Kit IT Minicap - Es

MINICAP IMMUNOTYPING
Ref. 2300
2019/07
MINICAP IMMUNOTYPING - 2019/07
UTILIZACIÓN
El kit MINICAP IMMUNOTYPING permite la detección y caracterización en medio alcalino (pH 9,9) de las proteínas monoclonales (inmunotipado) en
el suero humano, mediante electroforesis capilar en el sistema automático MINICAP. Debe usarse con el kit MINICAP PROTEIN(E) 6, SEBIA, que
permite separar las proteínas en seis fracciones principales.
El sistema MINICAP permite realizar todas las etapas de la electroforesis hasta la obtención de los perfiles proteicos para su análisis cualitativo. Cada
muestra de suero que se analiza se mezcla con antisueros de diferentes especificidades, anti-cadenas pesadas gamma (Ig G), alfa (Ig A) y mu (Ig M)
y anti-cadenas ligeras kappa y lambda (libres y ligadas).
Todas las proteínas, separadas en capilares de sílice fundido, son detectadas directamente en una burbuja existente en el capilar mediante
espectrofotometría de absorbancia a 200 nm.
Después, los perfiles electroforéticos son analizados visualmente para detectar las anomalías y caracterizar las proteínas monoclonales detectadas.
Para uso en diagnóstico In Vitro.
NOTA : En estas instrucciones, el nombre "MINICAP" es usado para designar los sistemas automáticos MINICAP y MINICAP FLEX-PIERCING,
SEBIA.
PRINCIPIO DEL TEST

La electroforesis de proteínas del suero humano es un análisis muy útil en el laboratorio de análisis clínicos para investigar las modificaciones del
perfil proteico. Paralelamente a las técnicas de electroforesis en diferentes soportes, entre los que está el gel de agarosa, se ha desarrollado la técnica
de la electroforesis capilar, que ofrece las ventajas de una automatización completa del análisis, separaciones rápidas y una buena resolución. Se
define como una técnica de separación electrocinética realizada en un tubo de diámetro interno inferior a 100 μm lleno de un tampón compuesto por
electrolitos. Se considera una tecnología intermedia entre la electroforesis de zona en soporte y la cromatografía líquida.
El sistema MINICAP usa el principio de la electroforesis capilar en solución libre, que representa la forma más corriente de electroforesis capilar.
Permite la separación de moléculas cargadas en función de su movilidad electroforética propia en un tampón de un pH dado, y, según el pH del
electrolito, de un flujo electroendosmótico más o menos importante.
Las inmunoglobulinas monoclonales, marcadores de gammapatías, son detectadas durante la electroforesis de proteínas. En la electroforesis capilar,
se presentan en forma de picos anormales situados esencialmente en las zonas beta o gamma del perfil electroforético. En la técnica MINICAP
IMMUNOTYPING, el inmunotipado se realiza usando antisueros monoespecíficos y permite la identificación de los picos monoclonales detectados
en la electroforesis.
El sistema MINICAP posee 2 capilares en paralelo, permitiendo realizar 2 análisis simultáneos. En este sistema, la muestra que se va a analizar es
inyectada, por aspiración en el ánodo, 3 veces sucesivamente en los 2 capilares. El perfil proteico de referencia (perfil ELP) se obtiene mediante
inyección de la muestra en presencia de la solución ELP. Los perfiles de los antisueros se obtienen, durante los 5 análisis siguientes, por inyección
de la misma muestra en presencia de los antisueros de diferentes especificidades anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-Kappa y anti-Lambda en los
capilares.
La separación se realiza a continuación aplicando una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos de cada capilar, y la detección
directa de las proteínas se efectúa a 200 nm en el lado catódico. Los capilares se lavan entre cada análisis con una solución de lavado y luego con
el tampón de análisis.
La superposición de uno de los perfiles de antisuero con el perfil ELP permite visualizar la desaparición y/o la disminución de un pico monoclonal en
el perfil del antisuero y tipar una gammapatía.
NOTA : Con el tampón de pH alcalino usado, el orden de migración de las proteínas es el siguiente, del cátodo al ánodo : gamma globulinas, beta-2
globulinas, beta-1 globulinas, alfa-2 globulinas, alfa-1 globulinas y albúmina. Cada fracción contiene uno o varios constituyentes. El complejo
inmunoglobulinas de la muestra de suero - inmunoglobulinas del antisuero específico aparece en una posición muy anódica (en la zona entre
alfa-1/albúmina o más anódico que la albúmina).
El inmunotipado se realiza en cuatro etapas :

1. Dilución del suero con un diluyente específico en una cubeta de reactivo. La dilución se adapta a la concentración de inmunoglobulinas de la
muestra.
2. Aspiración de la solución ELP, de cada antisuero y de la muestra diluida para mezclarlos en una cubeta de reactivo, a razón de una cubeta para
2 reactivos. El complejo antígeno-anticuerpo se forma rápidamente en el medio líquido sin etapa de incubación ni de precipitación.
3. Tres inyecciones sucesivas de las muestras tratadas, por aspiración en los 2 capilares (en el lado anódico), seguidas de las separaciones
electroforéticas de las proteínas en medio alcalino mediante la aplicación de una diferencia de potencial de varios miles de voltios en los extremos
de los capilares. La detección directa de las proteínas se efectúa a 200 nm (en el lado catódico).
4. Superposición del perfil ELP en los perfiles de los antisueros (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa y Lambda), lo que permite la caracterización de la proteína
monoclonal.
REACTIVOS SUMINISTRADOS EN EL KIT MINICAP IMMUNOTYPING
ATENCIÓN : Ver las fichas de datos de seguridad.
COMPONENTES REF. N° 2300

Diluyente de muestras (listo para usar) 6 viales de 4,0 mL
Soporte con los tubos de la solución ELP y los antisueros
Solución ELP (lista para usar) 1 vial de 1,2 mL
Inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas pesadas gamma humanas (listo para usar) 1 vial de 1,2 mL
Inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas pesadas alfa humanas (listo para usar) 1vial de 1,2 mL
Inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas pesadas mu humanas (listo para usar) 1 vial de 1,2 mL
Inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas ligeras kappa humanas (libres y ligadas) (listo para usar) 1 vial de 1,2 mL
Inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas ligeras lambda humanas (libres y ligadas) (listo para usar) 1 vial de 1,2 mL
Durante el transporte, el kit puede permanecer a temperatura ambiente (entre 15 y 30 °C) durante 15 días sin que la calidad del test se vea afectada.
- 84 - INSTRUCCIONES SEBIA - Español

PARA UNA GESTIÓN ÓPTIMA DE LA TRAZABILIDAD : Los elementos de un mismo kit deben ser usados conjuntamente.
PARA LA OBTENCIÓN DE LOS RESULTADOS ESPERADOS : Las instrucciones suministradas deben ser respetadas.
ATENCIÓN : No use agua destilada o desionizada comercial, como por ejemplo el agua para planchar (riesgo de deterioro importante de
los capilares). Use exclusivamente agua de calidad ultra pura, como el agua para inyección.
1. DILUYENTE DE MUESTRAS
Preparación
El diluyente de muestras está listo para usar. Contiene : tampón pH 9,4 ± 0,5 ; componentes inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para
un funcionamiento óptimo.
Uso
Diluyente específico para la dilución automática de las muestras antes del análisis de las proteínas mediante electroforesis capilar con el sistema
automático MINICAP. Contiene un marcador que permite la superposición óptima de los perfiles electroforéticos.
Debe colocarse directamente en el carrusel del MINICAP después de haber destapado el vial, con el código de barras orientado hacia la ventana de
lectura.
Conservación, estabilidad y señales de deterioro
El diluyente de muestras puede conservarse a temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) o en nevera (entre 2 y 8 °C). Es estable hasta la fecha de
caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de diluyente.
Debe estar exento de precipitados.
NO LO CONGELE.
2. SOPORTE CON LOS TUBOS DE LA SOLUCIÓN ELP Y LOS ANTISUEROS

El soporte que contiene los tubos de la solución ELP y los antisueros anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa y anti-Lambda está listo para usar.
Debe colocarse directamente en el carrusel del MINICAP, poniendo los códigos de barras de los tubos orientados hacia las ventanas de lectura.
IMPORTANTE : Coloque el soporte en el carrusel del MINICAP justo antes de iniciar la serie de análisis y, en cuanto acabe la serie, vuelva a ponerlo
inmediatamente en nevera (2 – 8 °C).
2.1. SOLUCIÓN ELP

Preparación
La solución ELP está lista para usar. Contiene : tampón pH 7,4 ± 0,5 ; componentes inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un
funcionamiento óptimo.
Tiene un color específico (amarillo) para evitar errores al usarlo. El color es el mismo que el de la etiqueta del vial.
Uso
Para la obtención del perfil proteico de referencia (perfil ELP).
La solución ELP debe conservarse en nevera (entre 2 y 8 °C) en el soporte. Antes de usarla, es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el
kit o en la etiqueta del vial de la solución ELP.
El vial de la solución ELP, colocado en el soporte sobre el carrusel del MINICAP, es estable un máximo de 60 horas (acumuladas) a temperatura
ambiente (de 15 a 30 °C).
Después de cada uso, la solución ELP debe conservarse obligatoriamente en nevera (2 - 8 °C) lo antes posible, siendo entonces estable hasta
la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial de la solución ELP.
IMPORTANTE : El tiempo total acumulado que la solución ELP está a temperatura ambiente no debe superar las 60 horas.
Debe estar exenta de precipitados.
NO CONGELAR.
2.2. ANTISUEROS
Preparación
Los antisueros están listos para usar. Contienen inmunoglobulinas totales de mamífero anti-cadenas pesadas gamma (rosa), anti-cadenas pesadas
alfa (azul oscuro), anti-cadenas pesadas mu (verde amarillento), anti-cadenas ligeras kappa libres y ligadas (verde claro), y anti-cadenas ligeras
lambda libres y ligadas (azul claro) ; componentes inocuos a las concentraciones usadas necesarios para un funcionamiento óptimo.
Cada reactivo tiene un color específico para evitar errores al usarlo. El color es el mismo que el de las etiquetas de los viales.
Uso
Para el inmunotipado de las proteínas mediante electroforesis en el sistema automático MINICAP.
IMPORTANTE : Los antisueros son específicos de la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, y no pueden en ningún caso ser usados en técnicas de
inmunofijación en geles de agarosa o viceversa.
Los antisueros deben conservarse en nevera (entre 2 y 8 °C) en el soporte. Antes de usarlos, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en
el kit o en las etiquetas de los viales de antisuero.
Los viales de antisuero, colocados en el soporte sobre el carrusel del MINICAP, son estables un máximo de 60 horas (acumuladas) a temperatura
ambiente (de 15 a 30 °C).
Después de cada uso, los antisueros deben conservarse obligatoriamente en nevera (2 - 8 °C) lo antes posible, siendo entonces estables
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de los viales de antisuero.
IMPORTANTE : El tiempo total acumulado que los antisueros están a temperatura ambiente no debe superar las 60 horas.
Deben estar exentos de precipitados.
NO CONGELAR.
NOTA : Durante el transporte, la solución ELP y los antisueros pueden permanecer a temperatura ambiente (entre 15 y 30 °C) durante 15 días sin
que la calidad del test se vea afectada.
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ANÁLISIS DE SUEROS : TÉCNICA CAPILLARYS IMMUNOTYPING
REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, referencia 2203)

