplea anticuerpos específicos
frente a un antígeno (carbohidrato C presente en la pared
celular de la bacteria) específico del estreptococo del
grupo A (S.pyogenes).
El test permite identificar faringoamigdalitis causadas por
S. pyogenes en muestras de hisopos orofaríngeos en sólo
10 minutos, permitiendo prescribir de forma inmediata el
tratamiento necesario (antibiótico), y evitando así posibles
complicaciones derivadas de la ausencia de tratamiento.
Asímismo, puede ser utilizado para la identificación de
colonias de S.pyogenes en placas de cultivo o para la
identificación del Estreptococo del Grupo A en otros tipos
de muestras tales como frotis óticos, endocervicales,
abcesos, etc. A diferencia del cultivo, puede detectar
microorganismos tanto viables como no viables (que no
crecerían en placa de cultivo).
·Población a la que está destinada la prueba
El test está dirigido a toda la población en general, pues
cualquier individuo es susceptible de ser contagiado por
S.pyogenes, si bien la incidencia es mucho mayor en la
población pediátrica.
·Incidencia en la población de la enfermedad o
infección a la que responde la prueba
En países desarrollados, la incidencia de faringitis causada
por el Estreptococo del Grupo A se estima en un 37% en
menores de 18 años y en un 24% en menores de 5 años
(incluyendo los portadores asintomáticos, que suponen de
un 12% a un 20%, especialmente en invierno)(1), si bien en
su aumento en la población pediátrica menor de 5
años llegando hasta un 68,3% de los casos (2). En
adultos, se estima que sólo un 10% de las faringitis son
causadas por este microorganismo, siendo la mayoría
de naturaleza vírica, por lo que este test no se suele
realizar en las consultas de atención primaria no
pediátrica(3).
▪ Características de la bacteria y su infección
Streptococcus pyogenes, también conocido como
estreptococo beta-hemolítico del grupo A (GAS, por
sus siglas en inglés), causa un amplio espectro de
enfermedades que van desde cuadros leves, como
faringitis y amigdalitis (siendo el patógeno más
significativo detrás de este tipo de infecciones),
impétigo y escarlatina, hasta infecciones de la piel y de
las heridas, endocarditis e infecciones invasivas graves,
como meningitis y sepsis.
En el caso de las faringitis y faringoamigdalitis, los
síntomas se pueden convertir en severos si el paciente
no recibe tratamiento, pudiendo derivar en
complicaciones tales como la fiebre reumática, el
síndrome de choque tóxico o la glomerulonefritis. La
mayoría de las cepas son sensibles a penicilina pero,
recientemente, han aparecido cepas resistentes a
macrólidos. Por lo tanto, una rápida identificación de
este patógeno que permita un inicio temprano del
tratamiento antibiótico es de vital importancia para
prevenir el desarrollo de estas complicaciones.
Los métodos convencionales de análisis e identificación
del Streptococo del Grupo A requieren 24-48 horas de
incubación de cultivos de muestras procedentes de
frotis faríngeos y la posterior confirmación de las
colonias beta-hemolíticas como pertenecientes a
Estreptococos del Grupo A (3).
Un diagnóstico rápido permite comenzar un
tratamiento temprano que evita posibles
complicaciones. Asímismo, el descartar la presencia de
S.pyogenes evita la prescripción innecesaria de
tratamientos antibióticos que puedan incrementar el
riesgo de desarrollo de resistencia en el paciente.
FUNDAMENTO O PRINCIPIOS BÁSICOS DEL
TEST
El test Simple/Stick Strep A utiliza anticuerpos
monoclonales y policlonales específicos frente al
carbohidrato C de la pared celular de la bacteria
S.pyogenes.
El test Strep A utiliza una combinación de:
1) Partículas de látex azules conjugadas a un antígeno
reconocido por un anticuerpo específico para dicho
antígeno unido a la membrana conformando la
llamada banda de control del test (posición C de la
carcasa).
2) Partículas de látex rojo conjugadas a anticuerpos
específicos frente a S.pyogenes que cooperan con
1
otros anticuerpos específicos para S.pyogenes situados en
la membrana bajo la banda de control (posición T de la
carcasa).
La muestra se trata, en primer lugar, con una mezcla de
los dos tampones de dilución de la muestra (1 y 2)
suministrados con el kit, para conseguir la extracción del
carbohidrato C (antígeno a detectar presente en la pared
celular de S.pyogenes) a partir de la matriz.
Dicha mezcla se realiza combinando ambos tampones en
partes iguales, verificándose su correcta preparación
gracias al cambio de coloración de la mezcla obtenida
(de rosa a amarillo). Para la extracción de la muestra, el
hisopo se introduce en dicha mezcla y se incuba durante
al menos 1 minuto. Transcurrido ese tiempo, sólo se
necesita añadir un volumen determinado en la tira reactiva
y esperar 10 minutos.
Cuando la muestra extraída fluye a través de la membrana
del test, las partículas coloreadas migran. En el caso de
una muestra positiva, los anticuerpos específicos presentes
en la membrana capturarán las partículas coloreadas
recubiertas por el antígeno.
Diferentes líneas de color serán visibles, dependiendo de
la presencia o ausencia de S.pyogenes (estreptococo del
grupo A) en la muestra. Estas líneas se usan para
interpretar el resultado a los 10 minutos de incubación a
temperatura ambiente (ver Fig.1).
FORMATOS DEL TEST
El test Strep A está disponible en dos formatos diferentes:
• Formato Stick: se trata de la tira reactiva envasada en
un sobre de aluminio. Se necesita un tubo (incluido en
el kit) para preparar la mezcla de tampones de
dilución, realizar la extracción (introduciendo
hisopo) y desarrollar el test.
•Formato Simple: se trata de la tira reactiva en el
interior de una carcasa de plástico. Las muestras
(extraídas en un vial, suministrado en el kit, que
dispone de gotero) se añaden directamente a la
ventana de muestra de la carcasa señalizada con una
flecha.
Ambos formatos tienen las mismas prestaciones, la única
diferencia está relacionada con la forma de ejecutar el test
(ver más abajo los apartados de “Procedimiento”
correspondientes).
Estas instrucciones de uso aplican a cualquier referencia
comercial del producto: 9.134.XXX.YY.ZZZ.
MATERIALES INCLUIDOS EN EL KIT
FORMATO STICK
• Hisopos estériles CLASSIQSwabsTM Copan ref. 167KS01
123
• Dispositivos de reacción (formato Stick).
• Tampón de dilución de la muestra-1 (tapón rojo).
• Tampón de dilución de la muestra-2 (tapón amarillo).
• Microtubos de plástico con cierre de 2 ml.
• 1 hisopo de Control positivo seco.
• Soporte interior con esquema del protocolo de
trabajo.
• Instrucciones de Uso.
FORMATO SIMPLE
• Hisopos estériles CLASSIQSwabsTM Copan ref.
167KS01 123
• Dispositivos de reacción (formato Simple).
• Tampón de dilución de la muestra-1 (tapón rojo).
•Tampón de dilución de la muestra-2 (tapón
amarillo).
• Viales vacíos con tapón gotero.
• 1 hisopo de Control positivo seco.
• Soporte interior con esquema del protocolo de
trabajo.
• Instrucciones de Uso.
• Datamatrix.
CONTROL POSITIVO
El control positivo seco Strep A se obtiene
inactivando la bacteria procedente de cultivo
axénico mediante calor. Se emplea como diluyente
una solución tamponada estabilizada y
posteriormente se seca en un hisopo para su
reconstitución con el tampón de dilución de la
muestra por parte del usuario.
El control positivo seco ha sido preparado para ser
el utilizado con el Simple/Stick Strep A fabricados por
OPERON S.A. El uso con cualquier otro dispositivo
distinto de los indicados y el resultado que se
obtenga es RESPONSABILIDAD EXCLUSIVA DEL
USUARIO. OPERON S.A. no se hace responsable
del mismo.
El control positivo ha sido evaluado frente a los
agentes infecciosos de mayor riesgo (hepatitis, VIH),
dando resultado negativo.
La información sobre la composición de los reactivos
se indica en la ficha de seguridad del producto. Puede
solicitar una copia de la misma a través de la dirección
de correo electrónico msds@operon.es
MATERIALES NO INCLUIDOS EN EL KIT
• Vórtex
• Cronómetro
EQUIPOS PARA LA INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
El test puede interpretarse visualmente o mediante el
uso del lector de tests de inmunocromatografía de
OPERON.
2
almacenada supone un mal uso del control.
ALMACENAMIENTO
Se puede conservar a cualquier temperatura comprendida
entre +2 y +30 ºC.
Su fecha de caducidad está impresa en los envoltorios de
aluminio y etiquetas.
El producto mantiene la estabilidad reclamada una vez
abierto.
Si el producto se almacenara en frío, se deben utilizar las
tiras reactivas una vez atemperadas y abierto su envoltorio
protector.
MUESTRAS
El test Strep A está diseñado para analizar muestras
respiratorias humanas del tipo hisopo orofaríngeo
