Determinación de la concentración letal 50 (CL50) en Artemia salina

*Cerqueda Pereda Carlos *Espinosa Alcántara Melanie   *Guillén Arzaluz Salma *Morán Millán Jessica  *Tlatempa Tayde

Introducción
Bioensayo. El proceso de determinar la potencia de una sustancia o de un material a partir de las respuestas producidas en organismos biológicos. Algunos ejemplos de sustancias
podrían ser los fármacos, las hormonas, los agentes cancerígenos, los agentes toxicológicos, los efectos ambientales, etc. (Jiménez, 2010)
Dicromato de Potasio. Es una sal formada a partir del ácido dicrómico, su color es naranja intenso, es fuertemente oxidante, en contacto con compuestos orgánicos es altamente
inflamable. Se emplea en la producción de productos pirotécnicos y explosivos, en el galvano técnico para cromar otros metales, como colorante, impresiones, curtir pieles, fabricar
telas repelentes al agua, fabricar baterías eléctricas, elaborar productos químicos orgánicos, etc. La Artemia salina. Es un pequeño crustáceo de más de dos centímetros de longitud
(adulta), catalogado como el más primitivo insecto, por su constitución fisiológica simple. Diferentes ensayos realizados sobre organismos de Artemia salina han demostrado que
eclosión de los huevos inicia en tiempos más tardíos de lo reportado en la bibliografía. Los efectos tóxicos del dicromato no se manifiestan en las primeras 3 horas de desarrollo de
los organismos. En las concentraciones correspondientes a 5, 10 y 15 mg/L se observó que algunas larvas presentan dificultades en la natación a las 24 h, porcentaje de mortalidad
varía desde el 3% hasta el 100% en concentraciones de (5, 10 y 15 mg/L) en tiempos de 24 de exposición a dicho toxico. La concentración letal del 50% (LC50) estimada fue de 12,5
mg/L, la cual está en el rango de valores reportados en la literatura para ensayos agudos en invertebrados acuáticos (Jiménez, 2010)

Hipótesis
- Si colocamos a artemias en mayor tiempo de exposición y mayor concentración de K2Cr2O7, entonces será mayor el número de artemias salinas muertas, esto debido al nivel de intoxicación que tendrá
Objetivos
-Manejar un sistema biológico alterno a los mamíferos para la determinación de la curva concentración-respuesta cuantal.
-Poder realizar el cálculo de CL50 mediante el análisis de probit.

Método Resultados
CL 50 Análisis estadístico (cálculos en el anexo).
8 -Método de Miller-Tainter.
y = 3.3111x + 3.0912
7
R² = 0.9789
CL50=3.771 mg/ml S=2.807 eem=0.023 α=0.05
6 Intervalo de Confianza= (3.725<3.771<3.817) (mg/mL)
Unidades probit

5
4
-Método de Litchfied-Wilcoxon.
3
CL50=3.771 mg/ml S=7.981x10-5 eem=0.179 α=0.05
2
LSC=3.7705 LIC= 3.7715
1
Intervalo de confianza = (3.7705<3.7712<3.7715) (mg/mL)
0
0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40
Log [concentracion] (mg/ml)

Grafica 1. Resultados globales de muertes en Artemias a los

50 min.

