Trabajo Práctico #3: Medios de Cultivo - Siembra Y Aislamiento Antibiograma Objetivos

Facultad Cs de la Salud Cátedra Microbiología y Parasitología
Carrera: Enfermería 2023
Año 2023
TRABAJO PRÁCTICO N° 3: MEDIOS DE CULTIVO - SIEMBRA Y AISLAMIENTO
ANTIBIOGRAMA
OBJETIVOS
‐ Presentar los distintos tipos de medios de cultivo que se usan en microbiología y su clasificación.
‐ Relacionar la fisiología bacteriana y los requerimientos nutricionales con el medio de cultivo a utilizar.
‐ Practicar distintos tipos de siembras, observar e identificar las colonias desarrolladas en diferentes medios
selectivos/diferenciales.
‐ Realizar e Interpretar un antibiograma, reconocer la importancia de su utilización para evitar el desarrollo de
resistencia bacteriana.
INTRODUCCIÓN
A) MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo son soluciones acuosas que contienen nutrientes en concentraciones adecuadas,
proporcionando al microorganismo los elementos requeridos para su crecimiento y multiplicación. Su uso es esencial
en el Laboratorio de Microbiología, ya que permiten manipular, aislar e identificar las diferentes especies microbianas.
La composición precisa de un medio adecuado dependerá de la especie que se quiere cultivar ya que las necesidades
nutricionales varían considerablemente. Todos los microorganismos necesitan grandes cantidades de los
denominados macroelementos (C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg, Fe), pero muchos seres vivos también precisan para su
desarrollo alguno de los micro u oligoelementos (Mn, Mo, Zn, Cu, Co, Ni, V, B, Cl, Na, Si), o el aporte extra de factores
de crecimiento específicos (suero, sangre, extracto de levadura, etc.).
Para que los microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo debe tenerse en cuenta, además de la
composición, que las condiciones ambientales (temperatura, grado de humedad, presión de oxígeno, acidez o
alcalinidad, etc.) sean adecuadas.
Clasificación de los medios de cultivo

