Técnica e interpretación de

resultados.
M. Susana Olivia Guerra Martínez.

Técnica que se utiliza para identificar cuales son los antibióticos adecuados para
cada tipo de infección causadas por bacterias.

Antibióticos afectan directamente a la célula bacteriana: evitar que desarrolle su material genético o su
pared celular, cause un desarreglo en la membrana del microorganismo, afecte la síntesis de las proteínas
La susceptibilidad o resistencia de los antimicrobianos
dependen de diferentes factores:
 FACTORES DEL AGENTE ANTIMICROBIANO
 FACTORES DEL HUESPED
Mecanismo de
acción por el cual
actúa el
antimicrobiano
Sistema inmunológico del paciente,
microrganismos de su biota normal, cuales son
las enfermedades predisponentes, alergias (como
a las penicilinas, se buscan alternativas como
heritromicinas, macrolidos)

 FACTORES DEL MICROORGANISMO

Dependiendo del tipo de factor de patogenicidad, muchos
producen enzimas que degradan antibióticos. Otros
producen toxinas que al momento de lisarse los
microorganismos comienza haber intoxicación masiva
Es un estudio de susceptibilidad por
difusión en disco. Un disco que
tiene una cantidad específica (no
concentración) de
antimicrobiano, es aplicado a una
superficie de agar inoculado con un
microorganismo.
Halos de
susceptibilidad donde
el microorganismo no
puede crecer
Inocular es pasar a De un cultivo puro. Se cuida la concentración de
microorganismos a sembrar, esta se mide
un microorganismo mediante nefelometría donde se mide la turbidez
de donde hay de un liquido y en base a eso se hace correlación
crecimiento a donde donde cierta turbidez corresponde a cierta conc CONDICIONES A CUIDAR
no hay nada de bacterias. Tambien se puede hacer mediante EN LA TÉCNICA DE KIRBY
la comparación de un estándar químico y uno
biológico (este es visual) BAUER:
 La concentración del inóculo.
Para una caja
 Cantidad de discos chica se
recomiendan
colocados. 4 discos.
Para una
 Distancia de separación grande se
entre los discos de recomiendan
7 discos max.
antibióticos.
 Distancia de separación
entre discos y bordes de la
caja
 Inoculación adecuada.
 USO:
Los patrones de McFarland se utilizan como patrones de
turbidez en la preparación de suspensiones de
microorganismos. El patrón 0.5 de Mc Farland tiene una
aplicación especial en preparación de inóculos
bacterianos para diferentes fines.
Cantidad de
microorganismos
por mL para poder
BaCl2+ H2S04 Turbidez = 0.5 = 1.5 x 108 hacer una siembra
células por ml adecuada de la
Se mezclan .5 mL de cada uno técnica de
de estos y nos da una turbidez antibiograma
de 0.5 de McFarland
 Depende del tamaño microorganismo
 Seleccionar 4 o 5 colonias del ya que algunas son puntiforme,
microorganismo en estudio, preferentemente grandes o mediananas
de cultivo puro o de un cultivo en que se haya
obtenido el aislamiento primario del
microorganismo. Hay microorganismos que es difícil hacer un cultivo
secundario, porque hay sensibles a la acidez donde la
misma acidez de su metabolismo las mata.

 No utilizar cultivos de más de 24 horas.

 Transferir estas colonias tocando la parte

superior de cada una con asa bacteriológica
a un tubo con 3 a 5 ml de SSF esteril o
caldo Mueller-Hinton. Este ultimo en caso que sean bacterias
sumamente delicados en cuanto a nutrientes
 El medio de cultivo utilizado es el Mueller
Hinton. Si se vacía a una mayor se crea mucha condensación y el medio del
cultivo se deshidrata y que queda el agua en la tapa.

 Se vacía a 50°C en las placas Petri sobre una

superficie plana. Se deja solidificar a 40°C.
 Asegurar que la profundidad de 4 mm
aproximadamente. Porque es la medida exacta de un documento
Ideal de 15- 20 mL estandarizado para que la medida de los halos sea exacta
de agar y se pueda hacer comparación con los parámetros.

 Si no se utilizan el mismo día se debe guardar

en refrigeración a 2-8°C por no más de 7 días.
Esta entre Agar nutritivo y un
 El pH debe ser controlado para este medio, Agar enriqueido, donde tiene los
debe ser de entre 7.2 a 7.4. suficiente para que pueda
sobrevivir y se reproduzca

Cultivo puro de no
más de 24 horas
Identificar el
estándar químico
agar Mueller Hinton
de McFarland 0.5
Ajustar mediante una asa el
inóculo bacteriano requerido
para llegar a una
concentración de 0.5 de
McFarland biológico
Con pinzas esterilizadas (en
ocasiones se impregna con
un poco de alcohol al 90% y
se flamea) después de cada
disco que se coloque
3 direcciones
Colocar los discos
diferentes. Dejar
de antibióticos
secar 5 minutos
Incubar 35 a 37°C
Inocular placa de
por 18 horas (24
horas)
Introducir hisopo Revisar diámetros
estéril de inhibición
 Mal
inoculada

