RESOLUCIÓN MINISTERIAL

GUÍA PRÁCTICA DEL

Nº 0552

DIAGNÓSTICO DE LA MALARIA
 CAPÍTULO Nº1
MÉTODO DE DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO
DIRECTO GOTA GRUESA/FROTIS SANGUÍNEO

El Dx parasitológico de
MALARIA: Se basa en la
ES EL MÉTODO DE LA S:92-98% y demostración de la
presencia y definición
GOTA GRUESA Y E: 85-99%. de la especie del
EXTENDIDO
SANGUÍNEO (FROTIS) Plasmodium spp.
1.1 PROCEDIMIENTOS PARA LA TOMA DE MUESTRA

FOTO Nº 1: MATERIAL PARA LA TOMA DE MUESTRA

REGISTRO  de datos del Px en el formulario de registro individual
para malaria
Explicar al Px a cerca de los procedimientos

MATERIALES NECESARIOS  para la TOMA DE 2 MUESTRAS

POR PX:
torundas de algodón secas y embebidas en alcohol,
portaobjetos desengrasados, lanceta estéril y guantes.

Sostener firmemente la mano menos hábil del Px, ELEGIR EL DEDO

ANULAR O MEDIO PARTE LATERAL EXTERNA; En pediátricos
tomar muestra del pie (borde lateral externo o la parte angular del
talón).
LIMPIAR ENÉRGICAMENTE LA ZONA de elección, con una
torunda de algodón embebida en alcohol

SECAR la zona con una torunda de algodón seca y limpia

PUNCIONAR rápidamente con una lanceta estéril y

presionar suavemente el dedo (eliminar las 2 primeras
gotas).
Colocar el portaobjetos abajo, depositar 1
gota de sangre para la gota gruesa y otra
gota para el frotis.

Secar la zona con una torunda de algodón

seca y limpia
FROTIS  Realizar el extendido sanguíneo en CAPA FINA. Utilizando
otro portaobjeto como extensor, tocar el borde de la gota de sangre y
esperar que discurra a lo largo del borde biselado.

luego deslizar con firmeza con un ángulo de 45º (haciendo que los
dos portaobjetos estén siempre en contacto)

GOTA GRUESA  Mezclar con una esquina rápidamente la gota de

sangre (movimientos giratorios concéntricos y suaves) 
DESFIBRINIZACIÓN por 30 segundos para obtener una película
homogénea, de 1 cm. de diámetro.
IDENTIFICAR la muestra con lápiz negro
Dejar SECAR las muestras a temperatura ambiente, en posición horizontal,
NO DEJAR EXPUESTAS AL SOL, AL POLVO Y PROTEGIDA DE INSECTOS.
1.2 PROCESAMIENTO TÉCNICO DE LA MUESTRA HEMÁTICA
DESHEMOGLOBINIZACIÓN
la muestra de GOTA GRUESA en un
recipiente que contenga agua, hasta
transparentar
SECAR. Sacar dejar reposar a Tº
ambiente en posición vertical, la gota
gruesa abajo.
a) Técnica de Tinción
ROMANOWSKY
b) Técnica de Tinción
GIEMSA
SECADO Y COLORACION:
Dos técnicas son las habituales:
FIJACIÓN  con una pipeta,
cubrir toda la muestra con alcohol al
96% por 3 a 5 minutos
Otra opción  sumergir la muestra
en metanol por 30 segundos
A) TÉCNICA DE TINCIÓN ROMANOWSKY.
PREPARACIÓN DEL COLORANTE:
1. AGUA
AMORTIGUADA o 2.Solución A: 8 Gts 3.Solución B:5Gts
tamponada con pH Pese los siguientes Pese el reactivo:
de 7,2 a 7,4; 10 ML reactivos Eosina amarilla
(preparada o Naturagua Cloruro d azul de hidrosoluble 4 g
7,3) metileno 3,2g Disuelva el reactivo
Pese y mezcle Azur I o azur B 2g en 1 litro de solución
Ortofosfato disódico 4 g amortiguadora y filtre
Ortofosfato monopotásico Mezcle las cantidades
5 g  se toma 1 gr. de la indicadas en 1 litro de
mezcla y disuelve en 1litro solución amortiguadora
de agua destilada  y filtre
ajustar a un pH de 7,2 a
7,4
HOMOGENEIZAR LOS INGREDIENTES cuidadosamente.
La cantidad indicada SIRVE PARA COLOREAR 3 LÁMINAS.
* CUBRIR toda la * Dejar SECAR las
muestra con una * LAVAR la lámina placas en un soporte
pipeta. con agua corriente a Tº ambiente.
* Dejar actuar el bajo un chorro * Observar al
colorante por 30 suave. MICROSCOPIO
MINUTOS. óptico
B) TÉCNICA DE TINCIÓN GIEMSA
PREPARACIÓN DEL COLORANTE. El
colorante se prepara en una proporción 1/9
(10%), con esta proporción, el tiempo
adecuado de tinción suele ser de 30 minutos.