Los medios de cultivo pueden clasificarse según los siguientes criterios
Característica Clasificación
Líquidos
Consistencia Sólidos
Semisólido
Complejos o naturales
Origen Sintéticos
Semisintéticos
Comunes
Composición
Enriquecidos
Enriquecimiento o Multiplicación
Selectivos o Inhibidores
Utilización Diferenciales
o función Selectivo-diferenciales
Identificación
Transporte
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1) Según su consistencia o estado físico Año 2023
a) Líquidos: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa. Se usan cuando se desean obtener
suspensiones con un elevado número de microorganismos. Ej.: Caldo nutritivo, agua peptonada, etc.
b) Sólidos: Se preparan añadiendo un agente solidificante a un medio líquido (caldo) en una proporción de 1,5 g/100
mL. El agente solidificante por excelencia es el agar, un polisácarido producido por las algas que no resulta tóxico
para los microrganismos y tampoco puede ser metabolizado por éstas (no constituye un elemento nutritivo). Los
medios sólidos se utilizan con frecuencia en el aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en el
laboratorio. Ej.: Agar nutritivo.
c) Semisólidos: Se preparan a partir de medios líquidos, agregando un agente solidificante en una proporción menor
que para preparar medios sólidos, generalmente 0,75 g de agar /100 mL de caldo. Se utilizan para determinar la
movilidad de las especies en estudio. Ej.: agar SIM
2) Según su origen, esto es, de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes:
a) Naturales, complejos o indefinidos: Se preparan a partir de sustancias complejas de origen animal o vegetal
(lisados de caseína, carne, soja, levadura o cualquier sustancia altamente nutritiva) con el añadido de minerales y
otras sustancias. La composición química de estos medios de cultivo no se conoce exactamente, y por consiguiente
no es rigurosamente constante. Ej.: Caldo nutritivo, extracto de carne, extracto de levadura.
b) Sintéticos: Están compuestos por ingredientes químicamente puros y, por lo tanto, se puede conocer exactamente
su composición cuali y cuantitativa. Por su costo sólo se emplean en procedimientos especiales.
c) Semisintéticos: Están constituidos por algunas sustancias químicas cuya naturaleza y cantidad se conoce, junto
con sustancias de naturaleza y composición indefinida; como, por ejemplo, peptona como fuente de nitrógeno,
etc.
3) Según su composición:
a) Comunes o universales: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los microorganismos poco exigentes.
Se utilizan, en general, para el mantenimiento de las colonias microbianas. Ej.: agar o caldo nutritivo.
b) Enriquecidos: Además de las sustancias nutritivas normales, estos medios incorporan una serie de factores
(sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) indispensables para el crecimiento de microorganismos con grandes
exigencias nutricionales. Ej.: agar sangre, caldo infusión cerebro-corazón.
4) Según su función
a) Enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular e
inhiben el crecimiento de otros microorganismos presentes no deseados. Para lograr este efecto, estos medios
incluyen compuestos químicos específicos (inhibidores) o suponen la aplicación de condiciones físicas especiales
(temperatura, pH, fuerza iónica, iluminación, aireación, etc.). Ej.: agua peptonada alcalina, favorece el desarrollo
de Vibrio cholerae tolerante a pH elevado e inhibe otros microorganismos presentes
b) Selectivos: Son medios sólidos, que de manera similar a los medios de enriquecimiento, permiten el desarrollo de
ciertos microorganismos e impiden el crecimiento de otros. La selectividad se consigue alterando las condiciones
físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos inhibidores. Se utilizan para seleccionar y
aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Ej.: Agar Salmonella-Shigella (SS): medio selectivo para
recuperar Salmonella Spp y Shigella spp. El colorante verde brillante inhibe las bacterias Gram positivas mientras
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Año 2023de
que las sales biliares inhiben un gran número de Gram negativas menos enterobacterias. Las posibles colonias
Shigella aparecen amarillas y las posibles de Salmonella aparecen negras
c) Diferenciales: Estos medios de cultivo no contienen sustancias inhibidoras, por lo tanto permiten el crecimiento
de muchos tipos de microorganismos. Contienen en cambio sustancias indicadores de la actividad metabólica de
ciertos microorganismos que permite diferenciarlos. Ej., Agar Eosina azul de metileno (EMB), el agregado del
indicador de pH eosina amarilla y del colorante azul de metileno permite diferenciar bacilos Gram negativos
fermentadores y no fermentadores de lactosa. Las bacterias no fermentadoras dan colonias transparentes y las
fermentadoras rosa o rojas, y E. coli da colonias con brillo verde metálico.
d) Selectivos diferenciales: A veces se combinan en un mismo medio las características de los medios selectivos y
diferenciales. Ej., agar Mac Conkey, las sales biliares y el colorante cristal violeta inhiben el crecimiento de
bacterias Gram positivas, mientras que la lactosa y el indicador de pH rojo neutro permiten distinguir entre
bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.
e) Identificación: Son los medios destinados a comprobar alguna cualidad específica que puede servirnos para
identificar un microorganismo. Ej.: agar sulfhídrico-indol-movilidad (SIM), agar manitol salado.
f) De transporte: Se usan cuando transcurre un tiempo entre la toma de muestra y su procesamiento. Incluye
compuestos que aseguran la supervivencia de las células hasta que sean sembradas en un medio de cultivo
adecuado. Ej: Medio Stuart
B) SIEMBRA y AISLAMIENTO
Para analizar la población microbiana de una muestra o simplemente para manipular un microorganismo determinado
en el laboratorio, es necesario proveer un medio de cultivo y condiciones ambientales adecuados para el desarrollo
del/os microorganismo/s en estudio. En términos microbiológicos, la siembra consiste en introducir artificialmente
una porción demuestra (inóculo) en un medio adecuado con el fin de iniciar un cultivo. Luego, el medio de cultivo se
incuba a una temperatura adecuada según los requerimientos de los microorganismos presentes en el inóculo inicial.
A su vez, en la naturaleza, la mayoría de los microrganismos no se encuentran aislados, sino integrados en poblaciones
mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de
otros y trabajar con especies aisladas, esto es cultivos puros. Un cultivo puro es aquel que contiene un sólo tipo de
microorganismo y que procede generalmente de una sola célula. Para obtener cultivos puros a partir de una población
microbiana mixta, se utilizan las denominadas técnicas de aislamiento.
Para realizar la siembra y/o aislamiento de microorganismos se deben seguir técnicas asépticas. Esto supone:
‐ Trabajar con instrumentos y medios de cultivo previamente esterilizados.
‐ Procurar que el inóculo no se contamine, modifique o destruya. Para ello se trabaja cerca del mechero, flameando
las bocas de los tubos de ensayo, matraces, pipeta, etc. antes y después de su utilización, a pesar de estar
esterilizados previamente.
‐ Mantener los tubos, placas y todo el material estéril cerrados cuando no se usen.
‐ Cuidar que las condiciones ambientales durante el proceso sean lo más próximas a la esterilidad para evitar
contaminaciones durante el manejo del instrumental y de los medios de cultivo. Recordar que el aire siempre
contiene polvo en suspensión que generalmente lleva consigo una comunidad de microorganismos.
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TÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO Año 2023
La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando punta, ansa, hisopo o pipeta estéril según
el origen de la muestra. Es importante seleccionar el método de siembra adecuado, ya que la forma de inoculación
puede afectar la interpretación de los resultados.
1) Siembra en medio líquido

