INSTITUTO DE CIENCIAS NATURALES

PRACTICO Nº 1B
INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA CQU-310

Puntaje Informe: 21 puntos

Puntaje preguntas: 9 puntos
Total:30 puntos

Nombre Alumnos Christian Ulises Ahumada Mella

Maximiliano Felipe Antonio San Martin Rojas
Fecha

Curso CQU 310 - Grupo B

I.- TITULO (2 pto)

Separación de proteínas por cromatografía extracción molecular

III.- CÁLCULOS Y RESULTADOS:

a.- Datos teóricos:

Hemoglobina : 420 nm

 DCPIP: 580 nm

PMHemoglobina: 64.4 kda

PM DCPIP: 2.6 kda

b.- Cálculos. ( No olvidar Unidades). (4 pts)

Altura (h): 12 cm
Diámetro Interno (d): 2.5 cm
Radio Interno (r): 1.25 cm
Volumen total (VT):  x r2 x h = 117.5 ml
Volumen muerto (VO): 0,35 x VT = 41.21 ml

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c.- Tabla de elusión de compuesto (Indique con colores diferentes los volúmenes de elusión de
la hemoglobina como el DCPIP).

Tubo Volumen de Tampón (ml) Absorbancia (Hemoglobina) Absorbancia (DCPIP)

1 5 ml 0.058 nm 0.142 nm
2 10 ml 0.055 nm 0.142 nm
3 15 ml 0.117 nm 0.142 nm
4 20 ml 0.060 nm 0.142 nm
5 25 ml 0.214 nm 0.169 nm
6 30 ml 0.098 nm 0.142 nm
7 35 ml 0.55 nm 0.142 nm
8 40 ml 0.117 nm 0.142 nm
9 45 ml 0.074 nm 0.143 nm
10 50 ml 0.029 nm 0.143 nm
11 55 ml 0.067 nm 0.143 nm
12 60 ml 0.028 nm 0.143 nm
13 65 ml 0.045 nm 0.143 nm
14 70 ml 0.047 nm 0.143 nm
15 75 ml 0.038 nm 0.143 nm
16 80 ml 0.031 nm 0.143 nm
17 85 ml 0.044 nm 0.145 nm
18 90 ml 0.062 nm 0.145 nm
19 95 ml 0.027 nm 0.145 nm
20 100 ml 0.083 nm 0.145 nm

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d.- Cromatrograma. No olvidar colocar título del gráfico y ejes (5 pts)

grafico 1:

Volumen de Tampón(ml) Absorbancia

(Hemoglobina)(nm)
0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

Grafico 2:

Volumen de Tampón(ml)Absorbancia
(DCPIP)(nm)
0.175
0.17
0.165
0.16
0.155
0.15
0.145
0.14
0.135
0.13
0.125
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100

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e- Cálculo de Kav (No olvidar unidades) (4 pts)

Volumen de elusión Hemoglobina (Ve) = 35 ml

Volumen de elusión de DCPIP (Ve) = 25 ml

Kav = VE – VO ➔ 35 – 41.21
VT – VO 117.5 – 41.21
Kav Hemoglobina: 0.0813 kav

Kav DCPIP: 0.2124 kav

IV.- ANÁLISIS:

a) Discusión de Resultados (6 pts)

• Analice el cromatograma obtenido (principalmente descriptivo)

Se puede apreciar en el primer grafico (Absorbancia hemoglobina) que tuvo mayor
separación de proteínas (punto de elusión) a los 35ml en cambio en el segundo
grafico la absorbancia de DCPIP la mayor separación de proteínas fue a los 25 ml
(punto de elusión).

• Defina Kav
Kav - Coeficiente de distribución representa a la fracción de volumen del interior
de las esferas a la que accede cada sustancia en virtud de su tamaño. Es el
parámetro más correcto y
también el más ampliamente utilizado.
El Kav de una sustancia se define como:
Kav = Ve-Vo/Vt-Vo
El valor de Kav oscila entre 0 (cuando Ve=Vo) y 1 (cuando Ve=Vt), y
representa la fracción de volumen del interior de las esferas a la que accede
cada sustancia en virtud de su tamaño.

• Compare Kav de la Hemoglobina y DCPIP y su relación con el Ve de estas

moléculas.

Kav Hemoglobina 35-41.21/117.5-41-21= -0.0813

Kav DCPIP 25-41.21/117.5-41.21= -0.2124

El Kav de DCPIP nos demuestra que hubo mayor absorbancia dando un resultado
mas exacto y mas definido de lo que es la reacción de la proteína al tratamiento.

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