En este halo de
Para saber que es lo inhibición hay
colonias que
que crece crecieron en medio
exactamente: se debido a:
toma de donde hay • Son resistentes
crecimiento masivo al antibiótico o
• La cepa esta
una asada y se contaminada y
siembra en un medio hay mas de un
de cultivo nutritivo microorganismo
para aislar colonias.
Si se detectan mas
de 2 colonias ya se
Lo que se hace para corroborar
pueden hacer
rapido si son uno o mas
pruebas bioquímicas
microorganismos es Tinción de
de las colonias.
Gram
Es Serratia, debido
a que tiene un
pigmento rojo
Con el objeto de tener una guía general al realizar un antibiograma se
debe seleccionar un número de antimicrobianos para el microorganismo
en estudio, ya que no es recomendable, ni lógico, ni económico
utilizar todos los antimicrobianos.
 Como regla general se pueden seleccionar antimicrobianos
para microorganismos:
Aunque no siempre
 Gram positivos Generalmente en garganta se encuentran se encuentran los
mismos
 Gram negativos En orina y estomago microrganismos, es
por eso la importancia
 Tracto urinario de cultivos de
bacterias
 Pseuomonas aeruginosa
Tabla general de sensibilidad a
antibioticos de acuerdo al gram
del microorganismo.
OPCIÓN GRAMNEGATIVOS GRAMPOSITIVOS
Sangre Streptococcus
Intestinal Orina Pseudomonas Sthapylococcus
faecalis (D)
OTROS
Tejidos
PRIMERA Ampicilina Acido Amikacina Carbenicilina Penicilina Ampicilina Ampicilina
Gentamicina oxolínico Ampicilina Amikacina Oxacilina Cloranfenicol Penicilina G
Cloranfenicol Acido Gentamicina Gentamicina Eritromicina Tetraciclina Oxacilina
Trim-Sulfa nalidixico Cloranfenicol Torbamicina Cloranfenicol Penicilina G Clindamicin
Tetraciclina Norfloxacina Trim-Sulfa Polimixina B Clindamicina a
Nistrofurantoi Torbamicina Eritromicina
na Tetraciclina.
Sulfisoxazole
Trim-Sulfa
SEGUNDA Ampicilina Cefoxitina Colistina Gentamicina Gentamicin
Cloranfenicol Cefotaxima Netilmicina a
Gentamicina Kanamicina Vancomicina Trim-Sulfa
Cloranfenic
ol
CISTITIS MICROORGANISMOS PLAN DE ANTIBIOTICO
No complicada. E. coli (80%), S. Ácido pipermídico o norfloxacina,
saprophyticus (15%), Amoxicilina/clavulanico, Cefuroxime-axetil,
Otros (Klebsiella, Proteus) Nirtofurantoina o fosfomicina
Embarazadas Los mismos Amoxicilna/clavulanico, Cefuroxime-axetil o
Cefalosporina 1G, Nirtofurantoina (después
del primer trimestre).
Enterococcus Amoxicilina.
Complicada Multiresistentes Guiarse por el gram, buscar sensibilidad
 En Vías orinaría pero en riñón

PIELONEFRITIS MICROORGANISMOS PLAN DE ANTIBIOTICO

No severa E. coli (80%) Fluoroquinolonas, Cefalosporina 3ª G,
Cefuroxime-axetil, Amoxicilina/clavulanico,
Trimetroprim con sufametoxasol.
Enterococcus spp. Ampicilina i.v. + aminósido (5-7d) i.v. mas
amoxicilina v.o.
Embarazadas Los mismos Cefalosporinas 3ª G, Cefuroxime-axetil o
amoxicilina/clavulanico, amoxicilina.
Severa o Los mismos Fluorquinolonas, cefalosporinas 3ª G,
complicada Trimetroprim con sulfametoxasol.
Es uno de los microorganismos multiresistentes
más difíciles de tratar.
De acuerdo a epidemiología de Estados Unidos
en el National Nosocomial Surveillance
System (NNIS) se encontró que de los
aislamientos hechos:
 El 13% de las Pseudomonas son multi
resistentes a antibióticos.
 Causando alrededor de 6700 infecciones de
las 51 000 infecciones causadas por otros
tipos de Pseudomonas
 Causando alrededor de 440 muertes por
esta infección.
DISCO DE… REPRESENTATIVO A…
Penicilina G Penicilinas
Ampicilina Aminopenicilinas: Talampicilina, Pivampicilina, Bacampicilina, Hetacilina,
Amoxicilina y Epicilina.
Oxacilina Penicilinas resistentes a beta lactamasas: Meticilina, Nafcilina, Cloxacilina,
Flucloxacilina y Dicloxacilina. Cefalosporinas de primera generación.
Cefalotina Cefalosporinas de primera generación: Cefaloridina, Cefalexina, Cefradina,
Cefazolina, Cefaloglicina, Cefadroxil, Cefacetril, Cefapirina.
Tetraciclina Tetraciclinas y aminoglucosidos (aunque deben ser probados) como:
Gentamicina, Torbamicina, Amikacina, Kanamicina, Sisomicina, Netilmicina.
Macrólidos Eritromicina
Lincomicinas Lincomicin y Clindamicina
Cloranfenicol, Vancomicina y DEBEN PROBARSE INDIVIDUALMENTE.
Nitrofurantoína
Polimixinas Polimixina B y E
 Esto es mas utilizado en la
veterinaria