Se realiza en tubos o recipientes de mayor volumen (Erlenmeyer, etc.). La transferencia del inóculo puede hacerse con
asa o pipeta. El crecimiento se manifiesta por enturbiamiento, formación de película, o sedimento. Generalmente se
emplea con el fin de obtener suspensiones con elevado número de microorganismos.
Esquema de siembra aséptica en medio líquido con asa
2) Siembra en medio sólido

Puede realizarse en tubo o en placa.
Siembra en placa:
Consite en transferir la muestra a analizar a una placa con medio agarizado apropiado que provee una gran superficie
para el desarrollo del microorganismo en estudio. Si se extiende una mezcla de células sobre el agar, cada célula aislada
se multiplicará formando una agrupación macroscópicamente visible de microorganismos o colonia independiente.
Cada colonia representa un cultivo puro, por lo que se recurre a la siembra en placa cuando se desea logar el
crecimiento de colonias individuales con fines de aislamiento o recuento.
La inoculación en agar puede hacerse mediante estriado, extensión en superficie o difusión en profundidad. La técnica
de estriado sólo provee información cualitativa (aislamiento) mientras que la extensión en superficie y la siembra en
profundidad permiten el recuento de microorganismos (aislamiento y posibilidad de recuento).
• Estriado:
- Estriado múltiple en superficie: Mediante esta técnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que
contiene un elevado número de bacterias. Consiste en extender el inóculo cargado en un ansa estéril sobre un
cuadrante de la superficie de la placa de agar en forma de estrías muy juntas. Se gira la placa y se extiende de
nuevo por otro cuadrante de la placa haciendo nuevas estrías sin cargar nuevamente el asa. Este proceso se
repite sucesivamente, esterilizando (quemando al rojo vivo) y enfriando el asa entre cada diseminación hacia
un cuadrante. La placa se incuba en posición invertida.
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Esquema de siembra por estriado múltiple
-Estriado por agotamiento: Se trata de un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del
inóculo sobre un medio sólido. El asa inoculada se extiende con movimientos continuos de un lado a otro entre
ambos extremos de la placa. El objetivo también es obtener colonias distribuidas individualmente sobre la
superficie de la placa, pero esta forma de estriar se usa generalmente para material en el que se sospecha no
hay mezcla de bacterias.
Esquema del movimiento a realizar con el ansa en la siembra de estriado por agotamiento
• Extensión en superficie (o extensión en placa): esta siembra se lleva a cabo colocando un inóculo de la muestra
(generalmente 0.1 mL) con pipeta estéril en el centro de la placa que contiene agar previamente solidificado.
Inmediatamente la muestra se distribuye con la ayuda de una espátula de Drigalsky sobre toda la superficie del
agar. Una vez secas, las placas se incuban invertidas. Este método permite el desarrollo en superficie de las
colonias aisladas, facilitando el estudio del aspecto de la colonia. Tiene la desventaja de permitir volúmenes
pequeños de siembra, lo que puede en ocasiones traducirse en un error al momento del recuento.
• Difusión en profundidad (o vertido en placa):En este caso el inoculo (generalmente 1 mL) se dispersa primero en
una placa de Petri vacía y se agrega a continuación 10-15 mL de agar fundido tibio y se mezcla uniformemente
para logar una buena distribución de la muestra sembrada. Se deja solidificar y se incuban las placas invertidas.
Las desventajas que presenta esta técnica son que no permite su aplicación con microorganismos sensibles al calor
ya podrían ser dañados al agregar el agar tibio y, que algunos medios diferenciales requieren el desarrollo en
superficie de las colonias para su identificación.
Extensión
en
superficie
Difusión en profundidad
Esquema de las técnicas de siembra por extensión en superficie y difusión en profundidad
Siembra en tubos:
Estas técnicas de siembra en general se emplean para inocular cultivos puros de microorganismos con fines de
identificación, esto es para caracterización según sus propiedades bioquímicas.
• Tubos con agar inclinado: El agar se solidifica inclinando los tubos para formar un "pico de flauta". Estos se inoculan
con asa aguja atravesando primero el fondo del agar y luego se estría sobre la superficie del agar con un
movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.
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•
Año 2023
Tubos sin inclinar: Se siembran introduciendo un asa aguja en el centro del agar. También se llama siembra por
punción o picadura.
• Tubos con agar semisólido: es adecuado para pruebas de movilidad, y se siembra con ansa en punta por punción.
Es importante que el ansa de inoculación sea retirada por el mismo camino que se usó para atravesar el medio, y
evitar errores de interpretación posteriores.
Siembra en pico de
Siembra por
flauta
picadura
C) ANTIBIOGRAMA
La resistencia de las bacterias es el principal obstáculo para la eficacia terapéutica de los antibióticos, pues no sólo
puede anular la acción curativa si se manifiesta en el curso del tratamiento, sino que tiene a la larga consecuencias
todavía más graves para el conjunto de la población, ya que provoca la desaparición de las cepas susceptibles y la