Presentación, conservación, estabilidad y señales de deterioro
Vea las instrucciones de uso del kit.
2. AGUA DESTILADA O DESIONIZADA

Uso
Para la limpieza de los capilares del aparato automático de electroforesis capilar, MINICAP, SEBIA.
Se recomienda utilizar agua destilada o desionizada filtrada (con un filtro de porosidad ≤ 0,45 μm) con una conductividad inferior a 3 μS/cm, que
corresponde a una resistividad superior a 0,33 MΩ.cm.
Renueve al agua cada día para evitar contaminaciones microbianas.
Para un funcionamiento óptimo, se recomienda añadir CLEAN PROTECT (SEBIA, referencia n° 2059 : 1 vial de 5 mL) al agua destilada o desionizada
(ver las instrucciones del CLEAN PROTECT) o utilizar directamente la solución CAPIprotect* lista para usar (SEBIA, referencia n° 2061 :
2 contenedores de 5 L de agua destilada con CLEAN PROTECT).
IMPORTANTE: Antes de llenar el contenedor de agua, se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada.
* NOTA : La solución CAPIprotect también puede usarse para diluir la solución de lavado concentrada. En ese caso, la solución de lavado diluida
puede presentar una coloración amarilla transitoria más o menos pronunciada sin ningún efecto adverso en su funcionamiento.
3. CAPICLEAN (PARA MINICAP) O CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING (PARA MINICAP FLEX-PIERCING)

Presentación
El vial de la solución enzimática concentrada CAPICLEAN (CAPICLEAN, SEBIA, referencia n° 2058 : 1 vial de 25 mL ó CAPICLEAN MINICAP FLEX-
PIERCING, SEBIA, referencia n° 2251 : 1 vial de 25 mL) contiene : enzimas proteolíticos, surfactantes y componentes inocuos a las concentraciones
usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo.
Uso
Para la limpieza de la cánula de muestras del aparato automático para electroforesis capilar, MINICAP o MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, durante
el ciclo de limpieza CAPICLEAN.
IMPORTANTE : Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN como mínimo una vez por semana y como máximo una vez al día, o cada 500 análisis
cuando se realicen en menos de una semana.
Ver las instrucciones del CAPICLEAN o del CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA.
IMPORTANTE : Para un uso óptimo del CAPICLEAN en el MINICAP y el MINICAP FLEX-PIERCING, es indispensable utilizar una etiqueta con código
de barras, destinada a identificar el tubo que contenga la solución CAPICLEAN diluida.
El CAPICLEAN debe conservarse en nevera (entre 2 y 8 °C). Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial. NO LO
CONGELE.
Pueden observarse un precipitado o partículas agregadas en suspensión (flóculos) en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea
afectado.
No resuspenda el precipitado o las partículas. Se recomienda pipetear sólo el sobrenadante.
Para un uso diferido, ponga el tubo que contenga la solución diluida en nevera. Debe usarse el mismo día.
4. SOLUCIÓN DE HIPOCLORITO DE SODIO (para la limpieza de la cánula de muestras)

Preparación
Prepare una solución de hipoclorito de sodio (lejía) con un 2 - 3 % de cloro, a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9,6 % de cloro diluida
hasta 1 litro (volumen final) con agua destilada o desionizada fría.
Uso
Para limpiar la cánula de muestras del aparato automático para electroforesis capilar, MINICAP o MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA (mantenimiento
semanal para eliminar cualquier proteína que se haya adsorbido a la cánula).
Ver el manual de instrucciones del MINICAP o MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA.
• Para el MINICAP, dispense 2 mL de solución de hipoclorito de sodio, preparada anteriormente, en un tubo de hemólisis
• Para el MINICAP FLEX-PIERCING, dispense 2 mL de solución de hipoclorito de sodio, preparada anteriormente, en un tubo de 100 mm.
• Ponga el tubo (identificado con una etiqueta con el código de barras específico de la solución de hipoclorito de sodio), en la primera posición
disponible del carrusel del MINICAP o del MINICAP FLEX-PIERCING.
• Compruebe si hay bastantes cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING previsto a tal efecto (en caso
de ausencia de cubetas de reactivo aparece un mensaje de advertencia).
• Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING.
• Cierre las puertas del MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING y el ciclo de limpieza comenzará automáticamente.
IMPORTANTE : Para un uso óptimo de la solución de hipoclorito de sodio en el MINICAP y el MINICAP FLEX-PIERCING, es indispensable utilizar
una etiqueta con código de barras, destinada a identificar el tubo que contenga la solución.
La solución de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de plástico cerrado herméticamente,
protegido de los rayos solares y de cualquier fuente de calor o ignición, y alejado de los ácidos y del amoniaco.
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5. SOLUCIÓN DE LAVADO CAPILLARYS / MINICAP

Preparación
Cada vial de solución de lavado concentrada CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, referencia nº 2052 : 2 viales de 75 mL) debe completarse hasta
750 mL con agua destilada o desionizada.
Para el MINICAP, se recomienda diluir sólo 25 mL de la solución concentrada hasta 250 mL con agua destilada o desionizada.
Después de la dilución, la solución de lavado contiene una solución alcalina pH ≈ 12.
Uso
Para lavar los capilares del MINICAP.
IMPORTANTE : Antes de llenar el contenedor de solución de lavado, se recomienda lavar el cuello del contenedor, el conector y el tubo con agua
destilada o desionizada para evitar la acumulación de sales.
Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la
evaporación. La solución concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial.
La solución diluida es estable durante 3 meses.
Deseche la solución de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminación microbiana.
NOTAS :
Las pruebas realizadas durante la validación de los reactivos muestran que, para las diferentes soluciones y usando material adaptado al volumen a
reconstituir, una variación del volumen final de un ± 5 % no tiene ningún efecto adverso en el análisis.
El agua destilada o desionizada, utilizada para la reconstitución de las soluciones, debe estar exenta de colonias bacterianas y mohos (use un filtro
de porosidad ≤ 0,45 μm) y tener una conductividad inferior a 3 μS/cm, que corresponde a una resistividad superior a 0,33 MΩ.cm.
EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS
1. Sistema de electroforesis capilar MINICAP SEBIA, referencia nº 1230, MINICAP FLEX-PIERCING SEBIA, referencia nº 1232.
2. Carrusel, suministrado con el sistema MINICAP.
3. Contenedores de plástico suministrados con el sistema MINICAP : contenedor para la limpieza de los capilares (debe llenarse con agua destilada
o desionizada) y contenedor de desechos.
4. Cubetas de reactivo desechables MINICAP / 125 (3), SEBIA, referencia n° 2281.
5. Tapas para cubetas desechables de MINICAP usadas (12 ud.), referencia n° 2286 : tapas destinadas a cerrar las cajas para cubetas usadas.
MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
Extracción y conservación de las muestras

El análisis se realiza con sueros frescos. Los sueros deben ser obtenidos según los métodos establecidos de uso en el laboratorio clínico.
Las muestras pueden ser conservadas un máximo de 10 días en nevera (entre 2 y 8 °C).
Para conservaciones prolongadas, congele las muestras a - 18 / - 30 °C rápidamente (como máximo durante las 8 horas siguientes a su obtención).
Los sueros congelados son estables 3 meses.
Las proteínas de las muestras conservadas en nevera o a temperatura ambiente se degradan, en particular el complemento C3, con una cinética de
degradación muy rápida a temperatura ambiente, que es claramente visible pasados 3 días.
Un suero conservado en nevera o a temperatura ambiente presenta una fracción beta-2 que disminuye progresivamente y puede aparecer deformada
(con aparición de pequeños picos adicionales al lado de gamma y / o beta-1 debido a la degradación del complemento C3), y una fracción alfa-2 cuya
forma puede estar ligeramente modificada.
A partir de 10 días en nevera ó 3 días a temperatura ambiente, la fracción beta-1 se deforma ensanchándose, y la fracción beta-2 disminuye
considerablemente.
Según las muestras, durante su conservación por encima de 10 días en nevera ó de 3 días a temperatura ambiente, la superposición automática de
las fracciones realizada por el programa de análisis de los resultados puede verse perturbada potencialmente.
NOTA : Cada laboratorio debe asegurarse de que las muestras sean transportadas en las condiciones óptimas para su integridad (1).
(1) ISO 15189 : Laboratorios clínicos – Exigencias respecto a la calidad y la competencia.

Preparación de las muestras
Use directamente las muestras de suero sin diluir.
Después de conservarlos en nevera (entre 2 y 8 °C) o congelarlos, algunos sueros (especialmente aquellos que contengan una crioglobulina o un
criogel) se vuelven viscosos o turbios. Una vez que hayan alcanzado el estado líquido se pueden analizar directamente.
Igualmente, los sueros que contengan una inmunoglobulina polimerizada pueden usarse directamente, sin ningún tratamiento previo.
Se recomienda observar el aspecto del suero antes del análisis (por si hay hemólisis, presencia de crioglobulinas o turbidez).
Muestras a descartar
• No use muestras de suero antiguas o mal conservadas, ya que las fracciones beta estarían muy modificadas.
• No use muestras de plasma. El fibrinógeno migra en posición beta-2 (pico adicional en beta-2).
NOTA : Los tubos de extracción de muestras biológicas están descritos en la documentación disponible sobre la fase preanalítica de los análisis
clínicos (datos suministrados por los fabricantes de tubos, guías y recomendaciones sobre la obtención de muestras biológicas…). En ausencia de
indicaciones en las instrucciones sobre el tipo de tubo a usar, consulte esta documentación, y para las dimensiones del tubo a usar consulte el
documento de SEBIA "Características de los tubos a usar según el instrumento". La fase preanalítica debe realizarse con la tecnología más avanzada
y siguiendo las diferentes recomendaciones, incluyendo las suministradas por los fabricantes de tubos, cumpliendo la reglamentación aplicable.
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PROCEDIMIENTO
El sistema MINICAP es un instrumento multiparamétrico automático que permite realizar el análisis de las proteínas séricas en 2 capilares en paralelo
con la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, según las etapas siguientes :
• lectura de los códigos de barras de los tubos primarios (hasta 18), de los tubos de los reactivos MINICAP IMMUNOTYPING y del carrusel ;
• dilución de las muestras en las cubetas de reactivo desechables a partir de los tubos primarios ;
• mezcla de los sueros con la solución ELP y con los antisueros de las diferentes especificidades en las cubetas de reactivo ;
• lavado de los capilares ;
• inyección de las muestras diluidas ;
• separación y detección directa de las proteínas en los capilares.
Las etapas manuales son las siguientes :