inmediatamente tras su recogida.
El test Strep A también puede ser utilizado para analizar
muestras de frotis óticos, endocervicales, úlceras y heridas,
en las que haya sospecha de presencia de estreptococo
del grupo A, así como para la confirmación de colonias
crecidas en placa de cultivo.
Procesar las muestras lo antes posible después de su
recogida. Si ello no es posible, las muestras de frotis
orofaríngeo se pueden conservar en un envoltorio o tubo
cerrado con sílica gel a temperatura ambiente ó
refrigeración (2-8ºC) durante un máximo de 72 horas, o
bien en congelación a -20ºC ó -70ºC durante al menos
30 días, con el fin de asegurar la estabilidad incluso de
muestras positivas débiles.
El test Strep A es compatible, al menos, con los siguientes
medios de transporte: medio Amies (líquido) / medio Stuart
(gel), por lo que pueden ser recogidas y almacenadas en
ellos según las indicaciones del fabricante. Las muestras
de estreptococo del grupo A resuspendidas en medio de
transporte Amies líquido deberían conservarse a -70ºC
(donde son estables tras al menos 7 días) o, en su defecto,
a -20ºC (donde se puede asegurar su estabilidad durante
3 días). En caso de no ser posible la congelación, la
muestra puede almacenarse en refrigeración o temperatura
ambiente durante un máximo de 24 horas.
OPERON recomienda el uso de los hisopos de rayon
estériles suministrados o de los hisopos FLOQSwabs
(Copan) para garantizar las óptimas prestaciones del test.
No se ha comprobado la eficacia de los hisopos de otras
marcas con el test Strep A.
TOMA DE MUESTRAS FARÍNGEAS
Recolecte las muestras de garganta mediante los métodos
clínicos estándar utilizando el hisopo suministrado con el
kit. Para recolectar la muestra baje la lengua con un
depresor y pase el hisopo sobre las amígdalas o cualquier
área de inflamación con pus o enrojecida en la parte
trasera de la garganta. Tenga cuidado de no tocar el
hisopo con la lengua o las zonas internas de las mejillas y
evite que se impregne de saliva.
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Nota General: a lo largo del desarrollo del test, deben
usarse guantes desechables debido al manejo de
muestras infecciosas. Una vez finalizado el trabajo,
proceder con la higiene de acuerdo al punto 4 del
apartado “Precauciones”.
CONTROL POSITIVO: el control positivo, una vez
sacado de la bolsa de aluminio y atemperado, se
procesa de igual manera que una muestra real
(hisopo), tal y como se describe a continuación.
1. Añadir 3 gotas del tampón de dilución de la
muestra-1 (tapón rojo) en el vial suministrado con el kit
(puede utilizar el soporte interior para su colocación). El
tampón tendrá una coloración rosácea.
2. Añadir 3 gotas del tampón de dilución de la
muestra-2 (tapón amarillo) al mismo vial. El color
cambiará inmediatamente de rosa a amarillo pálido.
3. Introducir el hisopo dentro del vial que contiene la
mezcla de los dos tampones y rotar durante 1 minuto
para asegurar una correcta liberación y extracción de la
muestra.
En el caso de muestras diluidas en medio de transporte
Amies (líquidas), añadir 50 µl de muestra con una
micropipeta al vial con la mezcla de tampones y
mezclar bien. Incubar 1 minuto.
4. Presionar el hisopo contra los laterales del vial
girándolo mientras se saca del mismo. De este modo,
se desprende la mayor parte de la muestra del hisopo.
En el caso de muestras diluidas en medio Amies pasar
directamente al siguiente punto.
PROCEDIMIENTO SIMPLE
Una vez que las muestras se han preparado como se
describe anteriormente, proceda de la siguiente
manera:
1. Cerrar el vial en el que se ha realizado la extracción
de la muestra con el tapón con gotero incorporado.
2. Invertir el vial y añadir 4 gotas de la muestra
extraída a la ventana circular del dispositivo de
reacción, marcada con una flecha.
3. Incubar el test a temperatura ambiente durante 10
minutos, leer e interpretar el resultado.
PROCEDIMIENTO STICK
1. Introducir la tira reactiva en el vial donde se ha
realizado la extracción de la muestra con las flechas
indicando hacia el fondo del tubo.
IMPORTANTE: el líquido no debe nunca alcanzar la
zona donde están las flechas.
2. Incubar el test a temperatura ambiente durante 10
minutos, leer e interpretar el resultado en la zona
central de la tira.
LECTURA DE RESULTADOS
Las tiras que se muestran en la Fig. 1 son un ejemplo
4
ADVERTENCIA: el kit incluye además un CONTROL SENSIBILIDAD ANALÍTICA
POSITIVO listo para usar. Se recomienda su uso para La sensibilidad analítica del test, obtenida mediante el
asegurar que los resultados obtenidos son correctos. análisis de diluciones seriadas ½ de una preparación
de S.pyogenes inactivada por calor, es de 3,2 x 105
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO CFU/ml, si bien con frecuencia se llegan a detectar
hasta 8 x 104 CFU/ml .
1. El test Simple/Stick Strep A sirve para la identificación
del estreptococo del grupo A (S.pyogenes) detectando su
ESPECIFICIDAD ANALÍTICA
presencia en muestras respiratorias humanas de tipo frotis
orofaríngeo, en cultivos, etc, siempre y cuando la carga Los anticuerpos policlonales y monoclonales utilizados
bacteriana sea igual o superior al límite de detección del en el test presentan una especificidad única para el
ensayo. Streptococo del Grupo A. Ver el apartado de
reactividad cruzada.
2. Este test es cualitativo, no cuantitativo, aunque la
intensidad de la banda positiva está relacionada con la
cantidad de analito detectable en la muestra. SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD
3. Mas de 100 muestras de frotis de muestras humanas DIAGNÓSTICA
de diferente procedencia (frotis orofaríngeos, óticos, A.- Evaluación interna del test Strep A
endocervicales, heridas) fueron evaluadas para asegurar Se ha realizado una comparativa test rápido
el correcto funcionamiento del test. La correlación de Simple/Stick Strep A de OPERON, S.A. frente a:
resultados con otras técnicas (cultivo y test rápido Alere a) Cultivo: técnica de referencia y
Test Pack Plus +OBC) fue muy elevada. Sin embargo, este
estudio no excluye posibles interferencias en el b) Alere Test Pack Plus + OBC: test rápido comercial
funcionamiento del test al analizar otras muestras. (Alere) para la detección de Streptococo del Grupo A .
4. Es importante controlar el tiempo de reacción. Si el El estudio incluye un total de 127 muestras
tiempo de reacción es menor al indicado, las muestras caracterizadas por cultivo en el laboratorio de origen,
que tienen una cantidad de analito superior al límite de de las cuales 44 resultaron negativas y 83 positivas
sensibilidad se pueden observar claramente pero las que para S. pyogenes. Todas ellas se conservaron diluidas
están en el límite no aparecerán. Si el tiempo de reacción en medio Amies y congeladas.
es mayor al indicado, la sensibilidad del test se verá Los resultados obtenidos fueron los siguientes:
alterada pudiendo dar lugar a resultados erróneos.
5. Los resultados del test deben ser interpretados junto con a) Frente a cultivo:
la información disponible de los estudios epidemiológicos,
valoración clínica del paciente y otros procedimientos de Cultivo
diagnóstico.
Positivo Negativo Total
6. Es muy importante añadir la cantidad adecuada de
muestra extraída pues con un volumen inferior podrían Simple Positivo 74 0 74
aparecer resultados positivos muy débiles, mientras que un Strep A
volumen mayor podría impedir el correcto desarrollo de la Negativo 9 44 53
OPERON
cromatografía.
7. Cuando se analicen muestras diluidas en medio de Total 83 44 127
transporte compatible, evite las zonas viscosas y con
mucosidad al tomar el volumen a analizar.
- Concordancia de sensibilidad: 89,2 %
8. Una incorrecta toma de muestra (muy importante), así
como un transporte y/o manipulación inadecuados de la Con unos límites para una confianza del 95% entre
misma, pueden dar lugar a un resultado falso negativo. 80,7% y 94,2%.
Por tanto, un resultado negativo del test no excluye la - Concordancia de especificidad: >99,9%.
posibilidad de una infección por estreptococo del grupo A. Con unos límites para una confianza del 95% entre
Los resultados obtenidos con el test Strep A de OPERON 92,2% y 99,8%.
deben utilizarse junto con otros datos clínicos disponibles. -Valor predictivo positivo (VPP)>99,9%.
9.El Control positivo está diseñado para la comprobación -Valor predicitivo negativo (VPN): 83%
de la correcta realización del test, no representa una
-Eficiencia estimada: 92.9%
referencia para la sensibilidad del test.
Basado en una evaluación de muestras con una
10. El Control positivo, una vez resuspendido, ha de ser
prevalencia de enfermedad del 65,4 %.
utilizado inmediatamente.