propagación de las resistentes. Ese es el motivo por el cual la determinación de la sensibilidad de las bacterias a los
antibióticos ha adquirido tanta importancia y es indispensable para hacer un uso racional de los antibióticos y para
preservar la eficacia de este grupo tan valioso de agentes terapéuticos.
Los antibiogramas son métodos que determinan in vitro la susceptibilidad de los microorganismos a una variedad
de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio específicas y estandarizadas. La meta principal del
estudio de susceptibilidad es proveer al clínico algunas recomendaciones sobre la terapia que puede ser más apropiada
en pacientes con una infección específica. No obstante, la correlación exacta entre los resultados in vitro y la respuesta
clínica es muchas veces difícil de predecir, ya que existen numerosos factores que influencian la interacción de los
agentes antimicrobianos y los microorganismos en un determinado paciente.
En el siguiente trabajo de laboratorio se va a practicar la siembra de distintas muestras en diferentes medios
selectivos/diferenciales. A su vez se va a probar la susceptibilidad de distintas cepas bacterianas aisladas de
muestras de orina, frente a antibióticos de uso clínico.
PARTE EXPERIMENTAL
1) Prueba de susceptibilidad a antimicrobianos (Antibiograma) por difusión en agar, para bacterias aisladas de un
urocultivo
En el estudio de las infecciones urinarias es muy importante solicitar urocultivo y antibiograma, los cuales
brindarán un panorama más claro sobre las características de la infección. El urocultivo, brindará el diagnóstico
del agente causal, mientras que el antibiograma definirá la susceptibilidad al tratamiento de este microorganismo.
Vamos a realizar un antibiograma mediante la técnica de difusión en agar, de microorganismos que fueron aislados
de urocultivos de pacientes pediátricos diagnosticados con infección urinaria. Se necesita determinar qué
antibiótico será el adecuado para cada paciente. Los aislamientos fueron identificados como: Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, Pseudomonas sp. y Enterococcus sp. Se trabajará con los discos múltiples IU pediátrico
(para muestras de orina), de Laboratorios Brizuela cuya composición es:
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Año 2023
Técnica de Difusión en Agar: consiste en inocular el microorganismo en la superficie de una placa de agar, sobre el
cual se colocan discos impregnados con una concentración conocida de distintos antibióticos. Las placas se incuban
por 16-18 horas a 35- 37°C. Durante la incubación, el antibiótico difunde radialmente desde el disco a través del agar,
por lo que su concentración va disminuyendo a medida que se aleja del disco. La formación de zonas sin crecimiento
(halos de inhibición) alrededor de los discos de antibióticos se debe a la difusión de estos antibióticos en el agar donde
se sembró la cepa sensible. El tamaño del halo dependerá del efecto de cada antibiótico sobre las distintas cepas, y en
caso de que la cepa sea resistente a un antibiótico puede no observarse halo. El diámetro del área de inhibición
alrededor del disco puede ser convertido a las categorías de sensible, intermedio o resistente (S, I, o R) de acuerdo a
Normas CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute).
Procedimiento:
- Fundir el medio de cultivo (agar Müller-Hinton) y dejarlo enfriar a 45-50°C.
- Verter asépticamente 20 mL de medio fundido y luego secar la placa al lado del mechero antes de la siembra.
- Inocular la placa con la suspensión bacteriana entregada por el docente. Para realizar la siembra, embeber un hisopo
estéril en la suspensión, eliminar el exceso de líquido haciendo rotar el hisopo contra la pared del tubo y aplicar sobre
la superficie de la placa efectuando un barrido en tres direcciones, girando el hisopo en cada dirección.
- Tapar la placa y dejar secar el inóculo por 3 a 5 minutos.
- Colocar la plancha de multidiscos de antibióticos IU pediátrico sobre el agar usando pinzas estériles. Oprimir los
discos suavemente con una pinza para asegurar un buen contacto con el medio de cultivo.
- Antes de los 15 minutos de aplicado el disco, incubar a 37°C durante 24 h.
- Luego de la incubación proceder a la lectura de los halos de inhibición. Con la ayuda de una regla medir el diámetro
de la zona de inhibición completa. Esta medida se hace preferentemente desde el exterior de la placa, sin abrir la
tapa.
- Los resultados se interpretan de acuerdo con la tabla del Anexo 1.
7
2) Siembra por estriado en medio selectivo/diferencial Año 2023
Con el fin de confirmar si las muestras corresponden a los microorganismos descriptos en la actividad anterior, se va
a llevar a cabo la siembra en medio selectivo/diferencial y se observarán las características de las colonias
desarrolladas.
Procedimiento
- Tomar con el ansa un inóculo de la suspensión bacteriana y estriar en 5 direcciones (estriado múltiple), flameando
el ansa entre cada rotación sin volver a cargarla.
- Tapar la placa y dejar secar el inóculo.
- Invertir las placas e incubar a 37°C por 24-48 h
- Observar el desarrollo de colonias, y determinar de qué microorganismo se trata en base sus características. Con
ayuda del Anexo 2.
3) Siembra en medios generales