• colocación de los tubos primarios (destapados) en el carrusel en las posiciones 1 a 18 ;
• colocación del tubo del diluyente de muestras en la posición 27 del carrusel ;
• colocación del soporte con los tubos de solución ELP y antisueros en las posiciones 19 a 24 del carrusel ;
• introducción del carrusel cargado en el sistema MINICAP ;
• recuperación de los tubos después del análisis ;
• recuperación y cierre de las cajas para cubetas usadas.
Un análisis electroforético previo, efectuado en el sistema MINICAP con el kit MINICAP PROTEIN(E) 6, habrá permitido seleccionar las muestras
cuyo perfil proteico presenta un pico anormal mediante un examen visual y el modo de dilución a aplicar a cada una de ellas.
LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP.
I. PREPARACIÓN DEL ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO

1. Seleccione las muestras cuyo perfil proteico obtenido con la técnica MINICAP PROTEIN(E) 6 ha permitido detectar un pico anormal después
del análisis cualitativo.
2. Encienda el MINICAP y el ordenador de control.
3. Para la inicialización del aparato, coloque al menos una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto (en caso
de ausencia de cubetas de reactivo aparecerá un mensaje de advertencia).
4. Abra el programa de gestión Phoresis y valide el nivel de los reactivos y desechos, tras lo cual el aparato se iniciará automáticamente.
5. Para analizar la muestra cuando se sospecha un componente monoclonal en la zona gamma, seleccionar el modo de dilución según la
concentración de inmunoglobulinas de la zona gamma. La dilución será automáticamente aplicada a la muestra.
• "HIPERGAMMA" si la concentración de inmunoglobulinas es superior a 20 g/L (caso de hipergammaglobulinemia),
• "HIPOGAMMA" si la concentración de inmunoglobulinas es inferior a 8 g/L (caso de hipogammaglobulinemia),
• "ESTÁNDAR" en el resto de casos (es el modo de dilución seleccionado por defecto).
6. Para el análisis de los sueros, use el kit MINICAP IMMUNOTYPING con el programa de análisis "IMMUNOTYPING 6" y el tampón de análisis
MINICAP PROTEIN(E) 6. Para seleccionar el programa de análisis "IMMUNOTYPING 6" y conectar el contenedor de tampón MINICAP
PROTEIN(E) 6 en la posición " B1 " del aparato, lea detenidamente el manual de instrucciones del MINICAP y siga las instrucciones que
aparecerán en pantalla.
NOTA : El paso de la técnica MINICAP PROTEIN(E) 6 a la técnica MINICAP IMMUNOTYPING 6 (e inversamente) no requiere cambiar el
contenedor de tampón.
7. Ponga cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP correspondiente (en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecerá un
mensaje de advertencia).
8. Ponga una caja para cubetas usadas nueva en el MINICAP en el lugar previsto a este efecto.
9. Compruebe el nivel de llenado de los diferentes contenedores de reactivo, complete los volúmenes si es necesario, y vacíe el contenedor de
desechos. En la ventana "Verificar el nivel de los contenedores", actualice los niveles de los reactivos mediante los cursores.
10. El carrusel posee 28 posiciones para tubos :
• Ponga hasta 18 tubos primarios en el carrusel (posiciones 1 a 18), destapando cada tubo y de forma que el código de barras de cada tubo
quede orientado hacia la ventana de lectura del mismo. Si se coloca alguna muestra en el carrusel que no forme parte de los sueros
seleccionados previamente, se aplicará el modo de dilución "ESTÁNDAR".
• El soporte con los tubos de solución ELP y los antisueros anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa y anti-Lambda está listo para usar.
Inserte directamente el soporte sobre el carrusel en la posición correspondiente a la solución ELP y los antisueros, manipulándolo por los
dos clips situados en cada extremo y de manera que el código de barras de cada tubo esté orientado hacia su ventana de lectura.
IMPORTANTE : Compruebe que el soporte esté bien fijado al carrusel antes de iniciar el análisis.
• Destape el tubo del diluyente de muestras y colóquelo en la posición 27 (posición "Diluent / Solution"), de manera que el código de barras
del tubo esté orientado hacia su ventana de lectura.
IMPORTANTE : Para un análisis dado, la solución ELP y los antisueros deben ser todos del mismo lote. No mezcle los fondos de tubo de
cada antisuero de la misma especificidad o de la solución ELP con el contenido de otros tubos, aunque sean del mismo lote.
IMPORTANTE : En caso de ausencia de tubos de muestra para analizar, de los tubos de los reactivos en las posiciones nº 19 a 24 (antisueros
y solución ELP) y 27 (diluyente de muestras), el análisis no puede comenzar y aparece un mensaje de advertencia.
11. Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP.
12. Cierre las puertas del MINICAP, tras lo cual el análisis comenzará automáticamente.
13. Al final del análisis, saque el carrusel para extraer los tubos analizados. Saque el soporte con los tubos de la solución ELP y los antisueros
y póngalo en nevera (2 - 8 °C) lo antes posible.
IMPORTANTE : Puede observarse una deformación de los perfiles ELP y de los perfiles de los antisueros entre las zonas alfa-2 y beta-1 en
caso de estancia prolongada de los tubos en el aparato automático.
14. Si es necesario, quite con precaución la caja que contiene las cubetas de reactivo usadas, ciérrela herméticamente usando una de las tapas
suministradas y tírela.
ATENCIÓN : Manipule con precaución las cajas que contengan cubetas de reactivo usadas, ya que pueden contener muestras
biológicas.
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DILUCIÓN - MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS

1. Lectura de los códigos de barras de los tubos primarios de muestra (hasta 18), de los tubos de los reactivos MINICAP IMMUNOTYPING y del
carrusel.
2. Dilución del suero con el diluyente de muestras en una cubeta de reactivo.
3. Aspiración de los 2 primeros reactivos y de la muestra diluida, que se mezclan a continuación en una cubeta de reactivo, con limpieza de la cánula
de muestras entre cada dilución. El modo de dilución previamente seleccionado para esta muestra se aplicará automáticamente. Si no se ha
definido el modo de dilución, se aplicará el modo de dilución "ESTÁNDAR". Por defecto, el orden de los reactivos es el siguiente : solución ELP
y anti-Ig G, anti-Ig A y anti-Ig M, y luego anti-Kappa y anti-Lambda.
4. Lavado de los capilares.
5. Inyección de las muestras diluidas en los capilares.
6. Migración a voltaje constante con temperatura regulada por efecto Peltier, durante unos 4 minutos.
7. Lectura a 200 nm y aparición simultánea de los perfiles proteicos en la pantalla del ordenador.
NOTA : Las etapas 3 a 7 se repiten con los otros reactivos (antisueros anti-Ig A y anti-Ig M, y luego anti-Kappa y anti-Lambda, por defecto).
NOTA : Estas etapas se realizan consecutivamente para los 2 primeros reactivos (solución ELP y anti-Ig G). Para los reactivos siguientes (antisueros
anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa y anti-Lambda), la fase 3 se realiza durante los 2 análisis anteriores. El conjunto de los perfiles correspondientes al
tipado de la muestra se obtiene al cabo de unos 35 minutos.
En la ventana de estado :
- La pestaña "Leyenda" muestra el progreso de los análisis en el carrusel.
- La pestaña "Contador IT" indica el número de análisis realizados y sólo aparece en el modo "tubos tapados". Después de instalar la versión de
programa necesaria, el contador de análisis comienza en cero. Contabiliza el análisis en curso y cualquier análisis realizado o interrumpido (tras
abortar un ciclo de trabajo).
Reinicialice el contador mediante el botón "reset" cuando los viales estén vacíos.
NOTA : Aparecerá una alerta intermitente en la ventana de estado cuando se hayan realizado 60 análisis. Si el contador de análisis no se resetea,
esta alerta persiste sin bloquear los análisis siguientes.
II. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Al acabar el análisis, cada perfil de antisuero (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa y Lambda) se superpone al perfil ELP. En caso de reacción entre la proteína
monoclonal y el antisuero específico, el pico correspondiente desaparece del perfil electroforético del antisuero.
Estas comparaciones permiten identificar y caracterizar el o los componentes monoclonales.
III. FIN DE LA SECUENCIA DE ANÁLISIS

El usuario debe realizar un procedimiento de extinción al final de la sesión de trabajo para conservar los capilares en condiciones óptimas.
IMPORTANTE : Ponga una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP correspondiente (en caso de ausencia de cubetas de reactivo
aparecerá un mensaje de advertencia).
IV. LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO

El aparato automático MINICAP permite una gestión automática de los reactivos.
IMPORTANTE : Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores y respetar el código de colores contenedor-
conector en cada cambio de reactivos.
La aparición de la ventana de gestión de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos :
• colocar un nuevo contenedor de tampón de análisis y/o,
• llenar el contenedor de lavado con la solución de lavado reconstituida y/o,
• llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y/o,
• vaciar el contenedor de desechos.
los capilares). Use exclusivamente agua de calidad ultra pura, como el agua para inyección.
IMPORTANTE : Se recomienda lavar con agua destilada o desionizada en abundancia el contenedor de limpieza antes de llenarlo.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda analizar un suero control (como el Control IT / IF SEBIA, referencia nº 4788) después de cada cambio de lote de uno de los reactivos.
NOTA : Si es necesario, el Suero Control Normal SEBIA, referencia n° 4785, o el Suero Control Hipergamma SEBIA, referencia n° 4787, pueden ser
utilizados como control negativo.
RESULTADOS
Ayuda al análisis de perfiles electroforéticos
1. Perfil de referencia (perfil ELP)