6
b) Frente al test rápido de Alere: Con unos límites para una confianza del 95% entre 66.6%
y 87.9%.
ALERE “Strep A Test Pack + Plus - Concordancia de especificidad: >99,9%
with OBC Con unos límites para una confianza del 95% entre
94.1% y 99.9%.
Positivo Negativo Total -Valor predictivo positivo (VPP)>99,9%.
Simple Positivo 83 0 83 -Valor predicitivo negativo (VPN): 84.5%
Strep A -Eficiencia estimada: 90.3%
OPERON Negativo 0 44 44
Basado en una evaluación de muestras con una
Total 83 44 127 prevalencia de enfermedad del 46.9%.

b) Excluyendo las muestras positivas con crecimiento

- Concordancia de sensibilidad: >99,9%. moderado en placa (mayor probabilidad de no ser
Con unos límites para una confianza del 95% entre 95,7% detectadas por reducción de la cantidad de muestra en el
y 99,9%. hisopo):
- Concordancia de especificidad: >99,9%
Con unos límites para una confianza del 95% entre 92,2% Cultivo (placa de agar sangre)
y 99,8%.
Positivo
-Valor predictivo positivo (VPP)>99,9%. Negativo Total
abundante
-Valor predicitivo negativo (VPN)>99,9%.
-Eficiencia estimada: >99,9%. IC Positivo 36 0 36
Basado en una evaluación de muestras con una Simple
Strep A Negativo 4 60 64
prevalencia de enfermedad de: 100% (75 /127) =59.1 %
Total 40 60 100
B.-Evaluación externa del test Strep A
- Concordancia de sensibilidad: 90%
Se ha realizado una comparativa entre el Simple/Stick
Strep A de OPERON, S.A. y el cultivo (técnica de Con unos límites para una confianza del 95% entre
referencia) utilizando 113 muestras de hisopos en medio 77% y 95.9%.
Amies gel. - Concordancia de especificidad:
En el estudio, los hisopos con las muestras se utilizaron 100%[60 / 60+0)] =>99,9%
primero para sembrar las placa de agar sangre Con unos límites para una confianza del 95% entre
(Biomerieux), las cuales se incubaron durante 24h-48 h 94.1% y 99.9%.
para posteriormente identificar la bacteria mediante el uso -Valor predictivo positivo (VPP)>99,9%.
de discos de bacitracina (Biomerieux) o espectrometría de
-Valor predicitivo negativo (VPN): 93.8%
masas (Maldi-tof Vitek MS Biomerieux). Después, la
muestra sobrante en el hisopo se utilizó para el análisis -Eficiencia estimada: 96%
con el test Simple/Stick Strep A, realizándose la extracción Basado en una evaluación de muestras con una
y el análisis según se indica en estas instrucciones de uso. prevalencia de enfermedad del 40 %.
Esta secuencia de trabajo conlleva una muy probable
infravaloración del test rápido al utilizar un hisopo que REPETIBILIDAD
contiene menos muestra que en origen, por lo que se han
5 réplicas de una serie de diluciones ½ de un estándar
calculado los resultados desde dos perspectivas:
interno (curva de sensibilidad), así como de muestras
a) Teniendo en cuenta todas las muestras positivas: reales establecidas como NC (”muestra negativa”),
LPC (“muestra positiva débil”) y PC (“muestra
Cultivo (placa de agar sangre) positiva”), fueron analizadas el mismo día por la
misma persona. Se obtuvo una alta repetitividad con
Positivo Negativo Total diferencias entre las réplicas del estándar y muestras
reales iguales o inferiores a media dilución ½. En la
IC Positivo 42 0 42 interpretación con el lector, los valores de RSD
Simple obtenidos en las bandas del positivo con valores por
Strep A Negativo 11 60 71
encima del corte fueron ≤ 30%,
Total 53 60 113 NOTA: en la técnica de inmunocromatografía se
considera que diferencias de 1 dilución ½ son
asumibles y tolerable por la técnica.
- Concordancia de sensibilidad: 79.3%

