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Tinción simple Cuestionario previo Ortega Monroy Jovan

1.- ¿Qué es un frotis? Desarrolle una tabla en la cual indiques y describas los
principales pasos a seguir para elaborar un frotis
El frotis es la extensión de una muestra de bacterias o levaduras y es el paso previo
a la tinción para su estudio microscópico.

1- Primero desinfectamos nuestra área de trabajo con un poco de desinfectante y

un trapo.

2- Conectamos y encendemos el mechero,este debe estar ajustado a un flama de

color azul para establecer el area aseptica.

3- Después rotulamos nuestro portaobjetos con el nombre del microorganismo y

pegamos la etiqueta en un extremo del portaobjetos.

4- Podemos hacer frotis en medio sólido y líquido, en el sólido con la asa

colocamos un pequeña gota de agua.

5- Esterilizamos el asa hasta el rojo vivo y dejamos enfriar.

6- Abrimos el tubo con el medio dentro del área aséptica y tomamos una pequeña
muestra flamear la boca del tubo y lo tapamos.

7- Colocamos el cultivo en la gota de agua haciendo una suspensión y

extendemos.

8- Dejamos secar el portaobjetos y esterilizamos el asa.

9- En el medio líquido agitamos suavemente el tubo dejando el cultivo

suspendido.

10- Realizamos el mismo procedimiento que en el cultivo sólido desde abrir el

tubo y tomar la muestra.

11- Una vez secas las muestras las fijamos pasándolas tres veces rápidamente
sobre la flama del mechero.

12- Ya fijadas las muestras podemos utilizarlas y apagar el mechero.

2.- Describe tres maneras de fijar un frotis

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● Usando calor: Pasamos tres veces el portaobjetos por la llama del mechero
durante unos segundos y dejamos enfriar el portaobjetos.
● Con metanol solamente para bacterias procedentes de medio líquido:
Añadimos gotas de metanol sobre la extensión completamente seca,
golpeamos el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de
trabajo para retirar el exceso de metanol y esperamos a que el metanol se
evapore completamente.
● Las fijaciones químicas donde los fijadores químicos penetran en la célula y
reaccionan con los componentes celulares, normalmente se unen a proteínas
y lípidos.

3.- ¿Qué son las preparaciones en fresco? Describe brevemente cómo se realizan
Técnica que permite observar microorganismos vivos y ciertas funciones
fisiológicas, cómo movilidad, así como apreciar sus distintas formas, tamaños y
agrupaciones.
1. Para la muestra que es líquida colocamos unas gotas de la muestra en
el centro del portaobjetos con la ayuda de una pipeta.
2. Para la muestra que es sólida colocamos primero gotas de agua
destilada sobre el portaobjetos y a continuación un fragmento de la
muestra con la ayuda de unas pinzas.
3. Sujetando el cubreobjetos por dos de sus lados, apoyamos otro de sus
lados sobre el portaobjetos de modo que forme un ángulo de
aproximadamente 45 grados.
4. Soltamos con cuidado el cubreobjetos de modo que quede colocado
sobre el líquido que hemos depositado anteriormente. En caso de que
haya un exceso de líquido alrededor del cubreobjetos podemos
eliminarlo mediante papel absorbente.
4.- ¿Cuál es la utilidad de una preparación en fresco?
Para poder observar microorganismos o tejidos biológicos que requieren ser
hidratados.
5.- ¿Qué es un colorante y como está constituido?
El colorante es una sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras, etc. Estos
pueden estar constituidos por plantas o animales si son naturales, y de minerales
procesados y manipulados en el laboratorio si son artificiales.
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7.- ¿Qué es una tinción negativa? Da un ejemplo

Técnica de microscopía que se utiliza cuando los microorganismos no fijan el
colorante, donde el fondo es el que se tiñe y los microorganismos aparecen
brillantes sobre fondo oscuro, por ejemplo la tinción negativa de la cápsula.

8.- ¿A qué se le llama tinción positiva? Da un ejemplo

Es la técnica de microscopía donde se tiñe a la célula para poder ser observada
sobre un fondo claro, por ejemplo las tinciones Gram como la de Staphylococcus
aureus.

9.- ¿Qué es una tinción simple y para que se emplea?

Procedimiento en el cual se agrega un solo colorante a la muestra, tiñendo todas las
células esta se emplea para obtener información sobre la morfología, y agrupación
de los microorganismos de estudio.

10.- ¿A qué se le llama tinción diferencial?

Son las tinciones que se usan para diferenciar de manera más explícita los
microorganismos, utilizando colorantes diferenciales como son las tinciones Gram o
la ácido-resistente.

11.- ¿A qué se le llama tinción selectiva?

Son aquéllas que pueden evidenciar una estructura celular determinada
aprovechando las propiedades físicas y químicas de algunos de los componentes.

12.- Dibuje y describa las características que puede observar en una tinción simple
de los siguientes microorganismos:
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Bibliografía
● Admin. (2021, 1 enero). Preparación de muestras para microscopio óptico -

mundo microscopio. Mundo Microscopio. Recuperado 15 de agosto de 2023

de:https://www.mundomicroscopio.com/preparacion-de-muestras/#:~:text=La

%20preparaci%C3%B3n%20en%20fresco%20es,la%20ayuda%20de%20una

%20pipeta.

● Urzúa, C. (2014, 02/12). 10_Preparación por frotis. [Video]. Recuperado 15

de agosto de 2023 de: https://mediacampus.cuaieed.unam.mx/node/4242

● Urzúa, C. (2014, 02/12) . 11_Tinción simple. [Video]. Recuperado 15 de

agosto de 2023 de: https://mediacampus.cuaieed.unam.mx/node/4243

● Bio, S. (2023, 8 febrero). Negative Staining of viruses - principle, procedure,

uses. Microbiology Note – Online Biology Notes. Recuperado 15 de agosto de

2023 de:

https://microbiologynote.com/es/negative-staining-of-viruses-principle-procedu

re-uses/

● López, L. E. L. J., Hernández, M. H. D., Colín, C. A. C. C., Ortega, S. O. P.,

Cerón, G. C. G., & Franco, R. F. C. (2014, marzo). Las tinciones básicas en el

laboratorio de microbiología. medigraphic. [PDF]. Recuperado 15 de agosto

de 2023, de https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

● Corrales, L. C. C. R., & Caycedo, L. C. L. (2019). Principios físicoquímicos de

los colorantes utilizados en microbiología. Scielo. [PDF]. Recuperado 15 de

agosto de 2023, de

http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v18n33/1794-2470-nova-18-33-73.pdf