• En primer lugar, se recomienda examinar atentamente el perfil de referencia (perfil ELP) para detectar cualquier anomalía.
• Cuando se detecta una anomalía en el perfil ELP, localizar la posición de migración del (de los) pico(s) en la curva – zona alfa-2, beta,
beta-gamma o gamma. Utilizando el perfil ELP, buscar específicamente las zonas anormales comparando el perfil ELP con cada perfil de
antisuero – G, A, M, kappa y lambda.
• Los picos anormales pueden presentarse en forma de componentes monoclonales, biclonales, triclonales u oligoglonales, de cadenas pesadas,
cadenas ligeras, etc.…
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2. Examinar cada perfil de antisuero comparándolo con el perfil de referencia superpuesto (perfil ELP).
Buscar la desaparición o disminución de un pico anormal.
• Ig G : Las Ig G representan la clase mayoritaria de inmunoglobulinas que se encuentran en el suero y una eliminación normal del fondo
policlonal es observada con frecuencia. Esta disminución normal del fondo policlonal no debe confundirse con un componente monoclonal. Una
Ig G monoclonal se detecta por la desaparición de un pico en comparación con el perfil ELP.
• Ig A : Normalmente, las Ig A están en concentraciones relativamente bajas en comparación con las Ig G. Buscar una ligera disminución en la
zona beta-gamma. El perfil ELP debería reflejar la presencia de Ig A en las muestras normales.
• Ig M : El perfil es similar al obtenido con el antisuero anti-Ig A a excepción de la concentración que es normalmente inferior. Las muestras
normales presentarán una muy pequeña disminución sin modificación de la simetría de la fracción. El perfil ELP debería reflejar la presencia
de Ig M en las muestras normales.
• Kappa : Están normalmente presentes en una proporción de 2 kappas por 1 lambda. Se observa normalmente una disminución de 2/3 de la
fracción gamma. Una eliminación policlonal aparece en forma de una reducción de la fracción sin ninguna modificación de su simetría. Un
componente monoclonal kappa se detecta por la eliminación de un pico con un cambio en la simetría de la fracción, en comparación con el
perfil ELP.
• Lambda : Debido a la relación de 2 kappas por 1 lambda, el perfil lambda de las muestras normales debería presentar una reducción de 1/3
de la fracción gamma. Un componente monoclonal lambda se detecta por la eliminación de un pico con un cambio en la simetría de la fracción,
en comparación con el perfil ELP.
La identificación de un componente monoclonal se obtiene por la observación de la ausencia o desaparición de un pico anormal en los perfiles de
los antisueros correspondientes. Por ejemplo, la eliminación de un pico anormal en el perfil Ig G y en el perfil kappa podría indicar la presencia de un
componente monoclonal Ig G kappa.
Interpretación para el análisis de sueros
Ausencia de proteína monoclonal

• La desaparición de las inmunoglobulinas policlonales en los perfiles de los antisueros (con disminución de las fracciones gamma y beta), sin
desaparición de otros picos proteicos, se observa en el análisis de un suero normal o que presente una hipergammaglobulinemia.
Presencia de una proteína monoclonal

• Una gammapatía (presencia de una inmunoglobulina monoclonal) se caracteriza por la desaparición de un pico con uno de los antisueros anti-
cadenas pesadas (gamma, alfa o mu) y con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras (kappa o lambda). La fracción monoclonal detectada debe
estar situada en la misma posición de migración que la banda detectada en el perfil ELP.
• La desaparición de un pico con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras (kappa o lambda) sin desaparición de ese pico con uno de los antisueros
anti-cadenas pesadas puede significar :
a) la presencia de una gammapatía de Ig D ó Ig E que habrá que confirmar con las técnicas HYDRAGEL IF, SEBIA, con los antisueros anti-cadenas
pesadas delta o épsilon,
b) la presencia de una cadena ligera libre que habrá que confirmar con las técnicas HYDRAGEL BENCE JONES ó HYDRAGEL IF, SEBIA, con los
antisueros específicos anti-cadenas ligeras libres kappa ó lambda.
• La desaparición de un pico con uno de los antisueros anti-cadenas pesadas, sin desaparición del mismo con los antisueros anti-cadenas ligeras
es rara. Habrá que confirmar la presencia de una enfermedad de cadenas pesadas gamma, alfa o mu.
Presencia de varias proteínas monoclonales

• En presencia de varias proteínas monoclonales se aplica la misma interpretación. Estos casos, menos frecuentes, corresponden a la proliferación
de varios clones de células B. Una gammapatía biclonal será detectada por la presencia de dos cadenas pesadas (idénticas o diferentes) y de dos
cadenas ligeras (idénticas o diferentes), es decir, por a desaparición de los 2 picos con uno de los antisueros anti-cadenas pesadas (idénticas o
diferentes) y con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras (idénticas o diferentes).
• La desaparición de varios picos con uno de los antisueros anti-cadenas pesadas y con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras es característica
de una polimerización de las inmunoglobulinas.
Para confirmar la presencia de un solo componente monoclonal en la muestra, será necesario realizar un tratamiento reductor con
ß-mercaptoetanol y repetir el análisis tras el mismo. En este caso, prepare una solución reductora añadiendo un 1 % de ß-mercaptoetanol al Fluidil
(SEBIA, referencia nº 4587, 1 vial de 5 mL). Estando el sistema MINICAP preparado para analizar muestras, añada 100 μL de solución reductora
a 300 μL de suero puro. Agite en el vórtex y deje que incube durante 15 minutos como máximo y luego siga con el procedimiento habitual.
IMPORTANTE : Después del tratamiento reductor con ß-mercaptoetanol, la muestra debe ser analizada inmediatamente ; no debe haber muestras
en espera de análisis en el sistema MINICAP.
Después del tratamiento reductor con ß-mercaptoetanol, la transformación de este perfil bi- o tri-clonal en perfil monoclonal permite concluir que
sólo hay un clon. Por otra parte, hay que tener presente que el tratamiento del suero con ß-mercaptoetanol implica una degradación del
complemento C3 (visualización de grandes deformaciones de la zona beta) y la posible aparición de un pico ancho entre las fracciones alfa-1 y
albúmina.
• La desaparición de varios picos múltiples con uno o varios antisueros anti-cadenas pesadas y con los dos antisueros anti-cadenas ligeras es
característica de un perfil oligoclonal.
Casos especiales :
• En caso de desaparición incompleta de un pico monoclonal en los perfiles de antisueros, repita el análisis diluyendo más el suero. Seleccione el
modo de dilución "ESTÁNDAR" en lugar del modo "HIPOGAMMA" e "HIPERGAMMA" en lugar de "ESTÁNDAR".
• Muestras que contengan una o más proteínas monoclonales de concentración muy elevada (en modo de dilución "HIPERGAMMA") :
En este caso, el complejo formado con los antisueros aparece en forma de un pico ancho y grande entre las fracciones albúmina y alfa-1 ; la
desaparición del (o de los) pico(s) monoclonal(es) puede no ser completa en los perfiles de antisueros.
• Muestras que contengan una o más proteínas monoclonales polimerizadas :
En este caso, el complejo formado con los antisueros puede aparecer en forma de un pico ancho y grande entre las fracciones albúmina y beta-1.
• Caso de proteínas monoclonales migrando fuera de la zona gamma (alfa-2, beta-1 o beta-2) :
En caso de una elevada proteína monoclonal migrando fuera de la zona gamma (alfa-2, beta-1 o beta-2), seleccionar el modo de dilución adaptando
a la concentración total de inmunoglobulinas del perfil electroforético (zona gamma + proteínas monoclonales sospechosas en alfa-2 o beta).
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• Presencia de biclonales
Las biclonales pueden ser debidas a inmunocomplejos o a gammapatías biclonales o, lo que es extremadamente raro, a reacciones cruzadas (ver
Interferencias y limitaciones).
• Desaparición de Ig M en los perfiles de los antisueros Kappa y Lambda :
En caso de sustracción completa de un pico con los antisueros anti-Ig M, anti-cadenas ligeras Kappa y Lambda, se recomienda realizar un
tratamiento reductor de la muestra con beta-mercaptoetanol (ver el párrafo anterior) y repetir el inmunotipado.
• En caso de reacciones múltiples simultáneas con los antisueros anti-cadenas pesadas G, A y M, se recomienda repetir el análisis de la muestra de
suero seleccionando el modo de dilución "OPTIMIZADO".
Interferencias y limitaciones
IMPORTANTE : El uso de antisueros distintos a los específicos de la técnica MINICAP IMMUNOTYPING suministrados con el kit puede afectar a la
calidad de los resultados. Use únicamente los antisueros específicos para la técnica MINICAP IMMUNOTYPING.
• Vea MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS.
• Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no hay
garantías en cuanto a la detección total de todos los componentes monoclonales.
• Numerosos estudios han mostrado que la reacción antígeno - anticuerpo en fase líquida es diferente de la reacción que ocurre en un gel. Las
técnicas de inmunotipado de electroforesis capilar se desarrollan completamente en medio líquido, y puede suceder que algunos antisueros den
lugar a reacciones cruzadas con algunas proteínas monoclonales presentes en la muestra.
No hay ningún riesgo de falsos negativos, es decir, de no detectar una gammapatía.
Se recuerda que según las recomendaciones internacionales (Ludwig et al, 2013), la detección y caracterización de un componente monoclonal
deben ser realizadas en el suero y la orina y completadas con una cuantificación de las cadenas ligeras libres séricas. La coherencia de todos los
análisis debe ser comprobada antes de cualquier conclusión definitiva.
En caso de duda, se recomienda confirmar el resultado con las técnicas de inmunofijación HYDRAGEL o volver a analizar la muestra con la dilución
"OPTIMIZADA" o después de un tratamiento con beta-mercaptoetanol (ver § Casos especiales).
• En ocasiones pueden observarse leves desplazamientos entre el perfil ELP y los perfiles de antisueros superpuestos (especialmente en la zona
beta-1). No deben confundirse con la desaparición de un pico monoclonal en uno o varios perfiles de antisueros.
• Cuando una proteína monoclonal es detectada mediante la técnica MINICAP PROTEIN(E) 6 de análisis de las proteínas en el MINICAP y no es
caracterizada con la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, se recomienda repetir el inmunotipado de la muestra, tratándola previamente con
ß-mercaptoetanol (vea el párrafo anterior) y, si persiste la duda, confirmar el resultado obtenido usando una técnica de inmunofijación en gel de
agarosa.
• En la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, la presencia de una concentración sérica elevada de colesterol (≤ 8,24 mmol/L), triglicéridos
(≤ 11,58 mmol/L) ó hemoglobina (≤ 4,0 g/L) no interfiere en la detección y caracterización de las proteínas monoclonales.
• La interferencia de la bilirrubina en la técnica MINICAP IMMUNOTYPING no ha sido estudiada. Se recomienda observar el aspecto del suero antes
del análisis ; en caso de que se sospeche alguna interferencia, se recomienda repetir el análisis del suero o realizar un análisis complementario
con otra técnica.
Resolución de problemas
Contacte con el Servicio de Asistencia Técnica de SEBIA en caso de que el análisis sea defectuoso.
Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como la información relativa a la limpieza y eliminación de los desechos, a las
reglas de etiquetado y seguridad aplicadas por SEBIA, al embalaje para el transporte de muestras biológicas y a la descontaminación de los
instrumentos están disponibles en el espacio Clientes de la página web de SEBIA : www.sebia.com.
CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS
Reproducibilidad intraserial e interanálisis