7
REPRODUCIBILIDAD (positivas y negativas) a las concentraciones indicadas
PRECISIÓN INTER-DÍA en la siguiente tabla:
Con un mismo lote del test Strep A se midieron, por Sustancia Concentración
quintuplicado, varios puntos de una curva de sensibilidad
a lo largo de cinco días espaciados en el tiempo, así Budesónida (1 mg/ml) 10% v/v
como un grupo de muestras reales establecidas como NC
Listerine
(”muestra negativa”), LPC (“muestra positiva débil”) y PC 20% v/v
(ácido benzoico 0.150 %))
(“muestra positiva”), en este caso por duplicado. Los
resultados fueron muy reproducibles. Las variaciones Lizipaina
fueron menores a media dilución ½ de sensibilidad. (clorehixidina 5 mg/ benzocaína 2.5 mg 20 mg/ml
En la interpretación con el lector, los valores de RSD por comprimido)
obtenidos en las bandas del positivo con valores por
Angileptol
encima del corte fueron ≤ 35%.
(Clorhexidina dihidrocloruro 5 mg/
20 mg/ml
Benzocaína 4 mg/ Enoxolona 3 mg por
PRECISION INTER-OPERADOR comprimido)
Tres personas midieron, por triplicado, una curva de Ibuprofeno 10 mg/ml
sensibilidad y un grupo de muestras reales establecidas
como NC (”muestra negativa”), LPC (“muestra positiva Paracetamol 20 mg/ml
débil”) y PC (“muestra positiva”), siguiendo el
procedimiento descrito. No se observaron diferencias en el Ac. acetilsalicilico 20 mg/ml
resultado final asignado (en ningún caso fueron superiores Propol2 (Propóleo 0.6%) 20% v/v
a una dilución ½ de sensibilidad).
En la interpretación con el lector, los valores de RSD Golamir (Actifilm DOL compuesto por
taninos, resinas, polisacáridos y 20 mg/ml
obtenidos en las bandas del positivo por encima del límite
flavonoides )
del test fueron < 35%.
Salvigol (Azúcar de caña; Inulina Miel
liofilizada*; Salvia (Salvidol 2-LMF)*; Aloe 20 mg/ml
PRECISION INTER-LOTE vera *; Mirra
Con tres lotes distintos del test Strep A se midieron, por
triplicado, una curva de sensibilidad y un grupo de Disneumon pernasal (Hidrocloruro de
10% v/v
Fenilefrina 0.5%
muestras reales establecidas como NC (”muestra
negativa”), LPC (“muestra positiva débil”) y PC (“muestra Inistol (0,25 mg/ml de triprolidina
positiva”). El análisis lo realizó una única persona y en el hidrocloruro, 6 mg/ml de pseudoefedrina
20% v/v
mismo día. Sólo se apreciaron diferencias inferiores a una hidrocloruro y 2 mg/ml de dextrometorfano
dilución ½ en la curva de sensibilidad, asumibles y hidrobromuro )
tolerables por el ensayo realizado, y no se encontraron
Saliva 20% v/v
diferencias en el resultado de las muestras reales.
En la interpretación con el lector, los valores de RSD Sangre 20% v/v
obtenidos en las bandas del positivo con valores por
encima del corte fueron ≤ 40%.
REACTIVIDAD CRUZADA
Se ha llevado a cabo una evaluación para determinar
EFECTO HOOK O PROZONA
la posible reacción cruzada con otras bacterias que
Se ha demostrado que el test Strep A no presenta Efecto pueden causar infecciones respiratorias. Todos los
Hook tras analizar hasta una concentración máxima de, microorganismos mostrados en la tabla dieron un
aproximadamente, 2,56x108 CFU/ml de un cultivo de resultado negativo con el test Simple/Stick Strep A
S.pyogenes, lo que supone 800 veces el Límite del Test. cuando se añadieron al test a una concentración
La concentración máxima de S. pyogenes encontrada entre aproximada de 2x107 CFU/ml:
todas las muestras analizadas en Operon (muchas con
Arcanobacterium Staphylococcus aureus
carga bacteriana elevada) ha sido de 6.4x107 CFU/ml, haemolyticum
unas 200 veces el Límite del Test, lo cual está dentro de la
zona donde no se ha observado efecto Hook. Bordetela Parapertussis Streptococcus mitis

Bordetella Pertussis Streptococcus mutans

SUSTANCIAS INTERFERENTES
Las siguientes sustancias no mostraron ningún efecto en los Bordetella Holmessi Streptococcus oralis
resultados del test cuando fueron añadidas a muestras Fussobacterium necrophorum Streptococcus pneumoniae