E test
 El Etest® es el método manual ideal para las operaciones de
antibiograma rutinarias.
 Consiste en un gradiente de concentración de antibióticos
predefinido colocado en una tira plástica, que es utilizada para
determinar la Concentración Inhibitoria Mínima (MIC) de
antibiótico.
 El método Etest® está muy bien establecido y demuestra un
alto rendimiento en antibiogramas, ya que provee un nivel de
precisión al cual no pueden llegar métodos automatizados.
Son microgramos la unidad de
concentración
Antibiotico torbamicina
Cloranfenicol Torbamicina

Imipenem

Pseudomonas
No se debe de tomar con el hisopo el microorganismo
 Antibiograma con VITEK® 2
 Usado para identificación microbiana, los sistemas VITEK® 2 también son una
referencia para antibiograma y detección de resistencia.
 Basado en micro-dilución de caldo, este sistema automático le ayuda a su laboratorio
veterinario a realizar antibiogramas en el mismo día, aumentando la productividad
de su laboratorio.
 Nuestro sistema viene con una gran oferta de los antibiogramas más relevantes para
diagnósticos veterinarios.
 Gram negativas
 Gram postivas
INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS
 Se deben seleccionar el grupo de
antibióticos que se deben probar.

 De acuerdo al CLSI se medirán los

halos de inhibición (diámetro) en
milímetros, y se localizará en las
tablas.
Las tablas están divididas de acuerdo a
diferentes criterios, es principal (además de
por familias de antibiótico) es en base a la
prioridad de uso (común, nobles, algunos otros
que están aun en investigación
 Pseudomonas tiene la
capacidad de crear resistencia
y de hacer conjugación
bacteriana, eso le permite que
a otras cepas no resistentes
se hagan al pasarles esta
información genética

Mas fácil de
 El CLSI marca que los antibióticos pertenecen a distintos grupos: encontrar en
muchos países.
Son “nobles”

 GRUPO A: Son considerados apropiados para inclusión en pruebas primarias de rutina, así
como para reportar resultados de microorganismos de grupos específicos.
 GRUPO B: Agentes que pueden tener variantes en el grupo A. Infecciones polimicrobianas,
infecciones multisistémicas, alergias o intolerancia a antibióticos, Fallo en la respuesta del
grupo A.
 GRUPO C: Agentes suplementarios que podrían requerir pruebas en microorganismos
resistentes a otros antimicrobianos. Para microorganismos inusuales.
 GRUPO U: “Orina”. Agentes antimicrobianos utilizados en infecciones de vías urinarias.
 GRUPO O: “Otros”. Agentes que tienen indicación clínica para cierto grupo de microorganismo
y que generalmente no son candidatos para pruebas de rutina. Microorganismos multirresistentes como la Pseudomonas
 GRUPO Inv: “Investigación”. Incluye agentes que son para pruebas de investigación para
grupos de microorganismos que aun no han sido aprovados por la FDA.
Vías urinarias
Son antibióticos de amplio aspectro
Para
microorganismos N. gonorrhoeae era sencillo de quitarlo con
exigentes penicilina, y fue por esta bacteria que se hizo
la ley, en donde no venta de antibióticos sin
receta medica
 Vernier o pie de rey sirve para hacer la
S=suceptible medición de los halos de inhibición
I=intermedio
R=resistente
Interpretación de
Diámetros de inhibición. O a concentración mínima
Cantidad de través de equipos inhibitoria
antibiótico automatizados

Hay antibióticos que nos permiten aumentar la dosis en el paciente, en caso de un hacer un antibiograma y que casi todos sean resistente y solo
unos cuantos en la zona de intermedio. Por lo tanto se puede aumenta un poco a la dosis de manera de no llegar a la letal y hacer un efecto
farmacológico (es como decir que lugar de tomarlo cada 8 podría ser cada 6 para aumentar la dois a nivel plasmático del antibiótico)
 Pagina 45 empiezan tablas para identificación de suceptibilidades y resistencias
antimicrobianos
 Pagina 62 en caso de Pseudomonas