- Hacer una impresión de las manos lavadas y sin lavar sobre una placa de agar recuento en placa (ARP), que es un
medio general para recuento de microorganismos aerobios mesófilos.
- Incubar la placa en estufa a 37°C durante 24-48 h.
- Observe cantidad y características de las colonias desarrolladas e identifique diferencias entre la placa sembrada con
las manos lavadas y sin lavar.
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INFORME FINAL Año 2023
1) Antibiograma
Bacteria utilizada:
Antibiótico Diámetro del halo Interpretación

(mm) (S: sensible,
R: resistente,
I: intermedio)
AN
GM
CF
SXT
FT
Conclusión:
2) Siembra en medios selectivos
Bacteria utilizada:
Características de las colonias observadas:
Conclusión:
3) Siembra en medios generales
Bacteria utilizada:
Crecimiento en la placa
Mano sucia Mano limpia
Conclusiones:
BIBLIOGRAFÍA
• Manual de Instrucción para Discos Múltiples. Brizuela-Lab
• Prats G. (2007). Microbiología Clínica. Argentina, Ed. Panamericana.
• Tortora G, Funke B, Case C. (2007). Introducción a la Microbiología. Argentina, Ed. Panamericana.
9
Manual de Instrucción Brizuela-Lab.
TABLA DE INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Método de difusión en agar (Normas CLSI - Año 2015)
(Para antimicrobianos contenidos en Discos Múltiples y Monodiscos de Brizuela-Lab.)
CARGA RESISTENTE INTERMEDIO SENSIBLE