8
Haemophilus Influenzae Streptococcus pyogenes grupo B

Klebsiella Pneumoniae Streptococcus pyogenes tipo C

Legionella pneumophila Streptococcus pyogenes tipo D

Moraxella Catarrhalis Streptococcus pyogenes tipo F

Neisseria Meningitidis Streptococcus pyogenes tipo G

Neisseria subflava Streptococcus salivarius

Pseudomona aeruginosa Streptococcus sanguinis

Serratia Marcescens Streptococcus mitis

9

EN
SIMPLE / STICK STREP A
FOR PROFESSIONAL USE
OR
A DIAGNOSTIC TEST FOR USE AT THE PATIENT CARE
LOCATION
PLEASE READ THESE INSTRUCTIONS CAREFULLY BEFORE
USING THE TEST.
INTRODUCTION
·Intended use
A single-step qualitative immunochromatographic test to
detect Streptococcus pyogenes (group A Streptococcus)
antigens in oropharyngeal swabs and other types of swabs,
such as from the ears, ulcers, etc. Can also be used to
identify cultured bacteria.
·General information
Group A Streptococcus (S.pyogenes) is one of the main
causes of respiratory infections in the human upper
respiratory tract, and the most significant pharyngitis-
causing pathogen.
Simple/Stick Strep A is a rapid immunochromatographic
test that uses specific antibodies that target an antigen (C-
carbohydrate present in the bacteria’s cell wall) specific to
group A Streptococcus (S.pyogenes).
The test can identify tonsillopharyngitis caused by S.
pyogenes in oropharyngeal swab samples in just 10
minutes, enabling the immediate prescription of the
required treatment (antibiotic), as such avoiding potential
complications from a lack of treatment.
Furthermore, it can be used to identify S.pyogenes colonies
on culture plates or to identify Group A Streptococcus in
other types of samples such as ear swabs, endocervical
swabs, abscess swabs, etc. In contrast to a culture, it can
detect both viable and non-viable microorganisms (which
would not grow on a culture plate).
·Intended test population
The test is intended for use on the general population, as
any individual is susceptible to infection by S.pyogenes,
although incidence is much higher among children.
·Disease or infection incidence among the intended
test population
In developed countries, the incidence of pharyngitis caused
by group A Streptococcus is estimated to be 37% for
children aged under 18 years old and 24% for children
aged under 5 years old (including asymptomatic carriers,
accounting for 12 to 20%, particularly in winter)(1).
However, recent years have seen a rise among children
aged under 5 years old, accounting for up to 68.3% of
cases (2). Among adults, only 10% of pharyngitis cases are
estimated to be caused by this microorganism, most of
which are viral in nature, so this test doesn’t tend to be
used in adult primary care surgeries(3).
Characteristics of the bacteria and its infection
Streptococcus pyogenes, also known as group A beta-
haemolytic streptococcus (GAS), causes a wide variety
of diseases that range from mild conditions, such as
pharyngitis and tonsillitis (the most relevant pathogen to
cause these types of infections), impetigo, and scarlet
fever, to skin infections and their wounds, endocarditis,
and serious invasive infections, such as meningitis and
sepsis.
Pharyngitis and tonsillopharyngitis symptoms can
become severe should the patient not receive
treatment, potentially leading to complications such as
rheumatic fever, toxic shock syndrome, or
glomerulonephritis. Most strains are sensitive to
penicillin, but macrolide-resistant strains have recently
appeared. Therefore, rapidly identifying this pathogen
enables the early initiation of vitally important antibiotic
treatment to prevent these complications from
developing.
Traditional methods of analysis and identification of
group A Streptococcus require 24-48 hours incubating
cultures of pharyngeal swab samples and subsequent
confirmation of the beta-haemolytic colonies as
belonging to group A Streptococci (3).
A rapid diagnosis enables early initiation of treatment
to prevent potential complications. Furthermore, ruling
out the presence of S.pyogenes avoids the unnecessary
prescription of antibiotic treatments that can increase
the risk of developing resistance in the patient.
THE BASIS OR BASIC PRINCIPLES OF THE TEST
The Simple/Stick Strep A test uses specific monoclonal
and polyclonal antibodies that target the C-
carbohydrate in the cell wall of S.pyogenes bacteria.
The Strep A test uses a combination of:
1) Blue latex particles conjugated to an antigen
recognised by a specific antibody for said antigen
bound to the membrane, comprising the so-called test
control line (position C on the housing).
2) Red latex particles conjugated to specific antibodies
that target S.pyogenes acting in conjunction with other
S.pyogenes-specific antibodies located below the
control line (position T on the housing).
The sample is first treated with a mix of both sample
dilution buffers (1 and 2) supplied with the kit to extract
the C-carbohydrate (the antigen for detection present in
the S.pyogenes cell wall) from the matrix.
The aforementioned mixture is created by combining
equal parts of both buffers, with correct preparation
confirmed by a change in colour of the mix (from pink
to yellow). To extract the sample, the swab is placed in
the mix and left to incubate for at least 1 minute. Once
10
P301+P312: if swallowed call a poison centre/doctor if you feel unwell
P330: rinse mouth
P501: dispose of contents/container in accordance with
local/regional/national/international regulations.
3. Do not store or prepare food, eat, drink, or smoke in
the area where the reagents and samples are handled.
4. On completing the task, clean all work surfaces with
soap and water, and disinfect them with a suitable
solution. Lastly, dispose of the protective gloves correctly
and wash your hands with soap and water, rubbing them
well.
5. Do not exchange components from kits with different
batch numbers.
6. If the test is stored refrigerated, allow all the kit’s
components and the samples to first reach room
temperature, as cold reagents and/or samples can limit
the test’s functionality. Allowing 20 to 30 minutes to reach
room temperature is recommended.
7. Only use the reagents in vitro.
8. The immunochromatographic strips are single use. A
strip is used per sample to be evaluated.
9. Do not use any of the kit’s components after the use-by-
dates.
10. If the outer box is damaged, the product can still be
used providing none of the components have been
damaged.
11. Throw the test away if the primary packaging is either
broken or impaired.
12. Remove the strip or device from the aluminium bag
when the test is going to be performed to avoid
unnecessary excessive exposure of the product to any
potentially damaging environmental factors.
13. Adding the correct volume of extracted sample to the
reaction device is very important for the Simple format. If
lower than indicated, the chromatogram may not develop
because insufficient sample reached the reaction zone; if
higher than indicated, the chromatogram may not develop
well because the sample does not flow along the
membrane correctly on being more viscous than
recommended.
14. Please dispose of the used product in accordance with
current legislation.
15. Do not use the test if there are any coloured lines in
the results zone prior to use.
16. For samples diluted in a liquid transport medium (for
example, Amies), sampling the correct amount is very
important. Too much or too little sample in relation to the
amount of buffer can lead to incorrect results (false
positives, a poorly developed chromatogram, false
negatives).
17. Adding the correct amount of each of the supplied
dilution buffers is important so that the sample can be
extracted and detected correctly.
18. Do not use samples containing a large amount of
saliva, as invalid results may be obtained due to the higher
viscosity of the sample interfering with the
chromatogram.
19. Swab samples can be transported in a compatible
transport medium (Stuart /Amies).
20. Should you wish to grow a sample culture on a
blood agar plate, please do so prior to performing the
rapid test, as the dilution buffers would destroy the
bacteria, rendering it unable to grow on the plate.
21. Use the swabs supplied in the kit or Floqswabs
swabs (Copan) with a plastic handle. Do not use
calcium alginate swabs or swabs with a wooden
handle.
22. Do not discard the kit's outer box until all the
content has been used. The box contains essential
information about the product’s CE marking and the
batch number.
23. Any serious incident involving the product must be
reported to the manufacturer and the relevant authority
in the member state where the user and/or patient are
located.
24. The positive control must be used as soon as it is in
a suspension. Do not store the resulting solution. Using
a stored suspension means misusing the control.
STORAGE
It can be stored at temperatures ranging from +2 to
+30 ºC.
The use-by date is printed on the aluminium wrapping
and labels.
