UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

CENTRO UNIVERISTARIO DEL NOROCCIDENTE

CARRERA DE MÉDICO Y CIRUJANO
BIOLOGÍA
Licda. M.A Carmen Carrasco

COVID-19
 ESTRUCTURA VÍRICA • SARS-CoV-2 es un virus de ARN
perteneciente a la familia de
coronavirus, que recibe este
nombre por la apariencia
característica de las proteínas de
su cubierta. Su genoma contiene
29891 nucleótidos que codifican
para 9860 aminoácidos

Estructura del coronavirus SARS-CoV-2. Imagen: David S. Goodsell, RCSB Protein Data Bank; doi:
10.2210/rcsb_pdb/goodsell-gallery-019, con modificaciones.
Genoma completo del virus
UCSC Genome Browser
• Su forma infectiva, consiste en una membrana con glicoproteínas
dentro de la que se empaqueta el material hereditario compactado
con proteínas.
• En la superficie destaca la presencia de la proteína S, denominada así
por formar la espícula, estructura en forma de aguja que tiene un
papel relevante en la infección.

• La cubierta posee lípidos unidos

a las proteínas.
 Estructura tridimensional del
virus.

https://www.eluniverso.com/noticias/2020/11/14/nota/80483
95/como-se-ve-coronavirus
Mecanismo de infección y entrada a las células
• El coronavirus SARS-CoV-2 entra en las células a través de la unión de
una proteína de su superficie, la proteína S, con el receptor ACE-2
(enzima convertidora de angiotensina 2) de las células huésped.

• ACE-2 forma parte de una ruta bioquímica que interviene en la

regulación de procesos como la inflamación o la presión sanguínea y
su función habitual es modular la actividad de la angiotensina 2 para
contrarrestar sus efectos dañinos.
• La proteína S está formada por tres unidades idénticas organizadas en forma de
círculo que encajan con el receptor ACE-2 como una llave y median la fusión de la
cubierta membranosa del virus con la membrana de la célula que está siendo
infectada.

• La unión entre la proteína S y el receptor ACE-2 marca el punto de destino del

virus en el organismo, pero es la activación de la proteína S lo que abre las
puertas de la célula al virus.
• La activación de la proteína S está mediada la proteasa celular , que
suele localizarse cerca de ACE-2. TMPRSS2 corta la proteínaTMPRSS2
S, lo que activa proteínas de la envoltura viral que favorecen la fusión
con la membrana celular. De este modo, los virus entran en la célula
rodeados de membrana celular, formando endosomas.