Se han analizado tres muestras de suero patológicas con gammapatía monoclonal (Ig GL, Ig AK e Ig MK) y un suero normal en paralelo en 3 sistemas
MINICAP, con la técnica MINICAP IMMUNOTYPING con el modo de dilución "ESTÁNDAR" y con el mismo lote del kit MINICAP IMMUNOTYPING.
Cada suero ha sido analizado 3 veces, simultáneamente en los 2 capilares de cada sistema MINICAP con uno de los 6 reactivos, según la muestra
analizada (solución ELP para la muestra normal, anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa y anti-Lambda para las muestras patológicas, según el tipo
de gammapatía monoclonal).
Todas las muestras analizadas han proporcionado los mismos resultados en los 3 sistemas MINICAP, y los perfiles obtenidos son los característicos
de cada una de las muestras.
En la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, el inmunotipado sólo ha detectado un componente monoclonal en las 3 muestras patológicas y no ha
detectado ningún pico en el suero normal.
Reproducibilidad interanálisis e intersistemas

Se han analizado tres muestras de sueros patológicas con gammapatía monoclonal (Ig GK, Ig GL e Ig MK), que presentan concentraciones de
inmunoglobulinas (Ig) diferentes, con la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, con el modo de dilución "HIPOGAMMA" para el suero cuya
concentración de Ig era < a 8 g/L, con el modo de dilución "ESTÁNDAR" para el suero cuya concentración de Ig estaba comprendida entre 8 y 20 g/L,
y con el modo de dilución "HIPERGAMMA" para el suero cuya concentración de Ig era > a 20 g/L. Este análisis ha sido repetido 3 veces
sucesivamente en cada uno de los 3 sistemas MINICAP y con el mismo lote del kit MINICAP IMMUNOTYPING.
Cada muestra analizada ha proporcionado los mismos resultados en el conjunto de los análisis realizados en los 3 sistemas MINICAP, y los perfiles
obtenidos son característicos de cada una de las muestras. Usando la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, el inmunotipado ha detectado los picos
monoclonales esperados en cada una de las muestras.
Reproducibilidad interanálisis e interlotes

Dos muestras de suero patológicas con una gammapatía monoclonal Ig GK e Ig MK y una muestra con una gammapatía biclonal Ig AL, con
concentraciones de inmunoglobulinas comprendidas entre 8 y 20 g/L, se han analizado 3 veces sucesivamente usando la técnica MINICAP
IMMUNOTYPING con tres lotes del kit MINICAP IMMUNOTYPING, con el modo de dilución "ESTÁNDAR".
Cada muestra analizada ha proporcionado los mismos resultados en el conjunto de los análisis realizados con los 3 lotes del kit MINICAP
IMMUNOTYPING, y los perfiles obtenidos son los característicos de cada una de las muestras. Usando la técnica MINICAP IMMUNOTYPING, el
inmunotipado ha detectado los picos monoclonales esperados en cada una de las 3 muestras.
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Exactitud
Se han analizado 69 muestras de suero (57 muestras patológicas diferentes y 12 sueros normales) en paralelo, usando la técnica MINICAP
IMMUNOTYPING y otro sistema comercial de inmunotipado por electroforesis capilar.
Los resultados obtenidos han mostrado una correlación perfecta entre los dos sistemas de análisis en todas las muestras analizadas, con una
sensibilidad del 100 % y una especificidad del 100 % respecto a la técnica de referencia, calculadas según el método recomendado (Wendling, 1986) :
• En los 12 sueros normales : correlación perfecta,
• En los 57 sueros patológicos : correlación perfecta.
Sensibilidad
Se han diluido serialmente tres sueros con gammapatía monoclonal en un suero normal, y se han analizado con la técnica MINICAP
IMMUNOTYPING.
Los resultados obtenidos se indican en la tabla siguiente.
BANDA MONOCLONAL
MUESTRA Nº CONCENTRACIÓN (g/L) LÍMITE DE DETECCIÓN (g/L)
TIPO
Ig A, L Alfa 27,0 0,25
1
Lambda 0,25
Ig G, K Gamma 29,0 0,25
2
Kappa 0,25
Ig M, K Mu 17,0 0,25
3
Kappa 0,25
El límite de detección de un pico monoclonal es por tanto del orden de 0,25 g/L.
NOTA : El límite de detección de un pico monoclonal puede variar en función de la posición del pico monoclonal y del fondo policlonal de la zona de
las gamma y beta globulinas.
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ANÁLISIS DE ORINAS : TÉCNICA MINICAP IMMUNOTYPING URINE
REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, referencia N° 2203)

Ver las instrucciones del kit.
2. KIT CAPILLARYS / MINICAP URINE (SEBIA, referencia N° 2013)

Ver las instrucciones del kit.
Uso
Para preparar las muestras de orina para el análisis de las proteínas urinarias humanas mediante electroforesis capilar en el sistema automático
MINICAP.
3. AGUA DESTILADA O DESIONIZADA

Uso
Para lavar los capilares del sistema automático para electroforesis capilar, MINICAP, SEBIA.
Se recomienda utilizar agua destilada o desionizada filtrada (con un filtro de porosidad ≤ 0,45 μm) con una conductividad inferior a 3 μS/cm, que
corresponde a una resistividad superior a 0,33 MΩ.cm.
Renueve el agua cada día para evitar contaminaciones microbianas.
Para un funcionamiento óptimo, se recomienda añadir CLEAN PROTECT (SEBIA, referencia n° 2059 : 1 vial de 5 mL) al agua destilada o desionizada
(ver las instrucciones del CLEAN PROTECT) o utilizar directamente la solución CAPIprotect* lista para usar (SEBIA, referencia n° 2061 :
2 contenedores de 5 L de agua destilada con CLEAN PROTECT).
IMPORTANTE: Antes de llenar el contenedor de agua, se recomienda lavarlo con agua destilada o desionizada.
* NOTA : La solución CAPIprotect también puede usarse para diluir la solución de lavado concentrada. En ese caso, la solución de lavado diluida
puede presentar una coloración amarilla transitoria más o menos pronunciada sin ningún efecto adverso en su funcionamiento.
4. CAPICLEAN (PARA MINICAP) O CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING (PARA MINICAP FLEX-PIERCING)

Presentación
El vial de la solución enzimática concentrada CAPICLEAN (CAPICLEAN, SEBIA, referencia n° 2058 : 1 vial de 25 mL ó CAPICLEAN MINICAP FLEX-
PIERCING, SEBIA, referencia n° 2251 : 1 vial de 25 mL) contiene : enzimas proteolíticos, surfactantes y componentes inocuos a las concentraciones
usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo.
Uso
Para la limpieza de la cánula de muestras del aparato automático para electroforesis capilar, MINICAP o MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, durante
el ciclo de limpieza CAPICLEAN.
IMPORTANTE : Realice un ciclo de limpieza con CAPICLEAN como mínimo una vez por semana y como máximo una vez al día, o cada 500 análisis
cuando se realicen en menos de una semana.
Ver las instrucciones del CAPICLEAN o del CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA.
IMPORTANTE : Para un uso óptimo del CAPICLEAN en el MINICAP y el MINICAP FLEX-PIERCING, es indispensable utilizar una etiqueta con código
de barras, destinada a identificar el tubo que contenga la solución CAPICLEAN diluida.
El CAPICLEAN debe conservarse en nevera (entre 2 y 8 °C). Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial. NO LO
CONGELE.
Pueden observarse un precipitado o partículas agregadas en suspensión (flóculos) en el vial del CAPICLEAN sin que su funcionamiento se vea
afectado.
No resuspenda el precipitado o las partículas. Se recomienda pipetear sólo el sobrenadante.
Para un uso diferido, ponga el tubo que contenga la solución diluida en nevera. Debe usarse el mismo día.
5. SOLUCIÓN DE HIPOCLORITO DE SODIO (para la limpieza de la cánula de muestras)

Preparación
Prepare una solución de hipoclorito de sodio (lejía) con un 2 - 3 % de cloro, a partir de una dosis concentrada de 250 mL con un 9,6 % de cloro diluida
hasta 1 litro (volumen final) con agua destilada o desionizada fría.
Uso
Para limpiar la cánula de muestras del aparato automático para electroforesis capilar, MINICAP o MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA (mantenimiento
semanal para eliminar cualquier proteína que se haya adsorbido a la cánula).
Ver el manual de instrucciones del MINICAP o MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA.
• Para el MINICAP, dispense 2 mL de solución de hipoclorito de sodio, preparada anteriormente, en un tubo de hemólisis
• Para el MINICAP FLEX-PIERCING, dispense 2 mL de solución de hipoclorito de sodio, preparada anteriormente, en un tubo de 100 mm.
• Ponga el tubo (identificado con una etiqueta con el código de barras específico de la solución de hipoclorito de sodio), en la primera posición
disponible del carrusel del MINICAP o del MINICAP FLEX-PIERCING.
• Compruebe si hay bastantes cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING previsto a tal efecto (en caso
de ausencia de cubetas de reactivo aparece un mensaje de advertencia).
• Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING.
• Cierre las puertas del MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING y el ciclo de limpieza comenzará automáticamente.
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IMPORTANTE : Para un uso óptimo de la solución de hipoclorito de sodio en el MINICAP y el MINICAP FLEX-PIERCING, es indispensable utilizar
una etiqueta con código de barras, destinada a identificar el tubo que contenga la solución.
La solución de hipoclorito de sodio diluida puede conservarse 3 meses a temperatura ambiente en un recipiente de plástico cerrado herméticamente,
protegido de los rayos solares y de cualquier fuente de calor o ignición, y alejado de los ácidos y del amoniaco.
6. SOLUCIÓN DE LAVADO CAPILLARYS / MINICAP