The product maintains the claimed stability once open.
If the product is stored cold, the reagent strips must be
used once they reach room temperature and their
protective packaging is open.
SAMPLES
The Strep A test is designed to analyse human
respiratory samples from oropharygeal swabs
immediately after collection.
The Strep A test can also be used to analyse samples
from ear, endocervical, ulcer, and wound swabs when
group A Streptococcus is suspected to be present, and
for confirming colonies grown on a culture plate.
Process the samples as soon as possible after collection.
If not possible, oropharygeal swab samples can be
stored in sealed packaging or a sealed tube with silica
gel at room temperature or refrigerated (2-8ºC) for no
more than 72 hours, or alternatively, frozen at -20ºC or
-70ºC for at least 30 days, in order to guarantee
stability, even of weak positive samples.
The Strep A test is compatible with at least the following
transport media: Amies medium (liquid) / Stuart medium
(gel), enabling collection and storage in accordance
with the manufacturer's instructions. Group A
streptococcus samples suspended in Amies liquid
transport medium must be stored at -70ºC (where they
12
are stable for at least 7 days) or failing that, at -20ºC (when
their stability is guaranteed for 3 days). If freezing is not an
option, the sample can be stored refrigerated or at room
temperature for up to 24 hours.
OPERON recommends using the supplied sterile rayon
swabs or FLOQSwabs (Copan) to ensure the test takes
place in ideal conditions. The effectiveness of other brands
of swab with the Strep A test has not been checked.
OBTAINING PHARYNGEAL SAMPLES
Collect the samples from the throat using standard clinical
methods and the swab supplied with the kit. To obtain the
sample, lower the tongue using a depressor and pass the
swab across the tonsils, any area with inflammation and
pus, or any red areas at the back of the throat. Take care
not to touch the swab with the tongue or inside of the
cheeks, and avoid it soaking up saliva.
SAMPLE PREPARATION
General Note: use disposable gloves throughout the test
as infectious samples are being handled. On completion,
follow the hygiene procedures in point 4 of the
“Precautions” section.
POSITIVE CONTROL: once removed from the aluminium
bag and allowed to reach room temperature, the positive
control is processed in the same way as a real sample
(swab), as described below.
1. Add 3 drops of sample dilution buffer-1 (red cap) to the
vial supplied with the kit (it can be placed in the holder).
The buffer will be a pinkish colour.
2. Add 3 drops of sample dilution buffer-2 (yellow cap) to
the same vial. The colour will instantly change from pink to
pale yellow.
3. Introduce the swab into the vial containing the mix of
both buffers and rotate for 1 minute to ensure the sample is
released and extracted properly.
For samples diluted in Amies transport medium (liquids),
add 50 µl of sample to the vial containing the buffer mix
using a micropipette, and mix well. Incubate for 1 minute.
4. Press the swab against the vial sides, rotating it while
removing it from the vial. This will release as much sample
from the swab as possible.
For samples diluted in an Amies medium, please go straight
to the next point.
SIMPLE PROCEDURE
Once the samples have been prepared as described above,
proceed as follows:
1. Close the vial into which the sample was extracted using
the pipette cap.
2. Invert the vial and add 4 drops of the extracted sample
to the circular window of the reaction device marked with
an arrow.
3. Incubate the test at room temperature for 10 minutes.
Read and interpret the result.
STICK PROCEDURE
1. Introduce the reactive strip into the vial containing the
extracted sample with the arrows pointing towards the
bottom of the tube.
IMPORTANT: the liquid should never reach the area
marked with the arrows.
2. Incubate the test at room temperature for 10
minutes. Read and interpret the result in the central area
of the strip.
READING THE RESULTS
The strips shown in Fig. 1 are examples of the different
results that can be obtained with the Strep A test.
2 different coloured lines can be seen:
An upper blue line: this is the control line that indicates
that the test is working correctly.
A lower red line: this indicates that S.pyogenes (group
A Streptococcus) is present in the sample.
Strip 1: a NEGATIVE result.
Only a BLUE horizontal line appears (aligned with the
letter “C” marked on the housing of the Simple format).
This is the control line, which should always appear, as
it indicates that the chromatography worked correctly.
Strip 2: a POSITIVE result.
Group A streptococcus detection: a BLUE (control) line
appears, along with a RED line approximately 5 mm
below the control line (aligned with the “T” mark on the
housing for the Simple format). The analyte
concentration in the sample determines the intensity.
Strip 3: an INVALID result.
The BLUE control line does not appear, the blue colour
of the control line is clearly altered (very dark blue or
purple), or different colours appear on the test line
(rather than red). Any combination of colours other
than those indicated above implies that the test did not
work correctly. This may be due to any of the following
reasons:
- some of the reagents have deteriorated or the test has
expired.
- the sample was not prepared in accordance with the
instructions for use.
Repeating the test using a new strip in the event of an
invalid result is recommended, strictly adhering to the
instructions for use described in this manual.
POSITIVE CONTROL:
A blue line should appear that corresponds to the test
control line (aligned with the “C” mark on the housing)
and a red line below the control line (aligned with the
“T” mark on the housing).
13
DIAGNOSTIC SENSITIVITY AND SPECIFICITY B.-External evaluation of the Strep A test
A.- Internal evaluation of the Strep A test The OPERON, S.A. Simple/Stick Strep A and a culture
The OPERON, S.A. Simple/Stick Strep A rapid test was (reference technique) were compared using 113 swab
compared to: samples in Amies gel medium.
a) A culture: the reference technique and In the study, the swabs with the samples were used to
seed the blood agar plates (Biomerieux) first, before
b) Alere Test Pack Plus + OBC: a commercially available
being incubated for 24-48 hours in order to
rapid test (Alere) for detecting group A Streptococcus.
subsequently identify the bacteria using bacitracin discs
The study includes 127 samples characterised by culture in (Biomerieux) or mass spectrometry (Maldi-tof Vitek MS
the source laboratory, of which 44 and 83 were negative Biomerieux). Afterwards, the surplus sample on the
and positive for S. pyogenes respectively. They were all swab was used for analysis with the Simple/Stick Strep
stored diluted in Amies medium and frozen. A test, extracting and analysing in accordance with
The results were as follows: these instructions for use.
a) Compared to a culture: This operating sequence is very likely to lead to an
underestimation of the rapid test because it uses a
Culture
swab containing less sample than the source, so the
Positive Negative Total results were calculated from two perspectives:
a) Considering all positive samples:
Simple Positive 74 0 74
Strep A Culture (blood agar plate)
OPERON Negative 9 44 53
Positive Negative Total
Total 83 44 127
IC Positive 42 0 42
- Sensitivity agreement: 89.2% Simple
With 95% confidence intervals between 80.7% and 94.2%. Strep A Negative 11 60 71
- Specificity agreement: >99.9%. Total 53 60 113
With 95% confidence intervals between 92.2% and 99.8%.
-Positive predictive value (PPV)>99.9%. - Sensitivity agreement: 79.3%
-Negative predictive value (NPV): 83% With 95% confidence intervals between 66.6% and
-Estimated efficiency: 92.9% 87.9%.
Based on an evaluation of samples with a disease - Specificity agreement: >99.9%
prevalence of 65.4 %. With 95% confidence intervals between 94.1% and
99.9%.
b) Compared to the Alere rapid test: -Positive predictive value (PPV)>99.9%.
ALERE “Strep A Test Pack + Plus -Negative predictive value (NPV): 84.5%
with OBC -Estimated efficiency: 90.3%
Positive Negative Total
Based on an evaluation of samples with a disease
prevalence of 46.9%.
Simple Positive 83 0 83
Strep A b) Excluding positive samples with moderate growth on a
Negative 0 44 44 plate (more likely not to be detected due to less sample
OPERON
on the swab):
Total 83 44 127
Culture (blood agar plate)
- Sensitivity agreement: >99.9%.
Abundant
With 95% confidence intervals between 95.7% and 99.9%. Negative Total
positive
- Specificity agreement: >99.9%
With 95% confidence intervals between 92.2% and 99.8%. IC Positive 36 0 36
-Positive predictive value (PPV)>99.9%. Simple
Strep A Negative 4 60 64
-Negative predictive value (NPV)>99.9%.
-Estimated efficiency: >99.9%. Total 40 60 100
Based on an evaluation of samples with a disease
prevalence of: 100% (75 /127) =59.1 %
- Sensitivity agreement: 90%