• En estas pequeñas bolsas celulares, se liberan catepsinas, otras

proteínas que modifican de nuevo la proteína S, y proteasas que
favorecen la liberación del ARN viral al citoplasma. Para este proceso
son importantes las condiciones de pH en el interior de las vesículas
• Al tratarse de un ARN de sentido positivo, al ser liberado, el
ARN viral se traduce directamente a poliproteínas, que son
procesadas en proteínas funcionales responsables de la
replicación y transcripción del virus. Así, por una parte, se
producen ARNs que son traducidos en proteínas
estructurales del virus y por otra se generan ARNs genómicos
que serán empaquetados en los nuevos viriones que se van
formando. Por último, los viriones se liberan al exterior de la
célula y pueden infectar otras células.
• El importante papel de la proteína S, el receptor ACE-2 y la
proteasa TMPRSS2 en la entrada del virus a la célula ha
hecho que estas moléculas se conviertan en moléculas clave
para el desarrollo de tratamientos o vacunas.
 ¿Qué células expresan ACE2?
• Dado que ACE-2 es la puerta de entrada del virus a las células del
organismo, una cuestión relevante para determinar el alcance o las
consecuencias clínicas de COVID-19 es conocer qué células expresan esta
proteína y pueden ser infectadas.
• ACE-2 está presente en células de órganos como el pulmón, corazón, riñón,
vejiga y órganos del sistema digestivo.
• Si se considera también TMPRSS2, proteína implicada en la activación de la
proteína S viral el rango de células susceptibles de ser infectadas es menor.
• El análisis de expresión de diferentes tejidos indica que ACE2 y TMPRSS2 se
expresan especialmente en ciertas células de la cavidad nasal (las células
caliciformes que producen mucus) de los pulmones (en los neumocitos que
mantienen los alveolos abiertos) y el intestino (enterocitos responsables de
la absorción de nutrientes).
 ¿Cómo afecta el virus a las células infectadas?
• Una vez dentro de las células, el coronavirus SARS-CoV-2 no se comporta como
otros virus respiratorios como el SARS. En general la presencia de los virus
respiratorios activa la expresión de los genes que producen interferón,
que inhiben la replicación del virus, y la expresión de quimiocinas, que son las
señales que alertan a células cercanas y sistema inmunitario de la infección.
• Sin embargo, los estudios en células humanas o células de pacientes indican
que SARS-CoV-2 bloquea los genes relacionados con la producción de
interferón y activa los que producen las quimiocinas, que inducen el
reclutamiento de macrófagos y la inflamación. Con este mecanismo, la
respuesta del organismo al virus está desequilibrada respecto a lo que ocurre
normalmente.
• Los investigadores sugieren que esta característica podría estar relacionada
con la mayor frecuencia de casos graves de COVID-19 en pacientes con otras
enfermedades que no tienen un sistema inmunitario robusto.
• El análisis de células en cultivo infectadas con SARS-CoV-2 indica que el
virus se replica rápidamente en las células.
• Además, SARS-CoV-2 aumenta la actividad ciertas rutas celulares como
la traducción de proteínas, el procesado de ARN o el metabolismo de los
ácidos nucleicos y el carbono.
• Estudios preliminares en cultivo celular, indican que inhibidores de estas
rutas inhiben la replicación del virus. Investigaciones futuras deberán
evaluar si estos resultados tienen aplicación clínica en pacientes
PRUEBAS
 PCR en tiempo real
El primer paso para detectar la infección por SARS-CoV-2
mediante PCR es la conversión del ARN monocatenario viral
en ADN bicatenario.
Para ello, en primer lugar, se obtiene el material genético del
virus a partir de un frotis de nariz o garganta del paciente a
diagnosticar y se purifica. En la muestra estamos recogiendo
también ARN humano, ARN bacteriano e incluso ARN de
otros virus
Se procede a la transcripción inversa del ARN
para convertirlo en ADN mediante una enzima
específica.
A continuación, los científicos añaden
pequeños fragmentos adicionales de ADN que
complementan determinadas partes del ADN
vírico transcrito.
Esos fragmentos se adhieren a partes
específicas del ADN vírico de estar el virus
presente en la muestra.
Algunos de los fragmentos genéticos añadidos
sirven para crear la cadena de ADN durante la
amplificación y otros, para producir ADN y
añadir marcadores a las cadenas, que se