AGENTE ANTIMICROBIANO <o= >o=
(mm) (mm) (mm)
AMICACINA
Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter spp, Staphylococcus spp. 30 µg 14 15-16 17
AMOXICILINA/CLAVULANICO
Haemophilus spp. 20/10 ug 19 - 20
Enterobacteriaceae. 13 14-17 18
AMPICILINA
Enterococcus spp. 10 µg 16 - 17
Haemophilus spp. 18 19-21 22
Streptococcus spp- Grupo β-hemolítico. - - 24
AMPICILINA/ SULBACTAM
Enterobacteriaceae . 10/10 µg 11 12-14 15
Haemophilus spp. 19 - 20
Acinetobacter spp. 11 12-14 15
AZTREONAM
Enterobacteriaceae. 30 µg 17 18-20 21
Pseudomonas aeruginosa. 15 16-21 22
Haemophilus spp. - - 26
CEFALOTINA 30 ug
CEFOTAXIMA
Haemophilus spp. 30 ug - - 26
Neisseria gonorrhoeae - - 31
Streptococcus spp Grupo β-Hemolítico. - - 24
Streptococcus spp Grupo Viridans. 25 26-27 28
Neisseria meningitidis. - - 34
CEFTAZIDIMA
Enterobacteriaceae, Burkholderia cepacia. 17 18-20 21
Pseudomonas aeruginosa , Acinetobacter spp. 30 ug 14 15-17 18
Neisseria gonorrhoeae. - - 31
CEFTRIAXONA
Haemophilus spp. 30 ug - - 26
Neisseria gonorrhoeae. - - 35
Streptococcus spp Grupo Viridans. 24 25-26 27
Neisseria meningitidis. - - 34
Streptococcus spp. Grupo β-Hemolítico. - - 24
CEFUROXIMA (Parenteral)
Neisseria gonorrhoeae. 30 ug 25 26-30 31
CEFUROXIMA (Oral)
CIPROFLOXACINA
Enterobacteriaceae (Excepto Salmonella spp) ,Pseudomonas aeruginosa , Acinetobacter spp ,
Staphylococcus spp , Enterococcus spp. 15 16-20 21
Página - 3 -
Salmonella spp. 5 ug 20 21-30 31

Neisseria gonorrhoeae. 27 28-40 41
Neisseria meningitidis. 32 33-34 35
CLINDAMICINA
Staphylococcus spp. 14 15-20 21
2 ug
Streptococcus pneumonia, Streptococcus spp. Grupo β-Hemolítico, Streptococcus spp. Grupo Viri-
dans. 15 16-18 19
CLORAMFENICOL
Enterobacteriaceae, Enterococcus spp, Staphylococcus spp. 12 13-17 18
Streptococcus pneumoniae 30 ug 20 - 21
Streptococcus spp. Grupo β-Hemolítico, Streptococcus spp. Grupo Viridans. 17 18-20 21
COLISTINA
Pseudomonas aeruginosa. 10 ug 10 - 11
ERITROMICINA
Staphylococcus spp, Enterococcus spp. 15 ug 13 14-22 23
Streptococcus pneumoniae , Streptococcus spp Grupo β-Hemolítico, Streptococcus spp Grupo 15 ug 15 16-20 21
Viridans.
ESTREPTOMICINA ALTA CARGA
Enterococcus spp (Alta Resistencia). 300 ug 6 7-9 10
FOSFOMICINA () ()

Enterobacteriaceae. 50 ug 12 13-14 15
FOSFOMICINA ALTA CARGA ( )
Enterobacteriaceae (Sólo E.coli de tracto urinario). 200 ug 12 13-15 16
IMIPENEM
Pseudomonas aeruginosa. 10 ug 15 16-18 19
GENTAMICINA
Enterobacteriaceae (Excepto Salmonella spp y Shigella spp) Pseudomonas aeruginosa, 10 ug 12 13-14 15
Acinetobacter spp, Staphylococcus spp.
GENTAMICINA ALTA CARGA

Enterococcus spp (Alta Resistencia). 120 ug 6 7-9 10
NALIDIXICO ACIDO
Enterobacteriaceae. 30 ug 13 14-18 19
NITROFURANTOINA
Enterobacteriaceae, Staphylococcus spp, Enterococcus spp. 300 ug 14 15-16 17
NORFLOXACINA
Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus spp, Enterococcus spp. 10 ug 12 13-16 17
OXACILINA
Streptococcus pneumoniae. 1 ug - - 20
PENICILINA
Staphylococcus spp. 28 - 29
Enterococcus spp. 10 U. 14 - 15
Neisseria gonorrhoeae. 26 27-46 47
Streptococcus spp Grupo β-Hemolítico. - - 24
PIPERACILINA
Enterobacteriaceae, Acinetobacter spp. 100 ug 17 18-20 21
Pseudomonas aeruginosa 14 15-20 21
PIPERACILINA/TAZOBACTAM
Enterobacteriaceae, Acinetobacter spp. 100/10 ug 17 18-20 21
Pseudomonas aeruginosa. 14 18-20 21
RIFAMPICINA
Página - 4 -
Staphylococcus ssp, Enterococcus spp, Haemophilus spp. 16 17-19 20