15
With 95% confidence intervals between 77% and 95.9%.
- Specificity agreement:
100%[60 / 60+0)] =>99.9%
With 95% confidence intervals between 94.1% and 99.9%.
-Positive predictive value (PPV)>99.9%.
-Negative predictive value (NPV): 93.8%
-Estimated efficiency: 96%
Based on an evaluation of samples with a disease
prevalence of 40 %.
REPEATABILITY
5 replicates of a series of ½ dilutions of an internal
standard (sensitivity curve), along with real samples
established as NC (”negative sample”), LPC (“weak
positive sample”), and PC (“positive sample”), were
analysed on the same day by the same person. High
repeatability was obtained with differences between the
replicates of the standard and the real samples equal to or
below one half ½ dilution. When interpreting the reader,
the RSD values obtained for the positive lines with values
above the cut-off were ≤ 30%,
NOTE: during the immunochromatography technique, the
differences of one ½ dilution are considered assumable
and tolerable for the technique.
dilution on the sensitivity curve were observed, which
are assumable and tolerable by the assay, and no
differences were found among the real samples result.
When interpreting with the reader, the RSD values
obtained for the positive lines with values above the
cut-off were ≤ 40%.
THE HOOK OR PROZONE EFFECT
There is evidence that the Strep A test does not present
a Hook Effect after analysing up to a maximum
concentration of approximately 2.56x108 CFU/ml of an
S.pyogenes culture, representing 800 times the Limit of
the Test.
The highest concentration of S. pyogenes found among
all the samples analysed at Operon (many with a high
bacterial load) was 6.4x107 CFU/ml, around 200 times
the Limit of the Test, which is within the range where the
Hook effect has not been observed.
INTERFERING SUBSTANCES
At the concentrations indicated in the table, the
following substances did not affect the test results when
added to the samples (positive and negative):
Substance Concentration