utilizan posteriormente para detectar el virus.
• A continuación, se introduce esa combinación en un aparato de RT-PCR, donde se
someten a ciclos de calor-frío para provocar determinadas reacciones químicas
que dan lugar a nuevas copias idénticas de partes específicas del ADN vírico.
• Esos ciclos se repiten una y otra vez para seguir copiando las partes específicas
del ADN vírico. En cada uno de ellos se duplican las cantidades: de dos copias, se
pasan a cuatro; de cuatro, a ocho, y así sucesivamente. Un sistema habitual de
RT-PCR en tiempo real suele constar de 35 ciclos, es decir, que al final del proceso
se habrán creado unos 35 000 millones de copias nuevas de las partes del ADN
vírico de cada una de las cadenas del virus presentes en la muestra.
• A medida que se producen nuevas copias de las partes del ADN vírico, los
marcadores se acoplan a las cadenas de ADN y emiten una fluorescencia, que la
computadora del aparato medirá y presentará en tiempo real en la pantalla.
• La computadora hace un seguimiento de la magnitud de la fluorescencia de la
muestra tras cada ciclo. Cuando esta supera un determinado nivel, se confirma la
presencia del virus. Los científicos supervisan también el número de ciclos que se
tarda en alcanzar ese nivel para determinar así la gravedad de la infección:
mientas menor sea el número de ciclos, más grave será la infección vírica.
Análisis de los resultados
Si se detecta un aumento de la fluorescencia durante la reacción de
PCR, estamos ante un claro indicio de la presencia de SARS–CoV-2 en el
paciente.
Test de anticuerpos
• Los test de anticuerpos para la detección de SARS-CoV-2 son pruebas
diagnósticas capaces de determinar si un paciente ha sido infectado y ya
se encuentra inmunizado. Este tipo de pruebas consigue detectar los
anticuerpos que el sistema inmunitario del paciente ha generado contra el
virus. Una de las grandes ventajas de este test es el tiempo en el que se
llevan a cabo, ya que solo se tardan unos 15 minutos en obtener
resultados.
• El problema principal de este tipo de test es que no pueden determinar
una infección reciente del paciente. Es decir, que si el paciente acaba de
ser infectado por SARS-CoV-2 puede dar un resultado falso negativo, ya
que la persona todavía no ha tenido tiempo para desarrollar anticuerpos
frente al virus. Por ello, se recomienda como prueba complementaria a la
RT-PCR cuantitativa.
Test basados en CRISPR-Cas13
• Actualmente se está desarrollando un test de detección de SARS-
CoV-2 a partir de la técnica SHERLOCK. En este tipo de pruebas,
gracias al sistema CRISPR-Cas13, podemos detectar la infección por
SARS-CoV-2 a partir de una muestra de una forma rápida y visual. En
este caso, el sistema se encuentra en laminillas de papel que, al ser
sumergidas en una muestra se colorea, indicando la presencia de
moléculas de ARN de SARS-CoV-2.
• Los sistemas CRISPR-Cas utilizados en los laboratorios suelen tener dos elementos
principales: una enzima nucleasa que corta el ácido nucleico y una molécula de
ARN que dirige a la enzima a una posición específica del genoma.
• Para desarrollar la prueba de detección del coronavirus los investigadores
eligieron la nucleasa Cas13a por dos razones principales.
• En primer lugar, Cas13 corta ARN por lo que puede ser utilizada para detectar el
genoma de ARN del coronavirus sin necesidad de transformar el ARN en ADN,
como ocurre con la PCR. En segundo lugar, Cas13a tiene una propiedad muy
interesante para el desarrollo del test: cuando es activada por la unión del ARN
guía al ARN diana, en este caso el genoma del coronavirus, degrada otros
fragmentos de ARN presentes a su alrededor, de forma inespecífica.
• Respecto al segundo elemento principal, el ARN guía, la prueba de detección
utiliza múltiples ARNs guía que reconocen diferentes posiciones del genoma del
coronavirus, ya que esta estrategia aumenta la sensibilidad para detectar la
presencia del virus.
• Por último, los investigadores han añadido un tercer elemento para poder
detectar el resultado: una sonda de ARN marcada que emite fluorescencia
cuando el ARN es fragmentado.
Otros test
• Además de los test anteriores, algunos centros europeos, entre los
que figura el Instituto Catalán de Nanociencia y Nanotecnología,
están trabajando en un nuevo dispositivo que se espera que detecte