Preparación
Cada vial de solución de lavado concentrada CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, referencia n° 2052 : 2 viales de 75 mL) debe completarse hasta
750 mL con agua destilada o desionizada.
Para el MINICAP, se recomienda diluir sólo 25 mL de la solución concentrada hasta 250 mL con agua destilada o desionizada.
Después de la dilución, la solución de lavado contiene una solución alcalina pH ≈ 12.
Uso
Para el lavado de los capilares del MINICAP.
IMPORTANTE : Antes de llenar el contenedor de solución de lavado, se recomienda lavar el cuello del contenedor, el conector y el tubo con agua
destilada o desionizada para evitar la acumulación de sales.
Las soluciones de lavado concentrada y diluida deben conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados para evitar la
evaporación. La solución concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial.
La solución diluida es estable durante 3 meses.
Deseche la solución de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminación microbiana.
NOTAS:
Las pruebas realizadas durante la validación de los reactivos muestran que, para las diferentes soluciones y utilizando material adaptado al volumen
a reconstituir, una variación del volumen final de un ± 5 % no tiene ningún efecto adverso en el análisis.
El agua destilada o desionizada, utilizada para la reconstitución de las soluciones, debe estar exenta de colonias bacterianas y mohos (use un filtro
de porosidad ≤ 0,45 μm) y tener una conductividad inferior a 3 μS/cm, que corresponde a una resistividad superior a 0,33 MΩ.cm.
EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS
1. Sistema de electroforesis capilar MINICAP SEBIA, referencia nº 1230, MINICAP FLEX-PIERCING SEBIA, referencia nº 1232.
2. Carrusel, suministrado con el sistema MINICAP.
3. Contenedores de plástico suministrados con el sistema MINICAP : contenedor para la limpieza de los capilares (debe llenarse con agua destilada
o desionizada) y contenedor de desechos.
4. Cubetas de reactivo desechables MINICAP / 125 (3), SEBIA, referencia n° 2281.
5. Tapas para cubetas de reactivo desechables MINICAP usadas (12 unidades), referencia n° 2286 : tapas destinadas a cerrar las cajas para
cubetas usadas.
6. Tubos de hemólisis de 75 mm de altura y 13 mm de diámetro.
MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
Extracción y conservación de las muestras

El análisis se realiza preferentemente con orinas frescas de 24 horas. Las orinas deben ser obtenidas según los métodos establecidos de uso en el
laboratorio clínico.
Las muestras de orina pueden conservarse una semana en nevera (entre 2 y 8 °C).
Para conservaciones prolongadas, se recomienda congelar las muestras a - 70 / - 80 °C ; las muestras congeladas son estables un mínimo de 1 mes.
IMPORTANTE : No congele las muestras a - 18 / - 30 °C.
Las muestras degradadas o descongeladas pueden presentar fracciones deformadas con aparición de pequeños picos adicionales debido a la
degradación de las proteínas.
NOTA : No conserve las muestras de orina a temperatura ambiente.
Preparación de las muestras
Prepare previamente las muestras de orina según el protocolo de preparación (diálisis y concentración) indicado en las instrucciones del kit
CAPILLARYS / MINICAP URINE (ver el párrafo "Reactivos necesarios no suministrados"). Utilice directamente estas muestras de orina preparadas.
IMPORTANTE : La técnica de análisis de las orinas mediante electroforesis capilar requiere la diálisis y concentración de las muestras con sistemas
de diálisis SEBIA (tubos de 20 mL). Utilice un tubo por muestra. La muestra dializada y concentrada de esta manera puede ser analizada a
continuación con las técnicas MINICAP URINE y MINICAP IMMUNOTYPING URINE.
Las muestras deben ser analizadas como mucho el día siguiente a su preparación. Para limitar la adsorción de las proteínas urinarias en la membrana
del dispositivo de diálisis y concentración (sistema de diálisis), se recomienda no conservar la muestra en el sistema de diálisis después de la
centrifugación, sino en un microtubo conservado en nevera (entre 2 y 8 °C).
Muestras a descartar
• No use muestras de orina antiguas o mal conservadas, ya que las fracciones estarían muy modificadas debido a la degradación de las proteínas
urinarias.
• Se recomienda observar el aspecto de la orina después de la primera centrifugación (por si hay hemólisis o turbidez).
• No use una muestra que haya sido conservada en un dispositivo de diálisis y concentración, ya que algunas proteínas podrían haberse adsorbido
a la membrana.
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NOTA : Los tubos de extracción y los parámetros de centrifugación de muestras biológicas están descritos en la documentación disponible sobre la
fase preanalítica de los análisis clínicos (datos suministrados por los fabricantes de tubos, guías y recomendaciones sobre la recogida de muestras
biológicas…). En ausencia de indicaciones en las instrucciones sobre el tipo de tubo a utilizar o sobre la centrifugación, consulte esta documentación,
y para saber las dimensiones del tubo a usar, consulte el documento de SEBIA "Características de los tubos a usar según el instrumento". La fase
preanalítica debe realizarse con la tecnología más avanzada y siguiendo las diferentes recomendaciones, incluyendo las suministradas por los
fabricantes de tubos, cumpliendo la reglamentación aplicable.
PROCEDIMIENTO
El sistema MINICAP es un instrumento multiparamétrico automático que permite realizar el análisis de las proteínas urinarias en 2 capilares en
paralelo con la técnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE según las etapas siguientes :
• lectura de los códigos de barras de las muestras de orina a analizar (hasta 18), de los tubos de los reactivos MINICAP IMMUNOTYPING y del
carrusel ;
• dilución de las muestras en las cubetas de reactivo ;
• mezcla de las orinas con la solución ELP y con los antisueros de las diferentes especificidades en las cubetas de reactivo ;
• lavado de los capilares ;
• inyección de las muestras diluidas ;
• separación y detección directa de las proteínas en los capilares.
Las etapas manuales son las siguientes :

• colocación de los microtubos (sin tapones) que contienen las muestras a analizar en los tubos de hemólisis que les servirán de soporte en el
carrusel, en las posiciones 1 a 18 ; cada tubo debe estar identificado con el código de barras de identificación específico correspondiente a la
muestra a analizar ;
• colocación del tubo del diluyente de muestras en la posición 27 del Carrusel ;
• colocación del soporte que contiene los tubos de la solución ELP y los antisueros en las posiciones 19 a 24 del carrusel ;
• introducción en el sistema MINICAP ;
• recuperación de los tubos después del Análisis ;
• recuperación y cierre de las cajas para cubetas usadas.
Un análisis electroforético previo, efectuado en el sistema MINICAP con la técnica MINICAP URINE, habrá permitido seleccionar las muestras cuyo
perfil electroforético presente un pico anormal mediante un examen visual.
I. PREPARACIÓN DEL ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO

1. Seleccione las muestras cuyo perfil proteico obtenido con la técnica MINICAP URINE haya permitido detectar un pico anormal después de
un análisis cualitativo.
2. Encienda el MINICAP y el ordenador de control.
3. Para la inicialización del aparato, coloque al menos una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto (en caso
de ausencia de cubetas de reactivo aparecerá un mensaje de advertencia).
4. Abra el programa de gestión Phoresis y valide el nivel de los reactivos y desechos, tras lo cual el aparato se iniciará automáticamente.
5. Para cada muestra, en el perfil proteico obtenido con el programa de análisis "URINE", determine el valor del "ratio orina" del pico anormal a
caracterizar (ver el párrafo "Análisis de los resultados" de las instrucciones del kit CAPILLARYS / MINICAP URINE). El "ratio orina" está
definido por la proporción de la superficie del pico anormal respecto a la superficie total de las proteínas del Suero Control Normal.
6. Seleccione el modo de dilución que se aplicará automáticamente según el valor del "ratio orina" :
• "HIPOGAMMA" si el valor del "ratio orina" es inferior a 0,55,
• "ESTÁNDAR" si el valor del "ratio orina" está comprendido entre 0,55 y 1,55,
• "HIPERGAMMA" si el valor del "ratio orina" es superior a 1,55.
NOTA : Cuando el "ratio orina" está situado a un ± 10 % de uno de los valores límite (0,55 ó 1,55), se recomienda seleccionar el modo de
dilución en función del pico proteico anormal a caracterizar con la técnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE:
- para mejorar la sensibilidad de detección de un pico de intensidad débil, diluya menos la muestra seleccionando el modo de dilución
"HIPOGAMMA" en lugar del "ESTÁNDAR", o el "ESTÁNDAR" en lugar del "HIPERGAMMA",
- para mejorar el inmunotipado de un pico de intensidad elevada, aumente la dilución de la muestra seleccionando el modo de dilución
"ESTÁNDAR" en lugar del modo "HIPOGAMMA", o el "HIPERGAMMA" en lugar del "ESTANDAR".
7. Para el análisis de las orinas, utilice el kit MINICAP IMMUNOTYPING con el programa de análisis "IMMUNOTYPING URINE" y el tampón de
análisis MINICAP PROTEIN(E) 6. Para saber cómo seleccionar el programa de análisis "IMMUNOTYPING URINE" y conectar el contenedor
de tampón MINICAP PROTEIN(E) 6 en la posición "B1" del aparato, lea detenidamente el manual de instrucciones del MINICAP y siga las
instrucciones que aparecerán en pantalla.
NOTA : El paso de la técnica MINICAP URINE a la técnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE (e inversamente) no requiere cambiar el
contenedor de tampón.
8. Ponga cubetas de reactivo nuevas en el cargador del MINICAP previsto a tal efecto (en caso de ausencia de cubetas de reactivo aparecerá
un mensaje de advertencia).
9. Ponga una caja nueva para cubetas usadas en el MINICAP en el lugar previsto a este efecto.
10. Compruebe el nivel de llenado de los diferentes contenedores de reactivo, complete los volúmenes si es necesario, y vacíe el contenedor de
desechos. En la ventana "Verificar el nivel de los contenedores", actualice los niveles de los reactivos mediante los cursores.
11. El carrusel posee 28 posiciones para tubos :
• Ponga hasta 18 tubos de hemólisis vacíos (que servirán de soporte para los microtubos), identificados con las etiquetas con los códigos
de barras de cada paciente, en el carrusel (posiciones 1 a 18), y luego los microtubos que contengan las muestras dializadas, cortando
antes el tapón de cada microtubo y de forma que el código de barras de cada tubo quede orientado hacia la ventana de lectura. En caso
de que no se haya seleccionado previamente el modo de dilución de una muestra colocada en el carrusel, se aplicará el modo de dilución
"HIPOGAMMA".
- 95 -
• Conserve el tapón de cada microtubo para la conservación posterior de las muestra, si es necesario.
IMPORTANTE : Se recomienda identificar los tubos de hemólisis que servirán de soporte a los microtubos que contengan las muestras a
analizar con las etiquetas con código de barras de identificación correspondientes a las muestras.
• El soporte que contiene los tubos de la solución ELP y de los antisueros anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa y anti-Lambda está listo
para usar. Inserte directamente el soporte sobre el carrusel en la posición correspondiente a la solución ELP y los antisueros, manipulándolo
por los dos clips situados en cada extremo y de manera que el código de barras de cada tubo esté orientado hacia la ventana de lectura.
IMPORTANTE : Compruebe que el soporte esté bien fijado al carrusel antes de iniciar el análisis.
• Destape el tubo del diluyente de muestras y colóquelo en la posición 27 (posición «Diluent / Solution»), de manera que el código de barras
del tubo esté orientado hacia la ventana de lectura.
IMPORTANTE : Para un análisis dado, la solución ELP y los antisueros deben ser todos del mismo lote. No mezcle los restos de cada
antisuero de la misma especificidad o de la solución ELP con el contenido de otros tubos, aunque sean del mismo lote.
IMPORTANTE : En caso de ausencia de tubos de muestra a analizar, de los tubos de los reactivos en las posiciones nº 19 a 24 (antisueros
y solución ELP) y 27 (diluyente de muestras), el análisis no puede comenzar y aparece un mensaje de advertencia.
12. Introduzca el carrusel en el sistema MINICAP.
13. Cierre las puertas del MINICAP y siga las instrucciones que aparecerán en pantalla.
14. Al final del análisis, saque el carrusel para extraer los tubos analizados. Saque el soporte con los tubos de la solución ELP y los antisueros
y póngalo en nevera lo antes posible.
IMPORTANTE : Puede observarse una deformación de los perfiles ELP y de los perfiles de los antisueros entre las zonas alfa-2 y beta-1 si
los tubos permanecen en el aparato durante un tiempo prolongado.
15. Si es necesario, saque con precaución la caja que contiene las cubetas de reactivo usadas, ciérrela herméticamente con una de las tapas
suministradas y tírela.
ATENCIÓN : Manipule con precaución las cajas que contengan cubetas de reactivo usadas, ya que pueden contener muestras
biológicas.
DILUCIÓN - MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS

1. Lectura de los códigos de barras de las muestras de orina a analizar (hasta 18), de los tubos de los reactivos MINICAP IMMUNOTYPING y del
carrusel.
2. Dilución de la orina dializada con el diluyente de muestras en una cubeta de reactivo.
3. Aspiración de los 2 primeros reactivos y de la muestra diluida, que se mezclan a continuación en una cubeta de reactivo, con limpieza de la cánula
de muestras entre cada dilución. El modo de dilución seleccionado previamente para la muestra será aplicado automáticamente. Si no se ha
definido el modo de dilución, se aplicará el modo de dilución "HIPOGAMMA". Por defecto, el orden de los reactivos es el siguiente : solución ELP
y anti-Ig G, anti-Ig A y anti-Ig M, y luego anti-Kappa y anti-Lambda.
4. Lavado de los capilares.
5. Inyección de las muestras diluidas en los capilares.
6. Migración a voltaje constante con temperatura regulada por efecto Peltier, durante unos 4 minutos.
7. Lectura a 200 nm y aparición simultánea de los perfiles proteicos en la pantalla del ordenador.
NOTA : Las etapas 3 a 7 se repiten con los otros reactivos (antisueros anti-Ig A y anti-Ig M, y luego anti-Kappa y anti-Lambda, por defecto).
NOTA : Estas etapas se realizan consecutivamente para los 2 primeros reactivos (solución ELP y anti-Ig G). Para los reactivos siguientes (antisueros
anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa y anti-Lambda), la fase 3 se realiza durante los 2 análisis anteriores. El conjunto de los perfiles correspondientes al
tipado de la muestra se obtiene al cabo de unos 35 minutos.
En la ventana de estado :
- La pestaña "Leyenda" muestra el progreso de los análisis en el carrusel.
- La pestaña "Contador IT" indica el número de análisis efectuados y sólo aparece en el modo "tubos tapados". Después de instalar la versión de
programa necesaria, el contador de análisis comienza en cero. Contabiliza el análisis en curso y cualquier análisis realizado o interrumpido (tras
abortar un ciclo de trabajo).
Reinicialice el contador mediante el botón "reset" cuando los viales estén vacíos.
NOTA : Aparecerá una alerta intermitente en la ventana de estado cuando se hayan realizado 60 análisis. Si el contador de análisis no se resetea,
esta alerta persiste sin bloquear los análisis siguientes.
II. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Al acabar el análisis, cada perfil de antisuero (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa y Lambda) se superpone al perfil ELP. En caso de reacción entre la proteína
monoclonal y el antisuero específico, el pico correspondiente desaparece del perfil electroforético del antisuero.
Estas comparaciones permiten identificar y caracterizar el o los componentes monoclonales.
Para el análisis de orinas, las posiciones de las diferentes zonas proteicas (Albúmina, Alfa 1, Alfa 2, Beta y Gamma) aparecen en la ventana de edición
y en el informe de resultados.
III. FIN DE LA SECUENCIA DE ANÁLISIS

El usuario debe realizar un procedimiento de extinción al final de la sesión de trabajo para conservar los capilares en condiciones óptimas.
IMPORTANTE : Ponga una cubeta de reactivo nueva en el cargador del MINICAP correspondiente (en caso de ausencia de cubetas de reactivo
aparecerá un mensaje de advertencia).
IV. LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO

El aparato automático MINICAP permite una gestión automática de los reactivos.
IMPORTANTE : Es necesario seguir el procedimiento previsto para el cambio de los contenedores y respetar el código de colores contenedor –
conector en cada cambio de reactivos.
- 96 -
La aparición de la ventana de gestión de los reactivos indica que es necesario cambiar uno o varios reactivos :
• colocar un nuevo contenedor de tampón de análisis y/o,
• llenar el contenedor de lavado con la solución de lavado reconstituida y/o,
• llenar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada filtrada y/o,
• vaciar el contenedor de desechos.
los capilares). Utilice exclusivamente agua de calidad ultra pura, como el agua para inyección.
IMPORTANTE : Se recomienda lavar el contenedor de limpieza con agua destilada o desionizada en abundancia antes de llenarlo.
RESULTADOS
Interpretación del análisis de orinas
Ausencia de proteína monoclonal

• La desaparición de las inmunoglobulinas policlonales en los perfiles de los antisueros (con disminución de las fracciones gamma y beta), sin
desaparición de otros picos proteicos, se observa en el análisis de una orina que presente una proteinuria glomerular o mixta con paso de
inmunoglobulinas policlonales.
Presencia de una proteína monoclonal

• La presencia de una inmunoglobulina monoclonal completa se caracteriza por la desaparición de un pico con uno de los antisueros anti-cadenas
pesadas (gamma, alfa o mu) y con uno de los anti-cadenas ligeras (kappa o lambda). La fracción monoclonal detectada debe estar situada en la
misma posición de migración que la banda detectada en el perfil ELP.
• La desaparición de un pico con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras (kappa o lambda) sin desaparición de ese pico con uno de los anti-
cadenas pesadas puede significar la presencia de una cadena ligera libre, que deberá ser confirmada con las técnicas HYDRAGEL BENCE JONES
ó HYDRAGEL IF, SEBIA, con los antisueros específicos anti-cadenas ligeras libres kappa o lambda.
• La desaparición de un pico con uno de los antisueros anti-cadenas pesadas, sin desaparición del mismo con los anti-cadenas ligeras es rara.
Deberá confirmarse la presencia de una cadena pesada gamma, alfa o mu.
Presencia de varias proteínas monoclonales

• La desaparición de varios picos con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras puede observarse en caso de polimerización de las cadenas ligeras
libres.
Casos especiales :
• En caso de desaparición incompleta de un pico monoclonal en los perfiles de los antisueros, repita el análisis diluyendo más la orina. Seleccione
el modo de dilución "ESTÁNDAR" en lugar del modo "HIPOGAMMA", o el "HIPERGAMMA" en lugar del "ESTÁNDAR".
• Muestras que contienen una o más proteínas monoclonales de concentración muy elevada (con el modo de dilución "HIPERGAMMA") : en este
caso, el complejo formado con los antisueros aparece en forma de un pico ancho y grande en las zonas albúmina y alfa-1; la desaparición del o
de los picos monoclonales puede no ser completa en los perfiles de los antisueros.
• La desaparición de 2 picos con uno de los antisueros anti-cadenas ligeras, y de un solo pico con uno de los antisueros anti-cadenas pesadas, es
debida a la presencia de una inmunoglobulina completa asociada a una cadena ligera libre.
• Se recomienda seleccionar el modo de dilución en función de la intensidad del pico proteico anormal a caracterizar, para mejorar la sensibilidad de
detección de un pico de intensidad débil o el inmunotipado de un pico de intensidad elevada (ver el párrafo "Preparación del análisis
electroforético").
Interferencias y limitaciones
IMPORTANTE : La utilización de antisueros distintos a los específicos de la técnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE suministrados con el kit puede
afectar a la calidad de los resultados. Use únicamente los antisueros específicos para la técnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE.
• Ver MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS.
• Analice únicamente muestras preparadas con los dispositivos de diálisis y concentración, como los sistemas de diálisis SEBIA o cualquier sistema
de funcionamiento equivalente homologado para su uso en diagnóstico clínico.
• Una diálisis insuficiente de la muestra puede provocar la aparición de picos residuales no proteicos (medicamentos o sales, por ejemplo). En caso
de sospechar una interferencia, se recomienda realizar una diálisis adicional de la muestra.
• La hemoglobina migra en la posición de la transferrina (fracción beta) cuando está presente en la orina. Por tanto, se recomienda observar el
aspecto de la orina después de la primera centrifugación (presencia de glóbulos rojos en la orina y / o caso de muestra hemolizada).
• Numerosos estudios han mostrado que la reacción antígeno - anticuerpo en fase líquida es diferente de la reacción que ocurre en un gel. Las
técnicas de inmunotipado de electroforesis capilar se desarrollan completamente en medio líquido, y puede suceder que algunos antisueros den
lugar a reacciones cruzadas con algunas proteínas monoclonales presentes en la muestra.
No hay ningún riesgo de falsos negativos, es decir, de no detectar una gammapatía.
Se recuerda que según las recomendaciones internacionales (Ludwig et al, 2013), la detección y caracterización de un componente monoclonal
deben ser realizadas en el suero y la orina y completadas con una cuantificación de las cadenas ligeras libres séricas. La coherencia de todos los
análisis debe ser comprobada antes de cualquier conclusión definitiva.
En caso de duda, se recomienda confirmar este resultado con las técnicas de inmunofijación HYDRAGEL BENCE JONES.
• En ocasiones pueden observarse leves desplazamientos entre el perfil ELP y los perfiles de antisueros superpuestos (especialmente en la zona
beta-1). No deben confundirse con la desaparición de un pico monoclonal en uno o varios perfiles de antisueros.
• Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no hay
garantías en cuanto a la detección total de todos los componentes monoclonales.
- 97 -
Resolución de problemas
Contacte con el Servicio de Asistencia Técnica de SEBIA en caso de que el análisis sea defectuoso.
Las fichas de datos de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como la información relativa a la limpieza y eliminación de los desechos, a las
reglas de etiquetado y seguridad aplicadas por SEBIA, al embalaje para el transporte de muestras biológicas y a la descontaminación de los
instrumentos están disponibles en el espacio Clientes de la página web de SEBIA : www.sebia.com.
CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS
Exactitud
Se han analizado en paralelo treinta y nueve (39) muestras de orina patológicas diferentes (con paraproteínas o con cadenas ligeras libres Kappa o
Lambda), 2 muestras con perfil policlonal y 5 muestras normales con la técnica MINICAP IMMUNOTYPING URINE y con otro sistema comercial de
inmunotipado mediante electroforesis capilar para la detección de paraproteínas y cadenas ligeras libres (técnica usada como referencia).
Los resultados obtenidos han mostrado una correlación perfecta entre los dos sistemas de análisis en todas las muestras analizadas, con una
sensibilidad del 100 % y una especificidad del 100 % respecto a la técnica usada como referencia, calculadas según el método recomendado
(Wendling, 1986) :
En las 5 muestras de orina normales : correlación perfecta.
En las 2 muestras de orina con perfil policlonal : correlación perfecta.
En las 39 muestras patológicas : correlación perfecta.
Por tanto, la presencia de paraproteínas o de cadenas ligeras libres ha sido detectada en todas las muestras patológicas en los dos sistemas de
análisis.
- 98 -
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY
1. Cameron JS. 1987. The nephrotic syndrome. Am J Kidney Dis, 10 : 157-171.