Streptococcus pneumoniae. 5 ug 16 17-18 19
TETRACICLINA
Enterobacteriaceae, Acinetobacter spp. 11 12-14 15
Staphylococcus ssp, Enterococcus spp. 14 15-18 19
Neisseria gonorrhoeae. 30 ug 30 31-37 38
Streptococcus pneumoniae. 24 25-27 28
Streptococcus spp Grupo β-Hemolítico, Streptococcus spp Grupo Viridans. 18 19-22 23
TRIMETOPRIMA/SULFAMETOXAZOL
Enterobacteriaceae, Acinetobacter spp, Burkholderia cepacia complex, Stenotrophomonas mal-
tophilia, Staphylococcus ssp, Haemophilus spp. 1.25/ 23.75 μg 10 11-15 16
Streptococcus pneumoniae. 15 16-18 19
VANCOMICINA
Enterococcus spp. 30 ug 14 15-16 17
Streptococcus spp. Grupo β-Hemolítico, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus spp Grupo - - 17
Viridans.
() Contiene 50 ug de glucosa-6-fosfato.
() No hay información por parte del CLSI, para este antimicrobiano, los datos fueron tomados de Pateran y col. ( J Infect Dev Ctries 2012; 6(5):452-456.)
Página - 5 -
Anexo 2: MEDIOS A UTILIZAR EN EL TP Año 2023

Agar Manitol Salado
El agar Manitol Salado es un medio altamente selectivo debido a su alta
concentración salina y diferencial debido a la capacidad de fermentación de manitol
por los microorganismos.
Este medio contiene extracto de carne y la peptona como fuentes de carbono,
nitrógeno, vitaminas y minerales; manitol como hidrato de carbono fermentable;
cloruro de sodio en altas concentraciones que actúa como agente selectivo inhibiendo
el desarrollo de flora acompañante, y rojo fenol como indicador de pH.
Todos los estafilococos son capaces de crecer en altas concentraciones de sal. A su
vez, los estafilococos coagulasa positiva son capaces de fermentar el manitol
acidificando el medio y las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, en cambio, no fermentan el manitol
y presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura.
Colonias típicas de Staphylococcus aureus coagulasa positiva en agar Manitol Salado (AMS)
Agar EMB
Colonias incoloras Lactosa (-) El Agar Eosina Azul de Metileno (EMB) es utilizado para la
diferenciación de distintas Enterobacterias en base a la
capacidad de fermentación de la lactosa y sacarosa y en la
producción de brillo metálico. Así:
- Fermentadores de lactosa (Lactosa positivas), colonias negro
verdosas con brillo metálico (E. coli)
- Productores débiles de ácido, colonias violetas (Klebsiella,
Brillo verde Enterobacter, Serratia, Hafnia)
Colonias violetas. metálico. Lactosa (+) - No fermentadores de lactosa (Lactosa negativas), colonias
Lactosa (+) débil transparentes (Salmonella, Shigella y Proteus)
10

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Facultad Cs de la Salud Cátedra Microbiología y Parasitología

Carrera: Enfermería 2023

Clasificación de los medios de cultivo

1) Según su consistencia o estado físico Año 2023

2) Según su origen, esto es, de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes:

TÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO Año 2023

1) Siembra en medio líquido

Esquema de siembra aséptica en medio líquido con asa

2) Siembra en medio sólido

Esquema de las técnicas de siembra por extensión en superficie y difusión en profundidad

2) Siembra por estriado en medio selectivo/diferencial Año 2023

3) Siembra en medios generales

INFORME FINAL Año 2023

Antibiótico Diámetro del halo Interpretación

2) Siembra en medios selectivos

Características de las colonias observadas:

3) Siembra en medios generales

Mano sucia Mano limpia

TABLA DE INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

CARGA RESISTENTE INTERMEDIO SENSIBLE

Salmonella spp. 5 ug 20 21-30 31

FOSFOMICINA () ()

GENTAMICINA ALTA CARGA

Staphylococcus ssp, Enterococcus spp, Haemophilus spp. 16 17-19 20

Anexo 2: MEDIOS A UTILIZAR EN EL TP Año 2023

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