1. Agua tamponada con

pH 7,2 a 7,4: 9ml

2. Solución madre Giemsa

1 ml
Preparar una DILUCIÓN 1:10 mezclando
la solución madre de Giemsa y el agua
tamponada.
HOMOGENEIZAR los ingredientes
cuidadosamente.
CUBRIR
completamente la
muestra hemática con
el colorante preparado
LAVAR la lámina con
agua corriente bajo un
chorro suave
SECAR Tº ambiente
OBSERVAR al
microscopio
 1.3 CALIDAD DE LA GOTA GRUESA
Una BUENA GOTA GRUESA  MACROSCÓPICAMENTE
debe tener las siguientes características:

debe ubicarse en el centro de una mitad del

portaobjetos,
estar completa, medir 1 cm. de diámetro.
MICROSCÓPICAMENTE:
NO se deben observar GLÓBULOS ROJOS, ni
restos de Hb, debe tener fondo claro
Y concentración de 10 a 20 leucocitos/campo.
 1.4 CALIDAD DEL FROTIS.
debe ocupar la Se debe Rutina

MICROSCÓPICAMENTE
MACROSCÓPICAMENTE

FINES PRÁCTICOS
otra mitad del VISUALIZAR UNA EXAMINAR 100
portaobjeto SOLA CAPA de CAMPOS, en un
debe ser delgado elementos formes trayecto
y tener tres separados entre sí zigzagueante, de
partes: CABEZA, derecha a
CUERPO Y COLA, izquierda y de
NO deben existir izquierda a
COÁGULOS, derecha, ANTES
restos de GRASA DE DESECHAR LA
o partículas. LÁMINA COMO
NEGATIVA
1.5 CRITERIOS DE DX MICROSCÓPICO DE MALARIA

En el diagnóstico microscópico Glóbulos blancos o leucocitos.

de la malaria es indispensable
conocer e identificar
inicialmente los elementos
formes de la sangre que se
pueden observar en un examen
de gota gruesa y frotis.
Existen 5 tipos de leucocitos en
Glóbulos rojos o eritrocitos la sangre y se clasifican de
De acuerdo a la acuerdo con su contenido de
tinción pueden verse de color gránulos citoplasmáticos
naranja o azul pálido específicos en leucocitos
granulares y
agranulares.
1.6 IDENTIFICACIÓN MICROSCÓPICA DEL PARÁSITO
El Plasmodium spp. adquiere
un aspecto determinado en la
gota gruesa y el frotis que
permite el reconocerlo.