Análisis y discusión de resultados

Material
a) Material biológico
-300 ejemplares adultos de Artemia
Salina.
b) Cristalería y equipo
-Un vaso de precipitado de 500 mL.
-Una pipeta graduada de 2 mL
-Una pipeta volumétrica de 10 mL.
-24 frascos viales marcados en 5 mL.
-Una lámpara de escritorio.
-Una pipeta Pasteur con bulbo.
Conclusión
Nuestra hipótesis fue acertada porque a
partir de este bioensayo logramos medir la
toxicidad del dicromato de potasio, al
observar que en cuanto mayor era la
concentración y tiempo de exposición,
mayor era el número de Artemias salinas
muertas.
Se calculó que la CL50 es de 3.771 mg/mL
(dosis necesaria para producir la muerte
en el 50% de nuestra población de
Artemias) gracias al uso del análisis Probit.
El uso de la artemia salina nos aporta sencillez bajos costo y confiabilidad por la capacidad de repetición del experimento en
diferentes concentraciones; las especies de invertebrados como los crustáceos son más sensibles a sus efectos que los vertebrados
como los peces. Una de las principales características presentadas en los individuos expuestos fue una notable disminución de la
velocidad de desplazamiento en el nado.
Por el potencial impacto que representa para el ambiente, la emisión de cromatos y dicromatos (cromo VI), vertidos producto de la
actividad de diferentes sectores industriales, se determina la toxicidad aguda del K2Cr2O7 en larvas de Artemia salina como método
alternativo aplicado a la eco-toxicología.
De acuerdo con los resultados de la gráfica 1, se afirma que a mayor concentración de dicromato de potasio (K2Cr2O7), mayor es la
muerte de las artemias salinas, ya que este entra a la célula por canales iónicos y producen alteración en el ADN, que genera muerte
celular. El cromo hexavalente es acumulado por los organismos acuáticos por difusión pasiva. La toxicidad para los diferentes grupos y
especies no es la misma y varía además de acuerdo con las condiciones ecológicas y a las características químicas del agua.
Se determinó una curva concentración-respuesta cuantal (efecto fijo), es decir, de las Artemias que presentaron o no el efecto.
La CL50 calculada en el método de Miller-Tainter fue de (3.725<3.771<3.817) (mg/mL), mientras que por el método de Litchfield-
Wiloxin fue de (3.7705<3.7712<3.7715) (mg/mL).
La concentración letal reportada por nuestro experimento es bastante elevada en comparación con la del experimento de la doctora
Yueldis (artículo 2 citado) ya que el de dicho experimento fue de 12.5mg/L mientras que el nuestro es de 3.771 mg/mL, la diferencia
de resultados radica en que el experimento realizado por la doctora Yueldiz utilizaba nauplios mientras nosotros utilizamos Artemias
adultas; también debemos considerar las diferentes condiciones en ambos laboratorios eran diferentes tales como temperatura y
presión. podemos atribuir esta alta concentración a la falta de tiempo de exposición al K 2CR2O7, por un mal estado de las Artemias;
agitación y temperatura que estuvieron expuestas antes de empezar a trabajar con ellas. El tiempo de vida de una Artemia, es
relativamente corto de uno a 3 meses como máximo.
Referencias
 Jiménez A. (2010) Estudio de mico crustáceos como indicadores de toxicidad… disponible en:
https://repository.unimilitar.edu.co/bitstream/10654/6590/3/Trabajo%20seminario%20de%20grado.pdf , consultado [02/09/18].
 González, Y., Aportela, P. (2001) Determinación de la toxicidad aguda del dicromato de potasio en Artemias salinas. Centro de Toxicología y Biomedicina. Páginas
106-107.
 Lic. Yuleidis González Pérez1 y Lic. Patricia Aportela Gilling. (2001). DETERMINACIÓN DE LA TOXICIDAD AGUDA DEL DICROMATO DE POTASIO EN LARVAS DE
ARTEMIA SALINA. 17 de marzo 2002, de Centro de Toxicología y Biomedicina. Sitio web: http://bvs.sld.cu/revistas/anu/vol1_1_01/anu1701.pdf
 https://www.aquariavirtual.com/blog/alimento-marino/3-ciclo-de-vida-de-la-artemia
 JESÚS DAVID PACHECO GÓMEZ. (2011). DETERMINACIÓN DE LA TOXICIDAD AGUDA (CL50) DEL EXTRACTO DE POLVILLO DE CARBÓN FRENTE A LARVAS DE Artemia
franciscana. agosto 2011, de UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA Sitio web: http://bdigital.unal.edu.co/4320/1/598923.2011.pdf

1.
 Anexo

Mecanismo de acción del K2Cr2O7: El K2Cr2O7 es un sólido cristalino rojo utilizado como agente oxidante. Penetra a través de barreras fisiológicas, ingresa a la
célula utilizando la vía general de canales proteicos transportadores de aniones, al ingresar al espacio intracelular, el Cr (VI) interacciona con agentes
reductores provocando su reducción a Cr (V), Cr (IV) y Cr (III) generando una fuerza oxidativa que provoca desde efectos subletales sobre la movilidad y
reproducción hasta la muerte de la Artemia salina.
Cálculos estadísticos.
Método Miller-Tainter. Método de Litchfied-Wilcoxon.
Cl 84−CL 16 5.99−α 4.01−α
CL 16=10CL84 − CL 50
μ μ
S= μ 84= μ16= CL 84=10 84 16
2.77
2 β β CL50 CL16 E=
2S S= √N
eem= LSC= CL50 + (tα=0.05 )(eem) LIC= CL50 - (tα=0.05 )(eem) 2
√N F CL50 =E LSC=CL50 FCL 50
S
IC= CL50 ± (tα=0.05)(eem)
Donde. α=ordenada al origen de la grafica 1 β=la pendiente de la gráfica 1 CL50
LIC=
FCL 50