Budesonide (1 mg/ml) 10% v/v

REPRODUCIBILITY
Listerine
INTER-DAY PRECISION 20% v/v
(0.150 % benzoic acid))
Using the same batch of the Strep A test, quintuplicate
measurements of several points of a sensitivity curve were Lizipaina
taken at intervals over a five-day period, along with a (chlorhexidine 5 mg/ benzocaine 2.5 mg 20 mg/ml
group of real samples established as NC (”negative per tablet)
sample”), LPC (“weak positive sample”), and PC (“positive
Angileptol
sample”), in duplicate in this case. The results were very
(Chlorhexidine dihydrochloride 5 mg/
easy to reproduce. The variations were less than one half a 20 mg/ml
½ dilution for sensitivity. Benzocaine 4 mg/ Enoxolone 3 mg per
tablet)
When interpreting with the reader, the RSD values obtained
for the positive lines with values above the cut-off were ≤ Ibuprofen 10 mg/ml
35%.
Paracetamol 20 mg/ml
INTER-OPERATOR PRECISION
In triplicate, three persons measured a sensitivity curve and Acetylsalicylic acid 20 mg/ml
a group of real samples established as NC (”negative
Propol2 (Propolis 0.6%) 20% v/v
sample”), LPC (“weak positive sample”), and PC (“positive
sample”), following the described procedure. No Golamir (Actifilm DOL comprised of
differences were observed in the final allocated result tannins, resins, polysaccharides and 20 mg/ml
(none were higher than one ½ dilution for sensitivity). flavonoids )

When interpreting with the reader, the RSD values obtained Salvigol (Cane sugar; freeze-dried Inulina
for the positive lines above the test’s cut-off were < 35%. Honey*; Salvia (Salvidol 2-LMF)*; Aloe vera 20 mg/ml
INTER-BATCH PRECISION *; Myrrh

Using three different batches of the Strep A test and in Disneumon pernasal (0.5% Phenylephrine
10% v/v
triplicate, a sensitivity curve was measured, along with a hydrochloride
group of real samples established as NC (”negative
Inistol (0.25 mg/ml triprolidine 20% v/v
sample”), LPC (“weak positive sample”), and PC (“positive
hydrochloride, 6 mg/ml of
sample”). The analysis was performed by one person on pseudoephedrine hydrochloride, and 2
the same day. Only differences of less than one ½ a

16