2. Chopin N. 1991. Étude de la protéinurie. Inf Tech Biol, 1 : 23-28.
3. Clark R et al. Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins : qualitative comparison with high-throughput agarose gel
electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, 205 - 213 (1996).
4. Gay-Bellile C, Bengoufa D, Houze P, Le Carrer D, Benlakehal M, Bousquet B, Gourmel B, Le Bricon T. Automated multicapillary electrophoresis
for analysis of human serum proteins. Clin. Chem., 49, 1909 - 1915 (2003).
5. Guis, L. A. Chaumier, Le Gall V., Havrez S. (Février 2013) Intégration du Capillarys 2 Flex Piercing (Sebia) dans un laboratoire de biologie
médicale spécialisée. Revue Francophone des Laboratoires, 449, 47 – 56.
6. Henskens Y et al. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis. Clin. Chem., 44, 1184 - 1190 (1998).
7. Jellum E et al. Journal of Chromatography Biomedical Applications : Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J.
Chromatogr. B, 689, 155 - 164 (1997).
8. Jenkins MA and Guerin MD. Journal of Chromatography Biomedical Applications : Capillary electophoresis procedures for serum protein analysis :
comparison with established techniques. J. Chromatogr. B, 699, 257 - 268 (1997).
9. Joachim GR, Cameron JS, Chwartz M, Belker EL. 1964. Selectivity of protein excretion in patients with the nephrotic syndrome. J Clin Invest, 43,
2332-2346.
10. Katzmann JA et al. Identification of monoclonal proteins in serum : A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillary
electrophoresis. Electrophoresis, 18, 1775 - 1780 (1997).
11. Keren DF. Detection and characterization of monoclonal components in serum and urine. Clin. Chem., 44, 6, 1143 – 1145 (1998).
12. Kyle RA, Robinson RA, Katzmann JA. The clinical aspects of biclonal gammopathies. Review of 57 cases. Am. J. Med.; 71, 6, 999 - 1008 (1981).
13. Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495 - 509 (1995).
14. Le Bricon T. 2002. Identification et dosage des proteines urinaires au laboratoire d’analyses. Ann Biol Clin, 60 : 525-540.
15. Le Carrer D. 1990. Protéinuries : Mise au point sur leur exploration biologique en 1990. L’Eurobiologiste, 190 : 395-405.
16. Le Carrer D, Nicolas A, Ducasse L. 1992. L’analyse des protéinuries au laboratoire de biologie en 1992. Revue française des laboratoires, 225 :
41-47.
17. Le Carrer D, Chopin N. 1994. Profil protéique urinaire : Proposition d’un protocole d’exploration biologique des protéinuries. Revue française des
laboratoires, 269 : 29-37.
18. Ludwig et al (2013). International Myeloma Working Group recommendations for global myeloma care. Leukemia (2013),
https:doi:10.1038/leu.2013.293.
19. Philipon C. 1989. Protéines urinaires : Intérêt clinique et interprétation. Technique et Biologie, 6 : 239-249.
20. Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715 -
1723 (1997).
21. Waller KV, Ward KM, Mahan JD, Wismatt DK. 1989. Current concepts in proteinuria. Clin Chem, 35 : 755-765.
22. Westermeier R., "Electrophoresis in Practice. A Guide to Theory and Practice", VCH Publishers, New York, NY, 1993.
23. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93 - 97.
- 409 -
PHOTO
INSERTION DU SUPPORT SUR LE CARROUSEL - INSERTION OF THE RACK IN THE ROTATING SAMPLER
- 410 -
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLES

Sérum Normal / Normal serum
Figure 1
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
- 411 -
SCHÉMAS / FIGURES

Sérum Hypergamma / Hypergamma serum
Figure 2
Immun complexe
Immune complex
ELP Ig G
Ig A Ig M
Immun complexe
Immune complex
Immun complexe
Immune complex
K L
- 412 -
SCHÉMAS / FIGURES

Protéine monoclonale 0,5 g/L / Monoclonal component 0.5 g/L
Figure 3
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein

Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Lambda
- 413 -
SCHÉMAS / FIGURES

Ig G, Kappa - mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program
Figure 4
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Kappa
- 414 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, Kappa + Ig M, Kappa
Figure 5

ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Kappa + Ig M, Kappa
- 415 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, Kappa + Ig G, Lambda
Figure 6

ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Kappa + Ig G, Lambda
- 416 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil oligoclonal / Oligoclonal pattern
Figure 7
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
- 417 -
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES D'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF URINE SAMPLES

Proteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program
Figure 8
Albumin(e) Alpha 1 Alpha 2 Beta Gamma Albumin(e) Alpha 1 Alpha 2 Beta Gamma
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Suspicion de chaîne légère libre Kappa (à confirmer)
Kappa free light chain suspected (to confirm)
- 418 -
SCHÉMAS / FIGURES

Proteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program
Figure 9
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer)

Lambda free light chain suspected (to confirm)
- 419 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil biclonal / Biclonal pattern – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program
Figure 10
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Lambda + suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer)
Ig G, Lambda + Lambda free light chain suspected (to confirm)
- 420 -
Benelux SCS / Comm. V
Jan Olieslagerslaan, 41
1800 Vilvoorde
Belgique / België
Tél. : 32 (0)2 702 64 64
Fax : 32 (0)2 702 64 60
e-mail : sebia.benelux@sebia.be
Brasil.
Rua Barão do Triunfo, 73, Cj 74
CEP 04602-000
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36041 Fulda
Deutschland
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C/Sicilia, n° 394
08025 Barcelona
España
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Fax : 34 93 458 55 86
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Inc.
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Norcross, GA 30093
U.S.A.
Tel. : 1 770 446 - 3707
Fax : 1 770 446 - 8511
e-mail : info@sebia-usa.com
Italia S.r.l.
Via Antonio Meucci, 15/A
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Italia
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Fax : 39 055 0982083
e-mail : info@sebia.it
Swiss GmbH
Verenastrasse, 4b
CH-8832 Wollerau
Switzerland
Tel. : 41 44 787 88 10
Fax : 41 44 787 88 19
e-mail : contact.ch@sebia.com
UK Ltd
River Court, The Meadows Business Park
Station Approach, Blackwater
Camberley, Surrey, GU17 9AB
United Kingdom
Tel. : 44 (0)1276 600636
Fax : 44 (0)1276 38827
e-mail : sales@sebia.co.uk
Shanghai Representative Ofﬁce

Cross Tower, Room 2306-07
318 Fuzhou Road
Shanghai 200001
Parc Technologique Léonard de Vinci China
2018/09
Tel. : 00 86 (21) 6350 1655

CP 8010 Lisses - 91008 EVRY Cedex - France Fax : 00 86 (21) 6361 2011
Tél. : 33 (0)1 69 89 80 80 - e-mail : sebia@sebia.com e-mail : sebia@sebia.cn

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MINICAP IMMUNOTYPING

Para uso en diagnóstico In Vitro.

PRINCIPIO DEL TEST

El inmunotipado se realiza en cuatro etapas :

REACTIVOS SUMINISTRADOS EN EL KIT MINICAP IMMUNOTYPING

ATENCIÓN : Ver las fichas de datos de seguridad.

COMPONENTES REF. N° 2300

- 84 - INSTRUCCIONES SEBIA - Español

2. SOPORTE CON LOS TUBOS DE LA SOLUCIÓN ELP Y LOS ANTISUEROS

2.1. SOLUCIÓN ELP

ANÁLISIS DE SUEROS : TÉCNICA CAPILLARYS IMMUNOTYPING

REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS

ATENCIÓN : Ver las fichas de datos de seguridad.

1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, referencia 2203)

2. AGUA DESTILADA O DESIONIZADA

3. CAPICLEAN (PARA MINICAP) O CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING (PARA MINICAP FLEX-PIERCING)

4. SOLUCIÓN DE HIPOCLORITO DE SODIO (para la limpieza de la cánula de muestras)

5. SOLUCIÓN DE LAVADO CAPILLARYS / MINICAP

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS

MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS

Extracción y conservación de las muestras

(1) ISO 15189 : Laboratorios clínicos – Exigencias respecto a la calidad y la competencia.

Las etapas manuales son las siguientes :

LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP.

I. PREPARACIÓN DEL ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO

DILUCIÓN - MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS

II. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

III. FIN DE LA SECUENCIA DE ANÁLISIS

IV. LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO

LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP.

Ayuda al análisis de perfiles electroforéticos

1. Perfil de referencia (perfil ELP)

Interpretación para el análisis de sueros

Ausencia de proteína monoclonal

Presencia de una proteína monoclonal

Presencia de varias proteínas monoclonales

Reproducibilidad intraserial e interanálisis

Reproducibilidad interanálisis e intersistemas

Reproducibilidad interanálisis e interlotes

ANÁLISIS DE ORINAS : TÉCNICA MINICAP IMMUNOTYPING URINE

REACTIVOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS

ATENCIÓN : Ver las fichas de datos de seguridad.

1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, referencia N° 2203)

2. KIT CAPILLARYS / MINICAP URINE (SEBIA, referencia N° 2013)

3. AGUA DESTILADA O DESIONIZADA

4. CAPICLEAN (PARA MINICAP) O CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING (PARA MINICAP FLEX-PIERCING)

5. SOLUCIÓN DE HIPOCLORITO DE SODIO (para la limpieza de la cánula de muestras)

6. SOLUCIÓN DE LAVADO CAPILLARYS / MINICAP

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS

MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS

Extracción y conservación de las muestras

Las etapas manuales son las siguientes :

LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP.

I. PREPARACIÓN DEL ANÁLISIS ELECTROFORÉTICO

DILUCIÓN - MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS

II. ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

III. FIN DE LA SECUENCIA DE ANÁLISIS

IV. LLENADO DE LOS CONTENEDORES DE REACTIVO

LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL MINICAP.

Interpretación del análisis de orinas

Ausencia de proteína monoclonal

Presencia de una proteína monoclonal