El parásito consta de un NÚCLEO se ALMACENAN en el parásito en

compuesto de cromatina, redondo forma de GRÁNULOS, los cuales
y se colorea de un rojo intenso serán más evidentes en estadios
(rojo grosella) maduros del parásito

una VACUOLA donde se realizan

El CITOPLASMA es de color las funciones metabólicas
azul, en forma de anillo a (DIGIERE LA Hb)  es eliminada
irregular como “HEMOZOINA” O
“PIGMENTO MALÁRICO”
1.7 CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS
DEL PLASMODIUM FALCIPARUM.
En Bolivia, ES LA MENOS DIFUNDIDA y representa entre el 8% a 9% de la
malaria total aproximadamente

AMAZONÍA BOLIVIANA en las zonas limítrofes con

Brasil y Perú y coexiste con P. vivax produciendo infecciones mixtas

Invade glóbulos rojos de cualquier edad, el poliparasitismo es frecuente.

GR: no sufren agrandamiento (el trofozoito ocupa < de la mitad)

se identifican SOLAMENTE trofozoitos jóvenes y gametocitos***

Los esquizonte y trofozoitos adultos en tejidos PROFUNDOS Y CUADROS
GRAVES
 ESQUIZONTES: raras veces
TROFOZOITOS salen a la sangre periférica y
pueden generar entre 18 – 32
merozoitos.
MANCHAS DE MAURER
Formas anulares pequeñas aparecen en ESTADIOS
MADUROS y en
PARASITEMIAS ALTAS.
UN punto de cromatina
“ANILLO EN ENGARCE DE SE HALLAN en el borde del GR
en forma de “APPLIQUÉES”
RUBÍ” o DOS puntos de
cromatina, en forma de o llegan a rebasar la
membrana celular y adoptan la
“SONRISA FELIZ”  forma de “PALILLO DE
semejando UNA COMA O
TAMBOR”
SIGNO DE INTERROGACIÓN
Aparecen en PARASITEMIAS
ALTAS, en cuadros SEVEROS,
SON INDICADORES DE MAL
PRONÓSTICO
GAMETOCITOS: Formas
sexuadas asemeja a salchicha
o banana y, es frecuente
observar la membrana del
glóbulo rojo durante la
maduración del gametocito
Por lo general solo se observan
TROFOZOITOS JÓVENES y
gametocitos de Plasmodium
falciparum. en sangre periférica
 1.8 FORMAS: anulares, Los trofozoitos jóvenes
CARACTERÍSTICAS pequeños, medianos y habitualmente MIDEN
MICROSCÓPICAS grandes, ameboides, a ALREDEDOR DE 1/3
DEL PLASMODIUM “MANERA DE DEL DIÁMETRO de los
VIVAX. GR
MAPAS”

en Bolivia la infección Los trofozoitos adultos

porP. vivax  Los TROFOZOITOS
son las formas
OCUPANDO
TOTALMENTE AL GR
> 90% de la jóvenes de P. vivax con su vacuola de grande y
los granos de pigmento
malaria anual dispersos en el citoplasma.

PREFERENCIA por los TODOS LOS

GLÓBULOS ESTADIOS de
ROJOS MÁS P.vivax se
JÓVENES  IDENTIFICAN EN
SANGRE PERIFÉRICA
 compuestos por GAMETOCITOS,
cromatina rodeada son formas sexuadas,
Los ovaladas, poseen
de citoplasma con
ESQUIZONTES granulaciones de
pigmento malárico
muy visible, de COLOR
Schüffner AMARILLO Metálico

MASA DE
ESQUIZONTE MACROGAME
CITOPLASMA MADURO esta TOCITOS son
CONDENSADO + constituido por GRANDES Y AZULES
varios granulos de MEROZOÍTOS bien
cromatina y con una cromatina
diferenciados excéntrica

que AL ROMPERSE MICROGAMETO

Aspecto de DARÁ ORIGEN A
RACIMO DE CITOS tienen una
MEROZOITOS masa difusa de
UVA (12 a 24) ERITROCÍTICOS que cromatina que SE TIÑE
invadirán a otros GR. DE ROSADO.
CARACTERÍSTICAS DIFERENCIALES
GRÁFICO Nº 6: COMPARATIVO DE LAS DISTINTAS ESPECIES DEL PLASMODIUM SPP. EN FROTIS
GRÁFICO N 7: EN GOTA GRUESA