la infección por coronavirus en menos de 30 minutos. Este nuevo
dispositivo, al que los autores han llamado “CoNVat” se basa en
tecnologia de microchip y guías de onda interferométricas
(nanotecnología óptica) para detectar el virus.
Diabetes y COVID-19
• El coronavirus infecta con mayor eficiencia a enfermos diabéticos para lo cual se
pueden establecer tres hipótesis:
1. La eficiencia de infección de coronavirus del tipo SARS-Cov (y SARS-Cov2)
depende de receptores específicos llamados ACE2 que han sido identificados en
pulmones.
• Interesantemente, estudios pre-clínicos han encontrado que el receptor ACE2
tiene mayor expresión (y actividad) en los pulmones de animales diabéticos en
comparación con animales sanos, explicando la mayor susceptibilidad de
enfermos diabéticos a ser infectados por coronavirus.
• Además, estudios clínicos han mostrado que el receptor ACE2 también es
expresado por los islotes pancreáticos, favoreciendo la infección del páncreas por
coronavirus (SARS-CoV), deterioro en la producción de insulina, y el desarrollo de
diabetes durante el curso de la infección.
2. Los pacientes con enfermedades metabólicas tales
como la diabetes se encuentran en un estado de
inmunidad alterado, con inflamación local y sistémica.
Podría ser que pacientes diabéticos, al ser infectados
por COVID-19, estén predispuestos a desarrollar el
síndrome de tormenta de citoquinas, que consiste en
una elevada producción de moléculas inflamatorias,
agravando su estado por deterioro y falla multiorgánica
3. La función normal de la enzima ACE2 en el cuerpo ha sido
bien documentada y es parte del sistema encargado de
controlar la presión sanguínea y la homeostasis de fluidos.
Normalmente, ACE2 se encarga de frenar la acción de la
hormona angiotensina II, la cual estimula el aumento de
presión y permeabilidad vascular. En presencia de coronavirus,
se cree que ACE2 se inactiva y angiotensina II queda libre para
funcionar, contribuyendo al daño pulmonar por aumento de
presión y permeabilidad.
Vacunas
• Vacunas genéticas y biológicas
https://espanol.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/vaccines/different-
vaccines/mrna.html
Mas información…
• Revisar documentos en plataforma y enlaces:
-Pruebas para detectar COVID-19
-Pacientes de COVID-19 y diabetes
-Investigacion global sobre la enfermedad por coronavirus COVID-19
de la OMS
https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-
2019/global-research-on-novel-coronavirus-2019-ncov
Referencias:
• Cascella M, et al. Features, Evaluation and Treatment Coronavirus (COVID-19).
StatPearls. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK554776/
• Ziegler C GK, et al. SARS-CoV-2 Receptor ACE2 Is an Interferon-Stimulated Gene in Human Airway Epithelial
Cells and Is Detected in Specific Cell Subsets across Tissues. Cell. 2020.
Doi: https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.04.035
• Bojkova D, et al. Proteomics of SARS-CoV-2-infected host cells reveals therapy targets. Nature. 2020.
Doi: https://doi.org/10.1038/s41586-020-2332-7
• Centro de Coordinación de Alertas y Emergencias Sanitarias. Enfermedad por coronavirus, COVID-
19. https://www.mscbs.gob.es/profesionales/saludPublica/ccayes/alertasActual/nCov-
China/documentos/20200417_ITCoronavirus.pdf
• Broad Institute. Enabling coronavirus detection using CRISPR-Cas13: Open-access SHERLOCK research
protocols and design resources. https://www.broadinstitute.org/news/enabling-coronavirus-detection-
using-crispr-cas13-open-access-sherlock-research-protocols-and
• Broad Institute. Enabling coronavirus detection using CRISPR-Cas13: Open-access SHERLOCK research
protocols and design resources. https://www.broadinstitute.org/news/enabling-coronavirus-detection-
using-crispr-cas13-open-access-sherlock-research-protocols-and
• Ou X, et al. Characterization of spike glycoprotein of SARS-CoV-2 on virus entry and its immune cross-
reactivity with SARS-CoV. Nat Com. 2020. Doi: https://dx.doi.org/10.1038%2Fs41467-020-15562-9
• Hoffmann M, et al. SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically
Proven Protease Inhibitor. Cell. 2020. Doi: https://dx.doi.org/10.1016%2Fj.cell.2020.02.052
• Blanco-Melo D, et al. Imbalanced Host Response to SARS-CoV-2 Drives Development of COVID-19. Cell. 2020.
doi: https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.04.026